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奶牛隐性乳房炎三种致病菌的多重PCR检测方法的建立
被引量：
10
1
作者
王宇
李碧
+1 位作者
阳明贤
左之才
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2019年第1期20-29,共10页
为建立快速并能同时检测无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌3种奶牛隐性乳房炎致病菌的方法,根据无乳链球菌16S r RNA基因、金黄色葡萄球菌NUC耐热基因、绿脓杆菌ETA基因序列并参考文献各合成一对特异性引物,通过对PCR反应各项参数...
为建立快速并能同时检测无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌3种奶牛隐性乳房炎致病菌的方法,根据无乳链球菌16S r RNA基因、金黄色葡萄球菌NUC耐热基因、绿脓杆菌ETA基因序列并参考文献各合成一对特异性引物,通过对PCR反应各项参数的调整优化,建立多重PCR检测体系,并同时进行灵敏性试验和特异性试验。结果显示:该检测方法可以同时扩增出无乳链球菌270 bp、金黄色葡萄球菌153 bp和绿脓杆菌375 bp的特异性片段以及细菌16S rRNA 1500 bp的通用片段,而对于其他的6种病原菌只能扩增出1 500 bp的通用片段,具有较强的特异性。三种特异性引物扩增条带与Gen Bank上的细菌基因序列同源性为99%。增菌培养24h,该体系对无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌的最低灵敏度分别为8×10~4、4×10~4、1. 5×10~5CFU·m L^(-1)。本研究建立的检测方法能够完成无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌的快速检测,对于生产上奶牛隐性乳房炎的鉴别诊断和快速检测具有重大意义。
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关键词
奶牛隐性乳房炎
无乳链球菌
金黄色葡萄球菌
绿脓杆菌
多重PCR
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职称材料
牛抵抗素对牛肺泡巨噬细胞TLR4/MyD88非依赖信号通路基因表达的影响
被引量：
4
2
作者
阳明贤
左之才
+1 位作者
李碧
王宇
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2019年第3期379-383,共5页
旨在探究牛抵抗素通过TLR4/MyD88非依赖信号通路诱发牛肺泡巨噬细胞的相关炎症反应机理。使用100 ng·mL^(-1)终浓度牛抵抗素诱导牛肺泡巨噬细胞,分别在0、1.5、3.0、6.0、12.0、24.0 h时采用qRT-PCR检测TLR4/MyD88非依赖信号通路...
旨在探究牛抵抗素通过TLR4/MyD88非依赖信号通路诱发牛肺泡巨噬细胞的相关炎症反应机理。使用100 ng·mL^(-1)终浓度牛抵抗素诱导牛肺泡巨噬细胞,分别在0、1.5、3.0、6.0、12.0、24.0 h时采用qRT-PCR检测TLR4/MyD88非依赖信号通路相关基因(TLR4、TRAM、NF-κB)mRNA水平表达量,通过ELISA法检测下游IL-6、1L-1β、TNF-α等促炎细胞因子表达水平。结果显示,100 ng·mL^(-1)牛抵抗素处理牛肺泡巨噬细胞后,TLR4、TRAM、NF-κB基因表达量于6.0 h时极显著上调(P<0.01),诱导12.0 h时,相关基因表达量达到最高;IL-6、1L-1β、TNF-α等促炎细胞因子于1.5 h表达量极显著上调(P<0.01),且均存在时间依赖效应。抵抗素诱导牛肺泡巨噬细胞后,可激活TLR4/MyD88非依赖信号通路,通过信号传递,释放大量促炎细胞因子,引起肺部炎症。
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关键词
牛抵抗素
牛肺泡巨噬细胞
TLR4/MyD88非依赖信号通路
促炎细胞因子
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职称材料
抵抗素通过TLR4/MyD88依赖途径促进牛肺泡巨噬细胞炎症因子产生
被引量：
5
3
作者
岳梦佳
左之才
+3 位作者
阳明贤
李碧
岑垚
姚彩霞
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第19期2305-2309,共5页
目的:探讨牛抵抗素的促炎效应以及与TLR4/MyD88依赖途径的联系。方法:本试验采用终浓度为100 ng/ml的牛抵抗素诱导牛肺泡巨噬细胞0、1.5、3、6、12、24 h,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测TLR4/MyD88依赖途径信号通路相关基因(T...
目的:探讨牛抵抗素的促炎效应以及与TLR4/MyD88依赖途径的联系。方法:本试验采用终浓度为100 ng/ml的牛抵抗素诱导牛肺泡巨噬细胞0、1.5、3、6、12、24 h,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测TLR4/MyD88依赖途径信号通路相关基因(TLR4、MyD88、IRAK4、NF-κB)mRNA表达量,免疫印迹法(Western blot)检测抵抗素诱导12 h后上述蛋白表达,酶联免疫分析法(ELISA)检测细胞上清中细胞因子IL-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平。结果:牛肺泡巨噬细胞经100 ng/ml终浓度抵抗素诱导后,TLR4、MyD88、IRAK4、NF-κB基因表达量6 h极显著上调(P<0.01),12 h达到峰值;蛋白表达量在12 h极显著上调(P<0.01);促炎细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α于1.5 h后极显著升高且呈时间依赖效应(P<0.01)。结论:牛抵抗素可诱导牛肺泡巨噬细胞释放IL-6、IL-1β和TNF-α等促炎细胞因子,促进细胞炎症反应,这可能与TLR4/MyD88依赖途径信号通路有关。
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关键词
抵抗素
TLR4/MyD88依赖途径
牛肺泡巨噬细胞
促炎细胞因子
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职称材料
题名
奶牛隐性乳房炎三种致病菌的多重PCR检测方法的建立
被引量：
10
1
作者
王宇
李碧
阳明贤
左之才
机构
四川农业大学动物医学院环境公害与动物疾病四川省高校重点实验室动物疫病与人类健康四川省重点实验室
出处
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2019年第1期20-29,共10页
基金
四川省科技厅重点研发项目(18ZDYE3215)
优质肉牛高效安全生产技术研发与产业化示范
现代农业产业技术体系四川肉牛创新团队资助项目(035Z2036)
文摘
为建立快速并能同时检测无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌3种奶牛隐性乳房炎致病菌的方法,根据无乳链球菌16S r RNA基因、金黄色葡萄球菌NUC耐热基因、绿脓杆菌ETA基因序列并参考文献各合成一对特异性引物,通过对PCR反应各项参数的调整优化,建立多重PCR检测体系,并同时进行灵敏性试验和特异性试验。结果显示:该检测方法可以同时扩增出无乳链球菌270 bp、金黄色葡萄球菌153 bp和绿脓杆菌375 bp的特异性片段以及细菌16S rRNA 1500 bp的通用片段,而对于其他的6种病原菌只能扩增出1 500 bp的通用片段,具有较强的特异性。三种特异性引物扩增条带与Gen Bank上的细菌基因序列同源性为99%。增菌培养24h,该体系对无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌的最低灵敏度分别为8×10~4、4×10~4、1. 5×10~5CFU·m L^(-1)。本研究建立的检测方法能够完成无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌的快速检测,对于生产上奶牛隐性乳房炎的鉴别诊断和快速检测具有重大意义。
关键词
奶牛隐性乳房炎
无乳链球菌
金黄色葡萄球菌
绿脓杆菌
多重PCR
Keywords
dairy subclinical mastitis
Streptococcus agalactiae
Staphylococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa
multiplex PCR
分类号
S858.24 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
牛抵抗素对牛肺泡巨噬细胞TLR4/MyD88非依赖信号通路基因表达的影响
被引量：
4
2
作者
阳明贤
左之才
李碧
王宇
机构
四川农业大学动物医学院环境公害与动物疾病四川省高校重点实验室动物疫病与人类健康四川省重点实验室
出处
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2019年第3期379-383,共5页
基金
国家重点研发计划(2018YFD0501800)
四川省科技计划(2018NZ002)
国家现代农业产业技术体系四川省创新团队(035Z2036)
文摘
旨在探究牛抵抗素通过TLR4/MyD88非依赖信号通路诱发牛肺泡巨噬细胞的相关炎症反应机理。使用100 ng·mL^(-1)终浓度牛抵抗素诱导牛肺泡巨噬细胞,分别在0、1.5、3.0、6.0、12.0、24.0 h时采用qRT-PCR检测TLR4/MyD88非依赖信号通路相关基因(TLR4、TRAM、NF-κB)mRNA水平表达量,通过ELISA法检测下游IL-6、1L-1β、TNF-α等促炎细胞因子表达水平。结果显示,100 ng·mL^(-1)牛抵抗素处理牛肺泡巨噬细胞后,TLR4、TRAM、NF-κB基因表达量于6.0 h时极显著上调(P<0.01),诱导12.0 h时,相关基因表达量达到最高;IL-6、1L-1β、TNF-α等促炎细胞因子于1.5 h表达量极显著上调(P<0.01),且均存在时间依赖效应。抵抗素诱导牛肺泡巨噬细胞后,可激活TLR4/MyD88非依赖信号通路,通过信号传递,释放大量促炎细胞因子,引起肺部炎症。
关键词
牛抵抗素
牛肺泡巨噬细胞
TLR4/MyD88非依赖信号通路
促炎细胞因子
Keywords
resistin
bovine alveolar macrophages
TLR4-MyD88 inpendent signal pathway
proinflammatory cytokine
分类号
S852 [农业科学—基础兽医学]
R563.1 [医药卫生—呼吸系统]
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职称材料
题名
抵抗素通过TLR4/MyD88依赖途径促进牛肺泡巨噬细胞炎症因子产生
被引量：
5
3
作者
岳梦佳
左之才
阳明贤
李碧
岑垚
姚彩霞
机构
四川农业大学动物医学院环境公害与动物疾病四川省高校重点实验室动物疫病与人类健康四川省重点实验室
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第19期2305-2309,共5页
基金
国家重点研发计划项目(2018YFD0501800)
四川省科技计划项目(2018NZ0002)
国家现代农业产业技术体系四川肉牛创新团队项目(035Z2036)资助
文摘
目的:探讨牛抵抗素的促炎效应以及与TLR4/MyD88依赖途径的联系。方法:本试验采用终浓度为100 ng/ml的牛抵抗素诱导牛肺泡巨噬细胞0、1.5、3、6、12、24 h,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测TLR4/MyD88依赖途径信号通路相关基因(TLR4、MyD88、IRAK4、NF-κB)mRNA表达量,免疫印迹法(Western blot)检测抵抗素诱导12 h后上述蛋白表达,酶联免疫分析法(ELISA)检测细胞上清中细胞因子IL-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平。结果:牛肺泡巨噬细胞经100 ng/ml终浓度抵抗素诱导后,TLR4、MyD88、IRAK4、NF-κB基因表达量6 h极显著上调(P<0.01),12 h达到峰值;蛋白表达量在12 h极显著上调(P<0.01);促炎细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α于1.5 h后极显著升高且呈时间依赖效应(P<0.01)。结论:牛抵抗素可诱导牛肺泡巨噬细胞释放IL-6、IL-1β和TNF-α等促炎细胞因子,促进细胞炎症反应,这可能与TLR4/MyD88依赖途径信号通路有关。
关键词
抵抗素
TLR4/MyD88依赖途径
牛肺泡巨噬细胞
促炎细胞因子
Keywords
Resistin
TLR4/MyD88 signaling dependence pathway
Bovine alveolar macrophages
Proinflammatory cytokine
分类号
R392.1 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
奶牛隐性乳房炎三种致病菌的多重PCR检测方法的建立
王宇
李碧
阳明贤
左之才
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2019
10
在线阅读
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职称材料
2
牛抵抗素对牛肺泡巨噬细胞TLR4/MyD88非依赖信号通路基因表达的影响
阳明贤
左之才
李碧
王宇
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2019
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
抵抗素通过TLR4/MyD88依赖途径促进牛肺泡巨噬细胞炎症因子产生
岳梦佳
左之才
阳明贤
李碧
岑垚
姚彩霞
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019
5
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职称材料
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