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猪繁殖与呼吸综合征病毒LAMP检测方法的建立
被引量:
9
1
作者
罗忠永
王印
杨泽晓
《动物医学进展》
北大核心
2016年第3期1-5,共5页
应用通用反转录试剂盒和环介导等温核酸扩增技术(LAMP)建立了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速检测方法,同时评价了该检测方法的特异性、稳定性和灵敏度。结果表明,根据猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白基因保守区设计的LAMP引物能够在6...
应用通用反转录试剂盒和环介导等温核酸扩增技术(LAMP)建立了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速检测方法,同时评价了该检测方法的特异性、稳定性和灵敏度。结果表明,根据猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白基因保守区设计的LAMP引物能够在64.5℃60min内实现对目标核酸片段的大量扩增,检测结果可通过直接观察反应副产物(焦磷酸镁)进行判读,该检测系统具有很高的特异性,与猪瘟病毒、猪乙型脑炎病毒等均无交叉反应;通过PRRSV不同毒株疫苗、模拟样品和临床样品确定,该检测系统具有很好的稳定性;通过质粒确定该检测系统可以检测到10拷贝/μL的病毒核酸模板。结果表明成功建立了猪繁殖与呼吸综合征病毒LAMP快速检测方法,为临床提供了一种很好的检测手段。
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关键词
猪繁殖与呼吸综合征病毒
环介导等温核酸扩增
检测
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职称材料
SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测PRRSV方法的建立
被引量:
6
2
作者
罗忠永
王印
杨泽晓
《动物医学进展》
北大核心
2016年第4期1-5,共5页
根据编码PRRSV M蛋白的基因序列设计用于SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR扩增的引物,通过温度梯度法优化反应体系;以不同科属常见猪致病性RNA病毒疫苗验证该检测方法的特异性,参考国内PRRSV分子流行病学特征,选择基因型代表性的2株疫苗株...
根据编码PRRSV M蛋白的基因序列设计用于SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR扩增的引物,通过温度梯度法优化反应体系;以不同科属常见猪致病性RNA病毒疫苗验证该检测方法的特异性,参考国内PRRSV分子流行病学特征,选择基因型代表性的2株疫苗株验证该检测方法的稳定性;以10倍梯度稀释的质粒为标准品扩增并构建标准曲线,探究该检测方法的灵敏度,随机挑取10份保存的PRRSV阳性病料和10份阴性病料同时使用农业部推荐的PRRSV RT-PCR检疫标准方法和建立的方法进行检测,以确定2种方法检测的符合率。结果显示,使用建立的方法可以在54.4℃80min内完成对PRRSV的检测,该检测方法具有特异性和稳定性;检测灵敏度为6.8×10拷贝/μL;以Ct值为横坐标,扩增序列拷贝浓度的对数值为纵坐标,得到标准曲线,方程为y=-3.411 x+39.002,R2=0.999;对随机挑取的10份PRRSV阳性病料和10份阴性病料进行检测,结果2种方法检测结果的符合率100%。结果表明,成功建立了PRRSV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR快速检测方法,为临床提供了一种很好的检测手段。
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关键词
猪繁殖与呼吸综合征病毒
M蛋白
SYBR
GreenⅠ实时荧光定量PCR
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职称材料
实时荧光定量PCR模板核酸提取方法的比较
被引量:
2
3
作者
罗忠永
王印
杨泽晓
《动物医学进展》
北大核心
2016年第11期53-56,共4页
对病料核酸提取前处理方法进行优化,选择酚/氯仿法、试剂盒提取法和DNA/RNA同提取法,比较提取效果,为实验室核酸提取提供参考。配制模拟样品,通过实时荧光定量PCR比较3种方法提取效果。结果表明,提取纯度为试剂盒提取法>酚/氯仿法>...
对病料核酸提取前处理方法进行优化,选择酚/氯仿法、试剂盒提取法和DNA/RNA同提取法,比较提取效果,为实验室核酸提取提供参考。配制模拟样品,通过实时荧光定量PCR比较3种方法提取效果。结果表明,提取纯度为试剂盒提取法>酚/氯仿法>DNA/RNA同提取法。提取效率为酚/氯仿法>DNA/RNA同提取法>试剂盒提取法。表明各提取方法效果差异显著(P<0.01),为实验室核酸提取提供了参考。
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关键词
核酸提取方法
实时荧光定量PCR
提取效果
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职称材料
题名
猪繁殖与呼吸综合征病毒LAMP检测方法的建立
被引量:
9
1
作者
罗忠永
王印
杨泽晓
机构
四川农业大学动物医学院动物检疫实验室
出处
《动物医学进展》
北大核心
2016年第3期1-5,共5页
基金
"十二五"国家科技支持计划项目(2013BAD12B04)
文摘
应用通用反转录试剂盒和环介导等温核酸扩增技术(LAMP)建立了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速检测方法,同时评价了该检测方法的特异性、稳定性和灵敏度。结果表明,根据猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白基因保守区设计的LAMP引物能够在64.5℃60min内实现对目标核酸片段的大量扩增,检测结果可通过直接观察反应副产物(焦磷酸镁)进行判读,该检测系统具有很高的特异性,与猪瘟病毒、猪乙型脑炎病毒等均无交叉反应;通过PRRSV不同毒株疫苗、模拟样品和临床样品确定,该检测系统具有很好的稳定性;通过质粒确定该检测系统可以检测到10拷贝/μL的病毒核酸模板。结果表明成功建立了猪繁殖与呼吸综合征病毒LAMP快速检测方法,为临床提供了一种很好的检测手段。
关键词
猪繁殖与呼吸综合征病毒
环介导等温核酸扩增
检测
Keywords
PRRSV
LAMP
detection
分类号
S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测PRRSV方法的建立
被引量:
6
2
作者
罗忠永
王印
杨泽晓
机构
四川农业大学动物医学院动物检疫实验室
出处
《动物医学进展》
北大核心
2016年第4期1-5,共5页
基金
"十二五"国家科技支持计划项目(2013BAD12B04)
文摘
根据编码PRRSV M蛋白的基因序列设计用于SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR扩增的引物,通过温度梯度法优化反应体系;以不同科属常见猪致病性RNA病毒疫苗验证该检测方法的特异性,参考国内PRRSV分子流行病学特征,选择基因型代表性的2株疫苗株验证该检测方法的稳定性;以10倍梯度稀释的质粒为标准品扩增并构建标准曲线,探究该检测方法的灵敏度,随机挑取10份保存的PRRSV阳性病料和10份阴性病料同时使用农业部推荐的PRRSV RT-PCR检疫标准方法和建立的方法进行检测,以确定2种方法检测的符合率。结果显示,使用建立的方法可以在54.4℃80min内完成对PRRSV的检测,该检测方法具有特异性和稳定性;检测灵敏度为6.8×10拷贝/μL;以Ct值为横坐标,扩增序列拷贝浓度的对数值为纵坐标,得到标准曲线,方程为y=-3.411 x+39.002,R2=0.999;对随机挑取的10份PRRSV阳性病料和10份阴性病料进行检测,结果2种方法检测结果的符合率100%。结果表明,成功建立了PRRSV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR快速检测方法,为临床提供了一种很好的检测手段。
关键词
猪繁殖与呼吸综合征病毒
M蛋白
SYBR
GreenⅠ实时荧光定量PCR
Keywords
PRRSV
M protein
Green I SYBR real-time fluorescence quantitative PCR
分类号
S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
实时荧光定量PCR模板核酸提取方法的比较
被引量:
2
3
作者
罗忠永
王印
杨泽晓
机构
四川农业大学动物医学院动物检疫实验室
出处
《动物医学进展》
北大核心
2016年第11期53-56,共4页
基金
"十二五"国家科技支持计划项目(2013BAD12B04)
文摘
对病料核酸提取前处理方法进行优化,选择酚/氯仿法、试剂盒提取法和DNA/RNA同提取法,比较提取效果,为实验室核酸提取提供参考。配制模拟样品,通过实时荧光定量PCR比较3种方法提取效果。结果表明,提取纯度为试剂盒提取法>酚/氯仿法>DNA/RNA同提取法。提取效率为酚/氯仿法>DNA/RNA同提取法>试剂盒提取法。表明各提取方法效果差异显著(P<0.01),为实验室核酸提取提供了参考。
关键词
核酸提取方法
实时荧光定量PCR
提取效果
Keywords
nucleic acid extraction method
real-time PCR
extraction effect
分类号
S854.4 [农业科学—临床兽医学]
Q52 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪繁殖与呼吸综合征病毒LAMP检测方法的建立
罗忠永
王印
杨泽晓
《动物医学进展》
北大核心
2016
9
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职称材料
2
SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测PRRSV方法的建立
罗忠永
王印
杨泽晓
《动物医学进展》
北大核心
2016
6
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
实时荧光定量PCR模板核酸提取方法的比较
罗忠永
王印
杨泽晓
《动物医学进展》
北大核心
2016
2
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