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猪传染性胃肠炎病毒S基因B、C位点的克隆与表达及间接ELISA方法的建立
被引量：
2
1
作者
尹杰
杨恒
+5 位作者
曹三杰
黄小波
文心田
李洁萍
余正强
周军
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2015年第1期7-10,共4页
针对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因B、C抗原位点编码基因片段(SBC,下同)设计合成1对引物,用PCR方法扩增SBC基因,将该基因片段定向插入到原核表达载体p ET-32a(+)中,构建原核表达载体p ET-32a-SBC。阳性质粒转化宿主菌BL21(DE3),在IPTG...
针对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因B、C抗原位点编码基因片段(SBC,下同)设计合成1对引物,用PCR方法扩增SBC基因,将该基因片段定向插入到原核表达载体p ET-32a(+)中,构建原核表达载体p ET-32a-SBC。阳性质粒转化宿主菌BL21(DE3),在IPTG的诱导下表达大小约38 k D的蛋白,重组蛋白以包涵体的形式存在。Western blot分析表明,表达产物具有良好的免疫学活性。以纯化的表达产物作为诊断抗原建立了检测TGEV抗体的间接ELISA(TGEV SBC-ELISA)方法。表明建立的间接ELISA方法特异性和重复性良好,敏感性比血清中和试验高,可用于TGEV的检疫和流行病学调查。
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关键词
猪传染性胃肠炎病毒
克隆与表达
诊断
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职称材料
猪胸膜肺炎放线杆菌ArcA基因在低氧环境下的转录变化
2
作者
段丽丽
文心田
+1 位作者
曹三杰
黄小波
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第10期1388-1394,共7页
为研究低氧条件对猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)血清1型ArcA基因表达的影响,并探讨ArcA在低氧环境中的作用机制,作者建立了体外培养模型,在低氧环境中培养APP,采用半定量RT-PCR方法,以看家基因recF为内参,检...
为研究低氧条件对猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)血清1型ArcA基因表达的影响,并探讨ArcA在低氧环境中的作用机制,作者建立了体外培养模型,在低氧环境中培养APP,采用半定量RT-PCR方法,以看家基因recF为内参,检测ArcA基因在低氧条件下的表达水平。结果表明ArcA基因在常氧条件下不转录或低转录,而在低氧环境下高转录,并呈现转录量先升高后降低的趋势。这表明ArcA基因可能是胸膜肺炎放线杆菌潜在的毒力基因,在致病过程中发挥重要作用。
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关键词
半定量RT-PCR
猪胸膜肺炎放线杆菌
ArcA基因
缺氧
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职称材料
猪轮状病毒OSU株的培养特性与致病性研究
被引量：
6
3
作者
黄小波
徐璐
+1 位作者
曹三杰
文心田
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期120-123,147,共5页
目的开展猪轮状病毒OSU株的细胞培养特性及致病性研究,确定轮状病毒培养的关键技术与致病规律。方法以MA104细胞培养病毒,对预处理病毒的胰酶浓度与时间、维持液中最佳胰酶浓度等关键条件进行优化,透射电镜观察病毒粒子形态,测定病毒TCI...
目的开展猪轮状病毒OSU株的细胞培养特性及致病性研究,确定轮状病毒培养的关键技术与致病规律。方法以MA104细胞培养病毒,对预处理病毒的胰酶浓度与时间、维持液中最佳胰酶浓度等关键条件进行优化,透射电镜观察病毒粒子形态,测定病毒TCID50,口服感染3d龄仔猪进行致病性试验。结果病毒经20μg/mL胰酶预处理1h,37℃吸附细胞2h,维持液最佳胰酶浓度为4μg/mL,病毒典型细胞病变为病变细胞葡萄串状堆积、胞浆相连、拉网等病变。透射电镜下病毒粒子呈圆形车轮状,直径约80nm。病毒感染3日龄仔猪10h后出现典型的黄色水样腹泻,感染42h后死亡,剖检可见胃内有凝乳块、肠壁变薄充满液体,盲肠、结肠充气。主要病变为:肠上皮细胞变性、坏死、脱落;固有膜高度扩张、充血和伴有轻微出血;粘膜上皮脱落,粘膜下层水肿、炎性细胞浸润等。结论研究阐明了轮状病毒OSU株的培养特性与致病特征。
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关键词
猪轮状病毒
培养特性
人工感染
致病性
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职称材料
题名
猪传染性胃肠炎病毒S基因B、C位点的克隆与表达及间接ELISA方法的建立
被引量：
2
1
作者
尹杰
杨恒
曹三杰
黄小波
文心田
李洁萍
余正强
周军
机构
四川省
遂宁市畜牧食品局
四川农业大学
动物
医学院
动物
传染病
与基因芯片
实验室
/
动物
疫病与
人类
健康
四川省
重点
实验室
四川省
遂宁市船山区畜牧食品局
出处
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2015年第1期7-10,共4页
基金
国家自然科学基金项目(31072144,30901084)
国家公益性行业(农业)科研专项(201203056)
文摘
针对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因B、C抗原位点编码基因片段(SBC,下同)设计合成1对引物,用PCR方法扩增SBC基因,将该基因片段定向插入到原核表达载体p ET-32a(+)中,构建原核表达载体p ET-32a-SBC。阳性质粒转化宿主菌BL21(DE3),在IPTG的诱导下表达大小约38 k D的蛋白,重组蛋白以包涵体的形式存在。Western blot分析表明,表达产物具有良好的免疫学活性。以纯化的表达产物作为诊断抗原建立了检测TGEV抗体的间接ELISA(TGEV SBC-ELISA)方法。表明建立的间接ELISA方法特异性和重复性良好,敏感性比血清中和试验高,可用于TGEV的检疫和流行病学调查。
关键词
猪传染性胃肠炎病毒
克隆与表达
诊断
Keywords
Transmissible gastroenteritis virus
cloning and expression
ELISA
diagnosis
分类号
S858.28 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
猪胸膜肺炎放线杆菌ArcA基因在低氧环境下的转录变化
2
作者
段丽丽
文心田
曹三杰
黄小波
机构
四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室动物疫病与人类健康四川省重点实验室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第10期1388-1394,共7页
基金
教育部长江学者和创新团队发展计划项目(NoIRT0555-9)
文摘
为研究低氧条件对猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)血清1型ArcA基因表达的影响,并探讨ArcA在低氧环境中的作用机制,作者建立了体外培养模型,在低氧环境中培养APP,采用半定量RT-PCR方法,以看家基因recF为内参,检测ArcA基因在低氧条件下的表达水平。结果表明ArcA基因在常氧条件下不转录或低转录,而在低氧环境下高转录,并呈现转录量先升高后降低的趋势。这表明ArcA基因可能是胸膜肺炎放线杆菌潜在的毒力基因,在致病过程中发挥重要作用。
关键词
半定量RT-PCR
猪胸膜肺炎放线杆菌
ArcA基因
缺氧
Keywords
semi-quantification RT-PCR
Actinobacillus pleuropneumoniae
ArcA gene
anaerobic
分类号
S852.619 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
猪轮状病毒OSU株的培养特性与致病性研究
被引量：
6
3
作者
黄小波
徐璐
曹三杰
文心田
机构
四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室动物疫病与人类健康四川省重点实验室
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期120-123,147,共5页
基金
国家高技术研究发展计划(863计划)(2009AA10Z402)
国家农业部公益性行业(农业)科研(201203056)
教育部<长江学者和创新团队发展计划>创新团队项目(IRTO848)联合资助
文摘
目的开展猪轮状病毒OSU株的细胞培养特性及致病性研究,确定轮状病毒培养的关键技术与致病规律。方法以MA104细胞培养病毒,对预处理病毒的胰酶浓度与时间、维持液中最佳胰酶浓度等关键条件进行优化,透射电镜观察病毒粒子形态,测定病毒TCID50,口服感染3d龄仔猪进行致病性试验。结果病毒经20μg/mL胰酶预处理1h,37℃吸附细胞2h,维持液最佳胰酶浓度为4μg/mL,病毒典型细胞病变为病变细胞葡萄串状堆积、胞浆相连、拉网等病变。透射电镜下病毒粒子呈圆形车轮状,直径约80nm。病毒感染3日龄仔猪10h后出现典型的黄色水样腹泻,感染42h后死亡,剖检可见胃内有凝乳块、肠壁变薄充满液体,盲肠、结肠充气。主要病变为:肠上皮细胞变性、坏死、脱落;固有膜高度扩张、充血和伴有轻微出血;粘膜上皮脱落,粘膜下层水肿、炎性细胞浸润等。结论研究阐明了轮状病毒OSU株的培养特性与致病特征。
关键词
猪轮状病毒
培养特性
人工感染
致病性
Keywords
porcine rotavirus
cell culture,
experimental infection
pathogenicity
分类号
R373 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪传染性胃肠炎病毒S基因B、C位点的克隆与表达及间接ELISA方法的建立
尹杰
杨恒
曹三杰
黄小波
文心田
李洁萍
余正强
周军
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2015
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
猪胸膜肺炎放线杆菌ArcA基因在低氧环境下的转录变化
段丽丽
文心田
曹三杰
黄小波
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
猪轮状病毒OSU株的培养特性与致病性研究
黄小波
徐璐
曹三杰
文心田
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
6
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职称材料
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