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RT-PCR-RFLP方法鉴别基因Ⅰ型和基因Ⅲ型日本脑炎病毒
被引量：
3
1
作者
张亮
田耕
+7 位作者
石双艳
袁磊
刘澣扬
黄小波
伍锐
文心田
文翼平
曹三杰
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第9期1555-1560,共6页
建立一种可检测及鉴别基因Ⅰ型和基因Ⅲ型日本脑炎病毒(JEV)的RT-PCR-RFLP方法。通过对JEV基因Ⅰ型(GⅠ)和基因Ⅲ型(GⅢ)核酸序列的比对分析,设计1对特异性引物对JEV C-PrM-E区域部分基因进行RT-PCR扩增,扩增产物经限制性内切酶SpeⅠ消...
建立一种可检测及鉴别基因Ⅰ型和基因Ⅲ型日本脑炎病毒(JEV)的RT-PCR-RFLP方法。通过对JEV基因Ⅰ型(GⅠ)和基因Ⅲ型(GⅢ)核酸序列的比对分析,设计1对特异性引物对JEV C-PrM-E区域部分基因进行RT-PCR扩增,扩增产物经限制性内切酶SpeⅠ消化后于15g·L-1琼脂糖凝胶电泳进行RFLP分析,并利用建立的RT-PCR-RFLP方法对78份临床样品进行了JEV的检测及基因型鉴定。结果显示,特异性引物可扩增出长为819bp的片段,而对猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒及猪伪狂犬病毒的核酸扩增结果均为阴性。经SpeⅠ酶切,基因Ⅰ型JEV RT-PCR产物被切为568和251bp 2个条带,基因Ⅲ型JEV RT-PCR产物被切为446、251和122bp 3个条带,基因Ⅰ型和基因Ⅲ型JEV混合RT-PCR产物被切为568、446、251和122bp 4个条带,该方法最低可检出1.5pg·μL-1的JEV RNA。RT-PCR-RFLP结果显示78份临床样品中有14份为JEV阳性,其中6份为基因Ⅰ型,8份为基因Ⅲ型,与核苷酸测序分析结果一致。本研究为日本脑炎病毒的实验室诊断及基因Ⅰ型和基因Ⅲ型的鉴别提供了一种快速有效的分子生物学方法。
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关键词
日本脑炎病毒
反转录-聚合酶链反应-限制性片段长度多态性
基因Ⅰ型
基因Ⅲ型
鉴别
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职称材料
副猪嗜血杆菌SC-1株荚膜多糖输出蛋白的表达及其免疫原性分析
2
作者
张飞
都启晶
+3 位作者
张洋溢
文心田
黄小波
曹三杰
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第4期621-630,共10页
运用PCR方法扩增副猪嗜血杆菌SC-1株荚膜多糖输出蛋白(CPEP)基因,克隆至pMD-19T载体。经鉴定测序验证后,将获得的CPEP基因克隆至pET-32a(+)原核表达载体,构建原核表达质粒pET-32a-CPEP,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,进行SDS-PAG...
运用PCR方法扩增副猪嗜血杆菌SC-1株荚膜多糖输出蛋白(CPEP)基因,克隆至pMD-19T载体。经鉴定测序验证后,将获得的CPEP基因克隆至pET-32a(+)原核表达载体,构建原核表达质粒pET-32a-CPEP,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE以及Western blot分析免疫原性,纯化CPEP,并用纯化的蛋白免疫小鼠,检测其特异性血清IgG抗体水平及攻毒保护率。结果显示,成功构建原核表达质粒pET-32aCPEP;SDS-PAGE分析结果显示,得到约35ku的蛋白;Western blot分析显示,CPEP能与Hps SC-1阳性血清发生抗原抗体的特异性反应,证实该重组CPEP蛋白具有反应原性。以致死剂量的强毒株SC-1攻毒CPEP免疫小鼠,重组蛋白的免疫能够减缓发病,并表现出40%的保护率。重组蛋白CPEP的部分保护作用表明其可以作为免疫候选因子,为未来副猪嗜血杆菌标准化疫苗的研制奠定基础。
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关键词
副猪嗜血杆菌
荚膜多糖输出蛋白基因
克隆表达
免疫原性
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职称材料
题名
RT-PCR-RFLP方法鉴别基因Ⅰ型和基因Ⅲ型日本脑炎病毒
被引量：
3
1
作者
张亮
田耕
石双艳
袁磊
刘澣扬
黄小波
伍锐
文心田
文翼平
曹三杰
机构
四川农业大学
预防
兽
医
研究
所猪病
研究
中心
四川农业大学动物医学院人兽共患病研究室
农业
部
兽
用药物与
兽
医生物技术
四川
科学观测实验站
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第9期1555-1560,共6页
基金
四川省科技支撑计划(2013SZ0068)
文摘
建立一种可检测及鉴别基因Ⅰ型和基因Ⅲ型日本脑炎病毒(JEV)的RT-PCR-RFLP方法。通过对JEV基因Ⅰ型(GⅠ)和基因Ⅲ型(GⅢ)核酸序列的比对分析,设计1对特异性引物对JEV C-PrM-E区域部分基因进行RT-PCR扩增,扩增产物经限制性内切酶SpeⅠ消化后于15g·L-1琼脂糖凝胶电泳进行RFLP分析,并利用建立的RT-PCR-RFLP方法对78份临床样品进行了JEV的检测及基因型鉴定。结果显示,特异性引物可扩增出长为819bp的片段,而对猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒及猪伪狂犬病毒的核酸扩增结果均为阴性。经SpeⅠ酶切,基因Ⅰ型JEV RT-PCR产物被切为568和251bp 2个条带,基因Ⅲ型JEV RT-PCR产物被切为446、251和122bp 3个条带,基因Ⅰ型和基因Ⅲ型JEV混合RT-PCR产物被切为568、446、251和122bp 4个条带,该方法最低可检出1.5pg·μL-1的JEV RNA。RT-PCR-RFLP结果显示78份临床样品中有14份为JEV阳性,其中6份为基因Ⅰ型,8份为基因Ⅲ型,与核苷酸测序分析结果一致。本研究为日本脑炎病毒的实验室诊断及基因Ⅰ型和基因Ⅲ型的鉴别提供了一种快速有效的分子生物学方法。
关键词
日本脑炎病毒
反转录-聚合酶链反应-限制性片段长度多态性
基因Ⅰ型
基因Ⅲ型
鉴别
Keywords
Japanese encephalitis virus
RT-PCR-RFLP
genotypeⅠ
genotypeⅢ
differentiation
分类号
S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
副猪嗜血杆菌SC-1株荚膜多糖输出蛋白的表达及其免疫原性分析
2
作者
张飞
都启晶
张洋溢
文心田
黄小波
曹三杰
机构
四川农业大学
预防
兽
医
研究
所猪病
研究
中心
四川农业大学动物医学院人兽共患病研究室
农业
部
兽
用药物与
兽
医生物技术
四川
科学观测实验站
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第4期621-630,共10页
基金
公益性行业(农业)科研专项(201303034-1)
文摘
运用PCR方法扩增副猪嗜血杆菌SC-1株荚膜多糖输出蛋白(CPEP)基因,克隆至pMD-19T载体。经鉴定测序验证后,将获得的CPEP基因克隆至pET-32a(+)原核表达载体,构建原核表达质粒pET-32a-CPEP,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE以及Western blot分析免疫原性,纯化CPEP,并用纯化的蛋白免疫小鼠,检测其特异性血清IgG抗体水平及攻毒保护率。结果显示,成功构建原核表达质粒pET-32aCPEP;SDS-PAGE分析结果显示,得到约35ku的蛋白;Western blot分析显示,CPEP能与Hps SC-1阳性血清发生抗原抗体的特异性反应,证实该重组CPEP蛋白具有反应原性。以致死剂量的强毒株SC-1攻毒CPEP免疫小鼠,重组蛋白的免疫能够减缓发病,并表现出40%的保护率。重组蛋白CPEP的部分保护作用表明其可以作为免疫候选因子,为未来副猪嗜血杆菌标准化疫苗的研制奠定基础。
关键词
副猪嗜血杆菌
荚膜多糖输出蛋白基因
克隆表达
免疫原性
Keywords
Haemophilus parasuis
capsular polysaccharide export protein gene
expression
immunogenicity analysis
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
RT-PCR-RFLP方法鉴别基因Ⅰ型和基因Ⅲ型日本脑炎病毒
张亮
田耕
石双艳
袁磊
刘澣扬
黄小波
伍锐
文心田
文翼平
曹三杰
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
副猪嗜血杆菌SC-1株荚膜多糖输出蛋白的表达及其免疫原性分析
张飞
都启晶
张洋溢
文心田
黄小波
曹三杰
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
0
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