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题名青稞CHI基因的克隆及原核表达分析
被引量：1
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作者
李鹏
牟利
方建
张鹍飞
刘新春
袁金娥
冯宗云
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机构
四川农业大学农学院植物遗传育种系大麦青稞研究中心
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出处
《麦类作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第11期1521-1527,共7页
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基金
国家现代农业产业技术体系建设专项(CARS-05)
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文摘
为了进一步了解CHI基因在青稞黄酮合成中所起的作用,以青稞品系94-19-1为材料,通过同源克隆技术分离CHI基因,并对分离得到的CHI基因进行生物信息学分析及原核表达。结果表明,从青稞94-19-1中克隆得到的CHI基因编码区长为696bp,编码231个氨基酸。序列分析表明,青稞CHI基因有4个碱基和大麦不同,导致1个氨基酸发生改变。SDS-PAGE检测结果表明,将该基因克隆到表达载体pET-32a上,并转化大肠杆菌BL21后,经诱导可成功表达出融合蛋白。
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关键词
青稞
查尔酮异构酶
克隆
原核表达
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Keywords
Hulless barley
Chalcone isomerase
Clone
Prokaryotic expression
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分类号
S512.3
[农业科学—作物学]
S330
[农业科学—作物遗传育种]
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题名青稞CHS基因的克隆及原核表达分析
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作者
方建
牟利
李鹏
张鹍飞
刘新春
袁金娥
冯宗云
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机构
四川农业大学农学院植物遗传育种学系大麦青稞研究中心
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出处
《麦类作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第11期1528-1534,共7页
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基金
国家现代农业产业技术体系建设专项(CARS-05)
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文摘
为进一步研究查尔酮合酶(Chalcone synthase,CHS)在黄酮化合物代谢过程中的作用,以青稞94-19-1为材料,通过同源克隆技术分离CHS基因,并对分离得到的CHS基因进行生物信息学分析及原核表达。结果表明,从青稞94-19-1中克隆得到的CHS基因编码区长为1 197bp,编码398个氨基酸。生物信息学分析表明,该基因编码的蛋白质分子量为43.479kDa,预测等电点(pI)为5.92,是酸性蛋白;该酶蛋白体外红细胞中的半衰期为30h,不稳定系数(II)大于40,属于不稳定蛋白;平均亲水指数为-0.090,是亲水性的蛋白。SDS-PAGE检测结果表明,将该基因克隆到表达载体pET-32a上,并在大肠杆菌BL21中表达,可得到64kDa左右的融合蛋白,在IPTG诱导浓度为1.0mmol·L-1时,最佳诱导时间为3h。
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关键词
青稞
查尔酮合酶
同源克隆
原核表达
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Keywords
Hulless barley
Chalcone synthase
Homologous cloning
Prokaryotic expression
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分类号
S512.3
[农业科学—作物学]
S330
[农业科学—作物遗传育种]
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