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牛冠状病毒N蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备被引量：1: 1; 作者梁彤曹存 +7 位作者王芳姜志刚于德斌徐晓静崔久辉贾斌尹鑫常继涛《中国动物传染病学报》北大核心 2024年第6期120-127,共8页; 为表达牛冠状病毒(BCoV)N蛋白并制备抗N蛋白单克隆抗体,将N蛋白表达基因克隆至原核表达载体pCold-GST,利用大肠杆菌BL21(DE3)表达出N蛋白。SDS-PAGE结果显示,N蛋白主要以可溶性形式表达,分子量约为77 kDa,亲和纯化后纯度为90%。Western ... 展开更多; 关键词牛冠状病毒原核表达 N蛋白单克隆抗体; 在线阅读下载PDF 职称材料

一起新生肉犊牛腹泻的病原学鉴定被引量：1: 2; 作者韩宇鑫梁彤 +9 位作者曹存于德斌王芳姜志刚徐晓静崔久辉程延彬王蕾尹鑫常继涛《畜牧兽医科技信息》 2024年第3期33-36,共4页; 内蒙古自治区某规模化肉牛场发生严重新生犊牛腹泻,为了确定该牛场新生犊牛腹泻的病原,采集发病犊牛的8份直肠拭子和病死犊牛的2份肠组织样品,进行牛轮状病毒(BRV)、牛冠状病毒(BCoV)、致病性大肠杆菌和牛病毒性腹泻病毒的RT-PCR检测和... 展开更多; 关键词肉犊牛腹泻牛轮状病毒牛冠状病毒; 在线阅读下载PDF 职称材料

一株G6P[5]型牛轮状病毒的分离鉴定与全基因组序列分析被引量：10: 3; 作者曹存于德斌 +2 位作者徐晓静于力常继涛《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期939-945,共7页; 为了对患腹泻疾病的犊牛进行病原学鉴定,并进一步丰富我国牛轮状病毒(BRV)的流行病学数据,本研究采用RT-PCR方法对8份腹泻犊牛的粪便样品进行BRV VP7基因检测,结果显示有1份样品为阳性。将该阳性病料样品接种Marc-145细胞。对产生细胞病... 展开更多; 关键词牛轮状病毒基因序列分析重配株分离鉴定; 在线阅读下载PDF 职称材料

牛轮状病毒NSP5基因SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用被引量：7: 4; 作者于德斌曹存 +2 位作者徐晓静于力常继涛《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期399-404,424,共7页; 为建立检测牛轮状病毒(BRV)快速特异的荧光定量RT-PCR方法,本研究针对BRV NSP5基因设计了一对特异性引物经PCR扩增目的片段,并克隆于pCI载体作为重组质粒标准品(pCI-NSP5),经优化反应条件,建立了基于NSP5基因的BRV荧光定量RT-PCR方法,... 展开更多; 关键词牛轮状病毒 NSP5基因荧光定量RT-PCR; 在线阅读下载PDF 职称材料

猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型25-4株感染及免疫攻毒试验被引量：1: 5; 作者贺丹王牟平 +7 位作者于向前董明奇朱庆虎孙建宏王春来刘思国胡守萍张卓《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期310-313,321,共5页; 为了评价猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清7型25-4株致病性和其灭活疫苗的免疫原性,本研究采用猪胸膜肺炎放线杆菌7型25-4株感染健康猪,每组感染剂量分别为106CFU、107CFU、108CFU,结果发现106CFU感染剂量就可以复制出典型的猪传染性胸膜肺... 展开更多; 关键词 APP血清7型25-4株攻毒免疫保护; 在线阅读下载PDF 职称材料

副猪嗜血杆菌病的研究概况被引量：4: 6; 作者董明奇王牟平 +5 位作者于向前贺丹董大伟朱庆虎孙建宏陈洪岩《畜牧兽医科技信息》 2008年第10期13-15,共3页; 副猪嗜血杆菌是Glasser病的病原体，是猪上呼吸道的一种长在菌。随着规模化、集约化猪场的发展，副猪嗜血杆菌引起的以猪多发性浆膜炎、关节炎、呼吸困难、高热及高死亡率为特征的传染性疾病给养猪业带来巨大的经济损失。该病逐渐成为... 展开更多; 关键词副猪嗜血杆菌病多发性浆膜炎集约化猪场传染性疾病上呼吸道呼吸困难经济损失养猪业; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名牛冠状病毒N蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备被引量：1: 1; 作者梁彤曹存王芳姜志刚于德斌徐晓静崔久辉贾斌尹鑫常继涛; 机构中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨维科生物技术有限公司研发部内蒙古农业大学兽医学院呼伦贝尔农垦谢尔塔拉农牧场有限公司黑龙江省农业科学院畜牧兽医分院; 出处《中国动物传染病学报》北大核心 2024年第6期120-127,共8页; 基金内蒙古自治区科技重大专项(2020ZD0006,2021ZD0013)。; 文摘为表达牛冠状病毒(BCoV)N蛋白并制备抗N蛋白单克隆抗体,将N蛋白表达基因克隆至原核表达载体pCold-GST,利用大肠杆菌BL21(DE3)表达出N蛋白。SDS-PAGE结果显示,N蛋白主要以可溶性形式表达,分子量约为77 kDa,亲和纯化后纯度为90%。Western blot进一步鉴定发现,重组N蛋白与全病毒多克隆抗体具有良好的反应原性。经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,以该纯化蛋白免疫Balb/c小鼠,进行融合、筛选获得3株单克隆抗体,分别命名为1D11、5C2和2B11。细胞上清单克隆抗体效价均达1∶320,3株单克隆抗体均属IgG亚类,Western blot与IFA鉴定3株单克隆抗体与真核表达的N蛋白具有特异性反应。该研究内容为进一步研究N蛋白的结构、功能及建立快速诊断BCoV方法奠定了基础。; 关键词牛冠状病毒原核表达 N蛋白单克隆抗体; Keywords Bovine coronavirus prokaryotic expression N protein monoclonal antibody; 分类号 S858.23 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名一起新生肉犊牛腹泻的病原学鉴定被引量：1: 2; 作者韩宇鑫梁彤曹存于德斌王芳姜志刚徐晓静崔久辉程延彬王蕾尹鑫常继涛; 机构中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室/牛羊传染病研究创新团队哈尔滨维科生物技术有限公司研发部内蒙古农业大学兽医学院呼伦贝尔农垦集团有限公司呼伦贝尔农垦谢尔塔拉农牧场有限公司呼伦贝尔市农牧局中国农业科学院西部农业研究中心; 出处《畜牧兽医科技信息》 2024年第3期33-36,共4页; 基金内蒙古自治区科技重大专项(2020ZD0006,2021ZD0013)。; 文摘内蒙古自治区某规模化肉牛场发生严重新生犊牛腹泻,为了确定该牛场新生犊牛腹泻的病原,采集发病犊牛的8份直肠拭子和病死犊牛的2份肠组织样品,进行牛轮状病毒(BRV)、牛冠状病毒(BCoV)、致病性大肠杆菌和牛病毒性腹泻病毒的RT-PCR检测和序列分析,同时对疾病的流行病学特点、临床症状以及病理变化进行综合分析。临床观察显示,患病犊牛精神萎靡、食欲不振,同时伴有黄色水样便。剖检病死犊牛可见肠壁变薄、肠粘膜充血和脱落。RT-PCR结果显示,牛冠状病毒样本阳性数为8份,阳性率为80%;牛轮状病毒样本阳性数为6份,阳性率为60%;致病性大肠杆菌和牛病毒性腹泻病毒均为阴性;对扩增获得的BRV VP7基因及BCoV N基因进行序列分析显示,该肉牛场感染的牛轮状病毒为G6基因型、牛冠状病毒为中国当地流行毒株。表明该肉牛场新生肉犊牛腹泻由牛轮状病毒和牛冠状病毒混合感染引起。; 关键词肉犊牛腹泻牛轮状病毒牛冠状病毒; 分类号 S858.23 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名一株G6P[5]型牛轮状病毒的分离鉴定与全基因组序列分析被引量：10: 3; 作者曹存于德斌徐晓静于力常继涛; 机构中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队哈尔滨维科生物技术有限公司研发部内蒙古农业大学兽医学院; 出处《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期939-945,共7页; 基金内蒙古自治区科技重大专项“牛腹泻疾病防控关键技术研发与标准化操作规程示范推广”(2020ZD0006)。; 文摘为了对患腹泻疾病的犊牛进行病原学鉴定,并进一步丰富我国牛轮状病毒(BRV)的流行病学数据,本研究采用RT-PCR方法对8份腹泻犊牛的粪便样品进行BRV VP7基因检测,结果显示有1份样品为阳性。将该阳性病料样品接种Marc-145细胞。对产生细胞病变(CPE)的阳性样品连续传5代后,经间接免疫荧光试验(IFA)和电镜观察,结果表明从粪便样品中分离的病毒为BRV,命名为DZ株。对DZ株的11个基因节段进行RTPCR扩增、测序、拼接后对11个基因节段进行同源性及分型分析;构建分离病毒VP7、VP4基因进化树,分析其遗传进化关系及其氨基酸序列的变异情况。结果显示,DZ株基因组10个基因节段分别与来源于牛(VP2、VP7、NSP1、NSP3)、犬(VP3、NSP5)、羔羊(NSP2)、马(VP6)、猕猴(VP1)、人(NSP4)以及人-牛基因重配(VP4)的轮状病毒株。其中VP1基因与猕猴轮状病毒(RRV)的同源性最高,为81.3%,但低于VP1基因分型的临界值83%,因此DZ株的VP1为新出现的基因型,命名为R17;分离株NSP3基因与法国RF株NSP3基因的同源性高达98%,DZ株与RF株的NSP3属于同一基因型,命名为T18型。所以,本研究分离的BRV DZ株的基因型为G6-P5-I2-R17-C2-M2-A3-N2-T18-E2-H5。VP7和VP4基因遗传进化分析结果显示,DZ株VP7基因来源于韩国KJ69-1株,VP4基因来源于美国疫苗株RotaTeq-SC2-9。与同源性最高的病毒株相比,DZ株VP4、VP7蛋白氨基酸序列分别发生了9处和8处突变。这些突变可能会引起VP7和VP4蛋白的抗原性和组织嗜性变化,进而影响病毒的免疫原性、宿主嗜性以及致病性。综上所述,DZ株是多宿主来源的基因重配病毒株,且主要抗原蛋白VP7和VP4发生了较大变异。本研究为我国BRV遗传进化及其分子流行病学和疫苗的研究奠定了实验基础。; 关键词牛轮状病毒基因序列分析重配株分离鉴定; Keywords bovine rotavirus gene sequence analysis reassortant strain isolation and identification; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名牛轮状病毒NSP5基因SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用被引量：7: 4; 作者于德斌曹存徐晓静于力常继涛; 机构中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队哈尔滨维科生物技术有限公司研发部内蒙古农业大学兽医学院; 出处《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期399-404,424,共7页; 基金内蒙古自治区科技重大专项“牛腹泻疾病防控关键技术与标准化操作规程示范推广”(2020ZD0006)。; 文摘为建立检测牛轮状病毒(BRV)快速特异的荧光定量RT-PCR方法,本研究针对BRV NSP5基因设计了一对特异性引物经PCR扩增目的片段,并克隆于pCI载体作为重组质粒标准品(pCI-NSP5),经优化反应条件,建立了基于NSP5基因的BRV荧光定量RT-PCR方法,并对其进行了特异性、敏感性及重复性试验。结果显示,建立的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法最佳引物浓度为10μmol/L,模板为2μL,退火温度为58℃;特异性试验结果显示,该方法除对BRV的检测结果为阳性外,对牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒、牛副流感3型病毒、牛呼吸道合胞体病毒的检测结果均为阴性;敏感性试验结果显示,该方法对重组质粒标准品的最低检测限为12拷贝/μL,对BRV的最低检测限为1×102TCID50/反应;批内和批间重复性试验的变异系数均小于2%。利用该方法检测30份BRV接种犊牛的粪便样品,结果 25份呈阳性,而利用VP7基因的常规RT-PCR和病毒分离方法检出的阳性样品分别为20份和25份,表明本研究建立的检测方法的敏感性高于VP7基因的常规RT-PCR方法,而与病毒分离方法的符合率为100%。以上结果表明,本研究建立的BRV NSP5基因荧光定量RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可以用于BRV的快速检测、病原流行病学调查以及疫苗免疫攻毒试验的病毒载量定量等研究。; 关键词牛轮状病毒 NSP5基因荧光定量RT-PCR; Keywords bovine rotavirus(BRV) NSP5 gene real-time RT-PCR; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型25-4株感染及免疫攻毒试验被引量：1: 5; 作者贺丹王牟平于向前董明奇朱庆虎孙建宏王春来刘思国胡守萍张卓; 机构中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨维科生物技术有限公司研发部中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室; 出处《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期310-313,321,共5页; 文摘为了评价猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清7型25-4株致病性和其灭活疫苗的免疫原性,本研究采用猪胸膜肺炎放线杆菌7型25-4株感染健康猪,每组感染剂量分别为106CFU、107CFU、108CFU,结果发现106CFU感染剂量就可以复制出典型的猪传染性胸膜肺炎病理变化;以该菌株制备的灭活疫苗免疫健康猪21d后,用106CFU、107CFU2个不同感染剂量进行强毒攻击,其对照组均发病,免疫组获得100%保护。; 关键词 APP血清7型25-4株攻毒免疫保护; Keywords APP serotype 7 strain 25-4 challenge immune protection; 分类号 S852.618 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名副猪嗜血杆菌病的研究概况被引量：4: 6; 作者董明奇王牟平于向前贺丹董大伟朱庆虎孙建宏陈洪岩; 机构中国农科院哈尔滨兽医研究所哈尔滨维科生物技术有限公司研发部; 出处《畜牧兽医科技信息》 2008年第10期13-15,共3页; 文摘副猪嗜血杆菌是Glasser病的病原体，是猪上呼吸道的一种长在菌。随着规模化、集约化猪场的发展，副猪嗜血杆菌引起的以猪多发性浆膜炎、关节炎、呼吸困难、高热及高死亡率为特征的传染性疾病给养猪业带来巨大的经济损失。该病逐渐成为制约养猪业的重要疫病之一，引起了人们的广泛重视。; 关键词副猪嗜血杆菌病多发性浆膜炎集约化猪场传染性疾病上呼吸道呼吸困难经济损失养猪业; 分类号 S858.28 [农业科学—临床兽医学] X51 [环境科学与工程—环境工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	牛冠状病毒N蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备	梁彤曹存王芳姜志刚于德斌徐晓静崔久辉贾斌尹鑫常继涛	《中国动物传染病学报》北大核心	2024	1	在线阅读下载PDF 职称材料
2	一起新生肉犊牛腹泻的病原学鉴定	韩宇鑫梁彤曹存于德斌王芳姜志刚徐晓静崔久辉程延彬王蕾尹鑫常继涛	《畜牧兽医科技信息》	2024	1	在线阅读下载PDF 职称材料
3	一株G6P[5]型牛轮状病毒的分离鉴定与全基因组序列分析	曹存于德斌徐晓静于力常继涛	《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2021	10	在线阅读下载PDF 职称材料
4	牛轮状病毒NSP5基因SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用	于德斌曹存徐晓静于力常继涛	《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2021	7	在线阅读下载PDF 职称材料
5	猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型25-4株感染及免疫攻毒试验	贺丹王牟平于向前董明奇朱庆虎孙建宏王春来刘思国胡守萍张卓	《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2009	1	在线阅读下载PDF 职称材料
6	副猪嗜血杆菌病的研究概况	董明奇王牟平于向前贺丹董大伟朱庆虎孙建宏陈洪岩	《畜牧兽医科技信息》	2008	4	在线阅读下载PDF 职称材料