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了哥王中西瑞香素的提取分离及抗肿瘤作用研究 被引量：32
1
作者 杨振宇 郭薇 +1 位作者 吴东媛 杜智敏 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2008年第3期522-526,共5页
研究西瑞香素(daphnoretin)的体外抗肿瘤作用。采用溶剂提取法、硅胶柱层析、重结晶法从中药了哥王中分离西瑞香素并用薄层色谱法和高效液相色谱法测定纯度。应用MTT法观察不同浓度的西瑞香素对体外培养的人肺腺癌细胞AGZY-83-a、人喉... 研究西瑞香素(daphnoretin)的体外抗肿瘤作用。采用溶剂提取法、硅胶柱层析、重结晶法从中药了哥王中分离西瑞香素并用薄层色谱法和高效液相色谱法测定纯度。应用MTT法观察不同浓度的西瑞香素对体外培养的人肺腺癌细胞AGZY-83-a、人喉癌细胞Hep2和人肝癌细胞HepG2的抑制作用。采用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察细胞形态的变化并检测细胞内钙离子浓度。经紫外光谱、质谱和核磁共振光谱确定提取分离西瑞香素的结构,其纯度为99.75%。西瑞香素对体外培养的人肺腺癌细胞AGZY-83-a、人喉癌细胞Hep2和人肝癌细胞HepG2均有明显抑制作用,且呈浓度依赖性。其对上述三种肿瘤细胞的半数抑制浓度IC50值分别为8·73、9.71和31.34μg/mL。激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测结果表明应用西瑞香素处理肿瘤细胞72h后,细胞内钙离子浓度显著升高(P<0.05)。西瑞香素体外对人肺腺癌细胞AGZY-83-a、人喉癌细胞Hep2和人肝癌细胞HepG2均有明显抑制作用,机制可能与细胞内钙超载有关。 展开更多
关键词 西瑞香素 提取分离 抗肿瘤作用 MTT 激光扫描共聚焦显微镜
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喉咽清水蜜丸毒理学实验研究
2
作者 张一飞 郭守利 +2 位作者 吴琳华 刘红梅 王晔 《中国实验动物学杂志》 CAS 2002年第6期374-374,共1页
关键词 喉咽清水蜜丸 毒理学 中药 慢性咽喉炎 小鼠
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大鼠肝微粒体法测定3种中药对CYP3A4亚型的作用 被引量：18
3
作者 刘艳 王海霞 +3 位作者 黄丽军 张一飞 徐静 田玮 《医药导报》 CAS 2011年第3期285-289,共5页
目的建立肝微粒体测定法,观察中药制剂对CYP3A4亚型的作用。方法取大鼠肝脏,制备肝微粒体,分别优化肝微粒体体外温孵系统的反应时间、蛋白浓度及探针药物咪达唑仑的浓度;高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS-MS)法测定大鼠肝微粒体中咪达唑... 目的建立肝微粒体测定法,观察中药制剂对CYP3A4亚型的作用。方法取大鼠肝脏,制备肝微粒体,分别优化肝微粒体体外温孵系统的反应时间、蛋白浓度及探针药物咪达唑仑的浓度;高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS-MS)法测定大鼠肝微粒体中咪达唑仑的浓度,计算咪达唑仑的活性;在肝微粒体体外温孵系统中分别加入不同浓度的血脂康胶囊、通心络胶囊、枣仁安神胶囊内容物及对照药物酮康唑,测定其半数抑制浓度(IC50)及抑制常数(Ki)。结果肝微粒体体外温孵系统的反应条件为0.4 g.L-1大鼠肝微粒体,4μmol.L-1咪达唑仑溶液,37℃温育5 min。酮康唑、血脂康胶囊、通心络胶囊的IC50分别为(3.4±0.2),(25.1±0.3),(56.2±0.3)mg.L-1,枣仁安神胶囊的IC50(150 mg.L-1;酮康唑、血脂康胶囊、通心络胶囊的Ki分别为(1.7±0.1),(25.0±0.2),(50.0±0.3)mg.L-1。结论建立了中药制剂对CYP3A4亚型作用的大鼠肝微粒体研究模型。血脂康胶囊和通心络胶囊对大鼠CYP3A4亚型有较弱的抑制作用。 展开更多
关键词 中药制剂 CYP3A4 肝微粒体 大鼠
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糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞体外培养方法的探讨 被引量：2
4
作者 郭薇 杨磊 +2 位作者 王春华 霍荣 杜智敏 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期127-130,共4页
目的探讨糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞体外培养方法，建立糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞模型，为糖尿病性冠心病的研究奠定基础。方法建立糖尿病大鼠模型，用酶消化法体外培养冠状动脉血管平滑肌细胞。结果糖尿病大鼠造模成功后分离冠... 目的探讨糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞体外培养方法，建立糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞模型，为糖尿病性冠心病的研究奠定基础。方法建立糖尿病大鼠模型，用酶消化法体外培养冠状动脉血管平滑肌细胞。结果糖尿病大鼠造模成功后分离冠状动脉，用酶消化法培养糖尿病大鼠血管平滑肌细胞，24h更换培养液液，培养7～10d细胞重叠生长达多层，高低起伏呈“峰-谷”状。细胞α-actin免疫组织化学染色鉴定为平滑肌细胞。结论糖尿病大鼠血管平滑肌细胞增殖速度快，培养条件要求严格，在形态学上与正常大鼠平滑肌细胞相同。 展开更多
关键词 糖尿病 冠状动脉 平滑肌细胞 细胞培养
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稳心颗粒对大鼠细胞色素P_(450)酶的影响 被引量：3
5
作者 于盼盼 杭鹏洲 +4 位作者 张波 李湘晖 安然 赵文婷 杜智敏 《医药导报》 CAS 北大核心 2012年第7期834-838,共5页
目的用cocktail探针药物法评价稳心颗粒对大鼠体内CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6,CYP2E1和CYP3A4亚型酶活性的影响。方法雄性Wistar大鼠随机分为稳心颗粒高、低剂量组和空白对照组。稳心颗粒高、低剂量组灌胃给予稳心颗粒,空白对照组灌... 目的用cocktail探针药物法评价稳心颗粒对大鼠体内CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6,CYP2E1和CYP3A4亚型酶活性的影响。方法雄性Wistar大鼠随机分为稳心颗粒高、低剂量组和空白对照组。稳心颗粒高、低剂量组灌胃给予稳心颗粒,空白对照组灌胃给予0.9%氯化钠溶液,连续7 d。第8天腹腔注射探针药物咖啡因、甲苯磺丁脲、奥美拉唑、美托洛尔、氯唑沙宗和氨苯砜。尾静脉取血,用高效液相色谱法检测血样,比较药动学参数变化。结果高、低剂量稳心颗粒分别使咖啡因的AUC(0-∞)增加1.635倍和1.435倍,分别使氨苯砜的AUC(0-∞)增加1.816倍和1.324倍。高剂量稳心颗粒使奥美拉唑和氯唑沙宗的AUC(0-∞)增加2.748倍和1.696倍。结论高剂量稳心颗粒对CYP2C19和CYP2E1活性有弱抑制作用,稳心颗粒对CYP1A2和CYP3A4的活性有弱抑制作用。 展开更多
关键词 稳心颗粒 细胞色素P450 药动学 药物相互作用
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限制性内切酶策略鉴定CRISPR/Cas9介导的Chrm3基因敲除小鼠 被引量：3
6
作者 高旭 马宁 +7 位作者 王大勇 张赫 张艳芬 徐亚 贺军 徐书会 霍亚丽 杜智敏 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期404-409,共6页
CRISPR/Cas9技术是近年发展起来的快速基因编辑技术。通过该技术已对多种生物的基因组进行了编辑。由此产生的基因编辑动物的建系与鉴定是随之而来较为繁琐的工作。单导向RNA(single-guide RNA,sgRNA)靶序列的设计和确定不仅影响后续靶... CRISPR/Cas9技术是近年发展起来的快速基因编辑技术。通过该技术已对多种生物的基因组进行了编辑。由此产生的基因编辑动物的建系与鉴定是随之而来较为繁琐的工作。单导向RNA(single-guide RNA,sgRNA)靶序列的设计和确定不仅影响后续靶向基因组的效率,还可作为优化鉴定、筛选方法的参考。本研究在选取sgRNA靶序列时,不仅依据软件的评分,还分析了sgRNA靶序列是否含有酶切位点,以便对后续纯合子/杂合子进行鉴定。结果显示,以特异引物扩增的野生型小鼠Chrm3基因片段可被限制性内切酶BanⅡ切为两个片段;而纯合子小鼠"丢失"该酶切位点,其PCR产物不能被切开;杂合子小鼠PCR产物被不完全切开,凝胶电泳结果可见三条带。本研究结果提示该策略可有效简化基因编辑动物建系鉴定工作,提高鉴定效率及改善阳性动物辨识效果。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 毒蕈碱型乙酰胆碱受体M3亚型 遗传改变小鼠 纯合子
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大鼠肠系膜淋巴管内皮细胞体外培养方法的建立及鉴定 被引量：1
7
作者 杜智敏 刘晔 杨宝峰 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期120-123,共4页
目的　建立分离大鼠肠系膜淋巴管的技术及其内皮细胞的培养方法并证实体外培养的大鼠肠系膜淋巴管内皮细胞具有合成一氧化氮及第Ⅷ因子相关抗原的能力。方法　利用手术显微镜及显微手术器械分离大鼠肠系膜淋巴管,采用植块培养法进行内... 目的　建立分离大鼠肠系膜淋巴管的技术及其内皮细胞的培养方法并证实体外培养的大鼠肠系膜淋巴管内皮细胞具有合成一氧化氮及第Ⅷ因子相关抗原的能力。方法　利用手术显微镜及显微手术器械分离大鼠肠系膜淋巴管,采用植块培养法进行内皮细胞原代培养并传代培养。用免疫组织化学的方法鉴定第Ⅷ因子相关抗原及一氧化氮合酶在体外培养的大鼠肠系膜淋巴管内皮细胞中的表达。测定一氧化氮代谢产物的含量。结果　体外培养的大鼠肠系膜淋巴管内皮细胞呈梭形或多角形,形成单层后呈典型的鹅卵石样或铺路石样排列。第Ⅷ因子相关抗原的免疫过氧化氢酶染色反应阳性,阳性率 98%。一氧化氮合酶表达阳性率为83%,阳性反应产物在细胞核周围呈棕黄色。一氧化氮代谢产物含量(10 26±2 17)mol·L-1 (n=7 )。结论　本实验采用培养方法可行性强,简单可靠,保持了内皮细胞的结构和功能。并证实了体外培养的大鼠肠系膜淋巴管内皮细胞能表达一氧化氮合酶及第Ⅷ因子相关抗原。 展开更多
关键词 肠系膜 淋巴管 内皮细胞 细胞培养 一氧化氮合酶 Ⅷ因子相关抗原
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三氧化二砷诱导心肌细胞凋亡对PKC-ε的影响 被引量：7
8
作者 范玉华 杭鹏洲 杜智敏 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期782-786,共5页
目的探讨三氧化二砷诱导新生乳鼠心室肌细胞(NRVCs)凋亡过程中对PKC-ε的影响。方法 NRVCs随机分为6组:正常组(Ctrl)、三氧化二砷高、中、低剂量组(10、5、2μmol.L-1)、PKC-ε抑制剂(100 nmol.L-1)+三氧化二砷(5μmol.L-1)组、PKC-ε... 目的探讨三氧化二砷诱导新生乳鼠心室肌细胞(NRVCs)凋亡过程中对PKC-ε的影响。方法 NRVCs随机分为6组:正常组(Ctrl)、三氧化二砷高、中、低剂量组(10、5、2μmol.L-1)、PKC-ε抑制剂(100 nmol.L-1)+三氧化二砷(5μmol.L-1)组、PKC-ε抑制剂(100 nmol.L-1)组。采用MTT法检测细胞活力,Hoechst 33342染色和TUNEL法检测细胞凋亡。应用Western blot技术检测PKC-ε蛋白表达水平。结果三氧化二砷(5、10μmol.L-1)孵育24 h剂量依赖性地降低NRVCs活力,诱导NRVCs凋亡。此外,三氧化二砷(5μmol.L-1)增加PKC-ε蛋白的表达。而抑制PKC-ε能够进一步促进三氧化二砷降低NRVCs活力,并加重NRVCs凋亡。结论三氧化二砷上调PKC-ε蛋白水平,而抑制PKC-ε促进三氧化二砷加重心肌细胞凋亡。本研究表明三氧化二砷能够引起PKC-ε表达异常改变,提示PKC-ε可能参与三氧化二砷诱导心肌细胞凋亡的病理过程。 展开更多
关键词 三氧化二砷 PKC-ε 凋亡 PKC-ε抑制肽 心室肌细胞 Hoechst 33342 TUNEL
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高效液相色谱法测定普利沙星片含量及有关物质
9
作者 龙燕 曲福军 孙华 《医药导报》 CAS 2005年第9期817-819,共3页
目的采用高效液相色谱法建立普利沙星片含量及有关物质的测定方法.方法色谱柱:Hypersil C18 (5 μm,4.6 mm×250 mm),流动相:乙腈-0.1%磷酸-1 mol·L-1戊烷磺酸钠溶液(31:69:0.2),流速:0.8 mL·min-1,检测波长:276 nm,柱温:... 目的采用高效液相色谱法建立普利沙星片含量及有关物质的测定方法.方法色谱柱:Hypersil C18 (5 μm,4.6 mm×250 mm),流动相:乙腈-0.1%磷酸-1 mol·L-1戊烷磺酸钠溶液(31:69:0.2),流速:0.8 mL·min-1,检测波长:276 nm,柱温:(35.0±0.1)℃.结果制剂中辅料对普利沙星测定无干扰,普利沙星与有关物质完全分离,酸、碱及氧破坏均有降解产物生成,降解产物能够与普利沙星分离,不干扰测定.在5～500 μg·mL-1浓度范围内,峰面积(A)与浓度(C)线性关系良好,r＝0.999 9;平均回收率99.40%(n＝9);日内,日间精密度RSD＜0.5%;溶液室温放置24 h稳定(RSD＜0.5%).结论该方法简便,准确,重现性好,专属性强,可用于普利沙星片的含量及有关物质测定. 展开更多
关键词 普利沙星片 高效液相色谱 含量测定
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