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限制性内切酶策略鉴定CRISPR/Cas9介导的Chrm3基因敲除小鼠
被引量：
3
1
作者
高旭
马宁
+7 位作者
王大勇
张赫
张艳芬
徐亚
贺军
徐书会
霍亚丽
杜智敏
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第4期404-409,共6页
CRISPR/Cas9技术是近年发展起来的快速基因编辑技术。通过该技术已对多种生物的基因组进行了编辑。由此产生的基因编辑动物的建系与鉴定是随之而来较为繁琐的工作。单导向RNA(single-guide RNA,sgRNA)靶序列的设计和确定不仅影响后续靶...
CRISPR/Cas9技术是近年发展起来的快速基因编辑技术。通过该技术已对多种生物的基因组进行了编辑。由此产生的基因编辑动物的建系与鉴定是随之而来较为繁琐的工作。单导向RNA(single-guide RNA,sgRNA)靶序列的设计和确定不仅影响后续靶向基因组的效率,还可作为优化鉴定、筛选方法的参考。本研究在选取sgRNA靶序列时,不仅依据软件的评分,还分析了sgRNA靶序列是否含有酶切位点,以便对后续纯合子/杂合子进行鉴定。结果显示,以特异引物扩增的野生型小鼠Chrm3基因片段可被限制性内切酶BanⅡ切为两个片段;而纯合子小鼠"丢失"该酶切位点,其PCR产物不能被切开;杂合子小鼠PCR产物被不完全切开,凝胶电泳结果可见三条带。本研究结果提示该策略可有效简化基因编辑动物建系鉴定工作,提高鉴定效率及改善阳性动物辨识效果。
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关键词
CRISPR/Cas9
毒蕈碱型乙酰胆碱受体M3亚型
遗传改变小鼠
纯合子
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职称材料
题名
限制性内切酶策略鉴定CRISPR/Cas9介导的Chrm3基因敲除小鼠
被引量：
3
1
作者
高旭
马宁
王大勇
张赫
张艳芬
徐亚
贺军
徐书会
霍亚丽
杜智敏
机构
哈尔滨医科大学
基础
医学院
生物化学与分子生物学
教研室
哈尔滨医科大学附属第二临床医学院实验诊断教研室
哈尔滨医科大学
附属
第二
医院
临床
药学药物研究所
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第4期404-409,共6页
基金
哈尔滨医科大学于维汉院士杰出青年培养基金(2014)
黑龙江省博士后科研启动金(No.LBH-Q15108)
+1 种基金
高等学校博士学科点专项科研基金项目(No.20122307110002)
国家自然科学基金项目(No.81570534)~~
文摘
CRISPR/Cas9技术是近年发展起来的快速基因编辑技术。通过该技术已对多种生物的基因组进行了编辑。由此产生的基因编辑动物的建系与鉴定是随之而来较为繁琐的工作。单导向RNA(single-guide RNA,sgRNA)靶序列的设计和确定不仅影响后续靶向基因组的效率,还可作为优化鉴定、筛选方法的参考。本研究在选取sgRNA靶序列时,不仅依据软件的评分,还分析了sgRNA靶序列是否含有酶切位点,以便对后续纯合子/杂合子进行鉴定。结果显示,以特异引物扩增的野生型小鼠Chrm3基因片段可被限制性内切酶BanⅡ切为两个片段;而纯合子小鼠"丢失"该酶切位点,其PCR产物不能被切开;杂合子小鼠PCR产物被不完全切开,凝胶电泳结果可见三条带。本研究结果提示该策略可有效简化基因编辑动物建系鉴定工作,提高鉴定效率及改善阳性动物辨识效果。
关键词
CRISPR/Cas9
毒蕈碱型乙酰胆碱受体M3亚型
遗传改变小鼠
纯合子
Keywords
CRISPR/Cas9
muscarinic acetylcholine receptor subtype M3
genetically modified mice
homozygote
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
限制性内切酶策略鉴定CRISPR/Cas9介导的Chrm3基因敲除小鼠
高旭
马宁
王大勇
张赫
张艳芬
徐亚
贺军
徐书会
霍亚丽
杜智敏
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
3
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