人核糖核酸酶A超家族抗微生物活性及其作用机制 被引量：2

1

作者 黄萍 孟庆泰 张凤民 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期507-515,共9页

人核糖核酸酶A(human RNase A)超家族包含13个具有不同生物活性的成员(RNase 1~RNase 13),其蛋白质结构除具有催化保守序列外,还具有显著多样性的序列,决定了人类核糖核酸酶A可发挥核糖核酸酶活性之外的生物学功能。人核糖核酸酶A超家... 人核糖核酸酶A(human RNase A)超家族包含13个具有不同生物活性的成员(RNase 1~RNase 13),其蛋白质结构除具有催化保守序列外,还具有显著多样性的序列,决定了人类核糖核酸酶A可发挥核糖核酸酶活性之外的生物学功能。人核糖核酸酶A超家族成员在多种免疫细胞例如嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、单核细胞和巨噬细胞中表达,并可被分泌以发挥多种多样的生物学功能,包括抗微生物活性、促进宿主防御、参与血管生成及精子成熟等。其中,人核糖核酸酶A超家族部分成员,可通过水解病毒RNA、抑制病毒复制、破坏细菌细胞壁、促进微生物凝集、损伤寄生虫细胞膜和线粒体膜等直接作用,以及通过宿主天然免疫细胞介导的间接作用,发挥抗微生物及寄生虫活性,参与宿主防御。本文对人核糖核酸酶A的抗微生物(包括病毒、细菌、真菌)和抗寄生虫活性及其作用机制进行综述,并对人核糖核酸酶A作为抗微生物活性物质和天然免疫分子,用于治疗严重和耐药微生物感染的前景进行展望。 展开更多

关键词 人类核糖核酸酶A 抗微生物活性 宿主防御 先天免疫 微生物 感染

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人缺血脑组织中TNF-α和IL-1β的表达 被引量：28

2

作者 钟照华 李国忠 +6 位作者 李呼伦 赵文然 田野 李殿俊 谷鸿喜 王海涛 董秀芹 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期349-350,363,共3页

目的 :检测人缺血脑组织中TNF α和IL 1β的表达。 方法 :将 13例脑梗死的死亡病例按发病时间分成 <2d、3～ 5d、 >5d3个组 ,以非缺血侧半球作为对照 ,用免疫组化染色法检测缺血脑组织中TNF α和IL 1β的表达。结果 :人脑缺血后... 目的 :检测人缺血脑组织中TNF α和IL 1β的表达。 方法 :将 13例脑梗死的死亡病例按发病时间分成 <2d、3～ 5d、 >5d3个组 ,以非缺血侧半球作为对照 ,用免疫组化染色法检测缺血脑组织中TNF α和IL 1β的表达。结果 :人脑缺血后缺血病灶中TNF α和IL 1β呈高表达 ,与正常侧脑组织相比较有极显著差异。TNF α和IL 1β表达细胞的分布与缺血灶相一致 ,呈局灶性分布。TNF α的表达高峰在病后 2d内。IL 1β表达高峰在病后 3～ 5d。在病后 5d ,缺血侧TNF α和IL 1β的表达与正常侧无显著差异。结论 :人类脑缺血组织中TNF α和IL 1β的表达与动物实验的结果相似 ,提示TNF α和IL 1β参与了脑缺血损伤 。 展开更多

关键词 TNF—α IL—1β 脑缺血

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RT套式PCR检测血浆HCV RNA及与抗HCV检测的比较 被引量：12

3

作者 赵继义 刘雪梅 +3 位作者 郭薇媛 高磊 钟照华 谷鸿喜 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2001年第4期37-38,共2页

应用微量血清热变性法提取核酸 ,逆转录套式聚合酶链反应 (RT nestPCR)检测血浆HCVRNA ,并与抗HCVELISA检测结果比较 ,对HCVRNA阳性标本进行HGVRNA的筛查。结果在 32例抗HCV阳性和 2 0例抗HCV阴性血浆中 ,HCVRNA分别检出 18例和 2例 ,... 应用微量血清热变性法提取核酸 ,逆转录套式聚合酶链反应 (RT nestPCR)检测血浆HCVRNA ,并与抗HCVELISA检测结果比较 ,对HCVRNA阳性标本进行HGVRNA的筛查。结果在 32例抗HCV阳性和 2 0例抗HCV阴性血浆中 ,HCVRNA分别检出 18例和 2例 ,总符合率为 70 % ,2 0例HCVRNA阳性者中有 2例合并感染HBV ,1例合并感染HGV。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 逆转录套式PCR 血浆 HCVRNA 检测 抗体

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β-内酰胺酶抑制剂研究进展 被引量：33

4

作者 蔡文辉 张文莉 +1 位作者 付英梅 张凤民 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期805-809,共5页

β-内酰胺酶抑制剂能抑制耐药菌产生的β-内酰胺酶,常与β-内酰胺类抗生素联合使用,能使抗生素中的β-内酰胺环免遭水解,保护抗生素的抗菌作用。1976年,英国从链霉菌中发现第一个β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸,其能抑制部分广谱和超广谱β... β-内酰胺酶抑制剂能抑制耐药菌产生的β-内酰胺酶,常与β-内酰胺类抗生素联合使用,能使抗生素中的β-内酰胺环免遭水解,保护抗生素的抗菌作用。1976年,英国从链霉菌中发现第一个β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸,其能抑制部分广谱和超广谱β-内酰胺酶,常与阿莫西林联合应用,可使阿莫西林对某些细菌的MIC值降低。随着抗生素的大量使用以及具有β-内酰胺酶相关的耐药性的细菌的增加,许多β-内酰胺酶抑制剂相继被发现。根据β-内酰胺酶抑制剂的结构,主要将其分为含有β-内酰胺环结构的抑制剂和不含β-内酰胺环结构的抑制剂。本文就目前国内外β-内酰胺酶抑制剂的研究现状进行综述。 展开更多

关键词 Β-内酰胺酶 酶抑制剂 细菌耐药

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急性早幼粒细胞白血病细胞分化的调控机制新进展 被引量：9

5

作者 于丽 吴静 +2 位作者 王迪 肖骁 张凤民 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1003-1006,共4页

急性早幼粒细胞白血病(APL)在1957年首次被描述为急性髓系白血病的一个常见亚型,占急性髓系白血病的10%～15%,以t(12; 17)(q22; q12)易位为特征,主要表现为未成熟的粒细胞在发育早期分化阻滞。而影响APL细胞分化的因素有很多,包括基因... 急性早幼粒细胞白血病(APL)在1957年首次被描述为急性髓系白血病的一个常见亚型,占急性髓系白血病的10%～15%,以t(12; 17)(q22; q12)易位为特征,主要表现为未成熟的粒细胞在发育早期分化阻滞。而影响APL细胞分化的因素有很多,包括基因表达异常、自噬、氧化应激、表观遗传学等。目前,通过促进APL细胞分化的治疗可降低死亡率,延长持续缓解时间。本文主要对调控APL细胞分化的因素及其机制进行综述。 展开更多

关键词 急性早幼粒细胞白血病 细胞分化 基因表达异常 自噬 氧化应激 表观遗传学

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当归补血汤对免疫抑制合并隐孢子虫感染小鼠的治疗作用的研究 被引量：6

6

作者 张晓莉 于新慧 +5 位作者 唐小云 刘爱琴 宋宝辉 刘亚威 王志龙 凌虹 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期710-713,共4页

目的探讨当归补血汤(Angelicae Sinensis Decoction for Supplementing Blood,ASDSB)对免疫抑制合并隐孢子虫感染的小鼠的治疗作用。方法建立免疫抑制合并隐孢子虫感染模型,随后用ASDSB治疗,并设对照组。每日计数小鼠粪便中卵囊数量,测... 目的探讨当归补血汤(Angelicae Sinensis Decoction for Supplementing Blood,ASDSB)对免疫抑制合并隐孢子虫感染的小鼠的治疗作用。方法建立免疫抑制合并隐孢子虫感染模型,随后用ASDSB治疗,并设对照组。每日计数小鼠粪便中卵囊数量,测定外周血T细胞亚群、血清可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)和肠液分泌型免疫球蛋白A(sIgA)的水平,并进行肠组织病理检测。结果与模型组相比较,大剂量ASDSB组的小鼠粪便卵囊排出数量明显减少(P<0.01),肠粘膜损伤较模型组轻,并且可以提高免疫抑制小鼠的CD4+T水平,促进肠道粘膜sIgA的产生,降低外周血sIL-2R水平。结论大剂量ASDSB对免疫抑制合并隐孢子虫感染的小鼠的治疗作用是通过提高机体免疫功能发挥的。 展开更多

关键词 免疫抑制 隐孢子虫 当归补血汤(ASDSB) 免疫功能

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IL-12、IL-7、IL-2体外协同诱导人PBMC增殖和PBMC杀瘤活性的实验研究 被引量：5

7

作者 徐红薇 吴长有 +5 位作者 李波 任欢 钟照华 李呼伦 邢淑贤 田景先 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第5期338-341,共4页

研究了重组ＩＬ１２、ＩＬ７、ＩＬ２协同对健康人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）的体外增殖和杀瘤活性的影响。结果表明，高浓度ＩＬ２与低浓度ＩＬ２协同可引起ＰＢＭＣ明显增殖，若在该培养体系中加入低浓度的ＩＬ２，可... 研究了重组ＩＬ１２、ＩＬ７、ＩＬ２协同对健康人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）的体外增殖和杀瘤活性的影响。结果表明，高浓度ＩＬ２与低浓度ＩＬ２协同可引起ＰＢＭＣ明显增殖，若在该培养体系中加入低浓度的ＩＬ２，可使这种增殖效应显著增强。如果加大ＩＬ１２剂量时会产生更强的细胞毒活性，并呈现剂量依赖关系。在此培养条件下的培养上清中亦检出了较高水平的ＩＦＮγ。对培养３～１４ｄ的协同刺激细胞表型分析显示，ＣＤ５６抗原阳性细胞百分率呈递增趋势，提示ＣＤ５６＋的ＮＫ细胞构成了产生增殖和杀伤效应的主要细胞群体。 展开更多

关键词 白细胞介素 PBMC 增殖 细胞毒 肿瘤 免疫疗法

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大鼠脑缺血后胶质细胞向树突状细胞转化的研究 被引量：6

8

作者 李呼伦 钟照华 +1 位作者 李国忠 金连弘 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期524-527,共4页

目的　探讨缺血脑组织中树突状细胞 (DC)的来源 ,以其及是否参与脑缺血损伤的过程。方法　用线栓方法封闭大鼠右侧大脑中动脉制作动物模型。用免疫组化染色法 ,检测脑缺血 1h到第 6天时 ,缺血脑组织中DC(OX6 2 + )的存在 ,以及胶质细胞 ... 目的　探讨缺血脑组织中树突状细胞 (DC)的来源 ,以其及是否参与脑缺血损伤的过程。方法　用线栓方法封闭大鼠右侧大脑中动脉制作动物模型。用免疫组化染色法 ,检测脑缺血 1h到第 6天时 ,缺血脑组织中DC(OX6 2 + )的存在 ,以及胶质细胞 /巨噬细胞 (OX4 2 + )转化成DC(OX6 2 + )的情况。同时检测活化后的DC样细胞表达MHC Ⅱ类分子的水平。结果　缺血脑半球和假手术的脑半球相比较 ,在 12hDC的数量明显增加 (P <0 .0 0 1)。在脑缺血组中 ,缺血脑半球与非缺血脑半球相比较 ,DC的数量也增多 (P <0 .0 0 1)。脑缺血第 6天 ,缺血组与假手术组进行比较 ,DC表达MHC Ⅱ类分子 (OX6 2 + OX6 + )显著升高(P <0 .0 0 1)。缺血脑半球在 1h到第 6天 ,OX4 2 + 的细胞转变成OX6 2 + OX4 2 + 的细胞逐渐增加 ,第 6天缺血脑半球与非缺血脑半球相比较显著增多 (P <0 .0 0 1)。脑缺血损伤的面积与以每 10 0mm2 脑组织切片为单位的OX6 2 + 细胞的数量呈正相关 (R2 =0 .8914 ,P <0 .0 0 1)。结论　脑缺血后 ,脑缺血组织中DC数量的增加与脑损伤的面积呈正相关 ,提示DC参与了脑缺血过程。大鼠脑缺血后 ,从胶质细胞向DC样细胞的转化是缺血脑组织中DC的来源之一。 展开更多

关键词 大鼠 树突状细胞 脑缺血 胶质细胞 巨噬细胞 损伤机制

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P38信号通路在人脐静脉内皮细胞表达P-选择素中的作用 被引量：5

9

作者 李艳波 邓华聪 +2 位作者 郑丹 李呼伦 周宏博 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期291-293,共3页

目的 :研究P38信号通路 (P38mitogen activatedproteinki nase ,P38MAPK)在人脐静脉内皮细胞表达P 选择素以及糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法 :分别以高葡萄糖、糖基化终产物 (AGE)、高胰岛素和过氧化氢刺激人脐静脉内皮细胞系ECV 30... 目的 :研究P38信号通路 (P38mitogen activatedproteinki nase ,P38MAPK)在人脐静脉内皮细胞表达P 选择素以及糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法 :分别以高葡萄糖、糖基化终产物 (AGE)、高胰岛素和过氧化氢刺激人脐静脉内皮细胞系ECV 30 4 ,再以P38MAPK特异性抑制剂SB2 0 35 80预处理 ,观察ECV 30 4细胞系中磷酸化P38MAPK和P 选择素的表达。结果 :4种刺激因素均可单独激活P38MAPK ,使磷酸化P38MAPK表达量明显增加 ,P 选择素表达量也明显增加 ;以SB2 0 35 80预处理后 ,P 选择素的表达被明显抑制。结论 :P38MAPK是P 选择素的上游信号分子 。 展开更多

关键词 P38信号通路 P-选择素 糖尿病 动脉粥样硬化

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流感病毒RNA聚合酶的分离与纯化 被引量：4

10

作者 曲章义 赵育莹 +2 位作者 崔洪波 石浜明 谷鸿喜 《微生物学杂志》 CAS CSCD 1999年第3期56-56,共1页

关键词 流感病毒 RNA聚合酶 分离 纯化

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HPV 6b L1基因原核表达系统的构建及鉴定 被引量：2

11

作者 刘希君 庄敏 +4 位作者 商庆龙 王燕 魏兰兰 李迪 谷鸿喜 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2005年第4期25-27,共3页

克隆、构建人乳头瘤病毒6b型(HPV6b)L1基因重组质粒,并进行表达和鉴定。用PCR方法,从尖锐湿疣标本中扩增出HPV6b型L1基因,构建重组克隆质粒pblue-HPV6bL1,测序分析其基因变异。将本地株HPV6b型L1基因酶切后连接到原核表达质粒pBAD,构建... 克隆、构建人乳头瘤病毒6b型(HPV6b)L1基因重组质粒,并进行表达和鉴定。用PCR方法,从尖锐湿疣标本中扩增出HPV6b型L1基因,构建重组克隆质粒pblue-HPV6bL1,测序分析其基因变异。将本地株HPV6b型L1基因酶切后连接到原核表达质粒pBAD,构建原核表达系统pBAD-HPV6bL1/Top10,酶切鉴定证明重组质粒的正确性。经L-Arobinose诱导后表达HPV6b型L1蛋白,利用SDS-PAGE对表达产物进行鉴定。经酶切及序列分析鉴定,重组质粒pBAD-HPV6bL1构建成功,诱导后能够表达L1融合蛋白。HPV6bL1重组质粒构建成功,并获得HPV6bL1蛋白,为该蛋白的功能及HPV的基因工程疫苗研究提供了物质基础。 展开更多

关键词 尖锐湿疣 人乳头瘤病毒6b型 L1基因 基因克隆 基因表达 原核表达系统 酶切鉴定 质粒构建 HPV 基因重组质粒

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青蒿素类药物抗柯萨奇B组病毒的体外实验研究 被引量：2

12

作者 马培林 李惠 +2 位作者 董欣 李呼伦 张凤民 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2003年第2期40-40,共1页

关键词 青蒿素类药物 柯萨奇B组病毒 体外实验 治疗

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肺腺癌同源正常组织中差异表达基因的克隆 被引量：2

13

作者 王辉 杨秋霞 +4 位作者 李殿俊 李呼伦 马建群 张欣 吕雪莹 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期578-581,共4页

目的　从与肺腺癌同源的正常组织中筛选差异表达基因 ,以期从分子水平阐明机体抑制肿瘤发生的机制。方法　利用抑制性消减杂交分别获得肺腺癌组织及肺腺癌同源正常组织cDNA片段 ,并建立相应的cDNA文库。用肺腺癌组织及与其同源的正常组... 目的　从与肺腺癌同源的正常组织中筛选差异表达基因 ,以期从分子水平阐明机体抑制肿瘤发生的机制。方法　利用抑制性消减杂交分别获得肺腺癌组织及肺腺癌同源正常组织cDNA片段 ,并建立相应的cDNA文库。用肺腺癌组织及与其同源的正常组织cDNA片段作为探针 ,分别进行逆向和正向斑点杂交 ,筛选与同源正常组织探针杂交而不与肺腺癌组织探针杂交的阳性克隆并测序 ,测序结果与GenBank中的序列进行同源性分析。结果　在肺腺癌同源正常组织中 ,获得 12个差异表达基因片段 ,其中 4个与细胞凋亡相关基因有较高的同源性 ;8个与人类不同染色体的不同区域有较高的同源性 ,功能不详。结论　推测肺腺癌同源正常组织中存在凋亡相关基因等 ,它们可能通过多种途径促进细胞凋亡而抑制细胞异常增殖 。 展开更多

关键词 克隆 肺腺癌同源正常组织 差异表达基因 抑制性消减杂交 细胞凋亡

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香菇多糖抗肿瘤作用的机理 被引量：19

14

作者 曲章义 牛美娟 +2 位作者 郭彩玲 吕淑云 潘迎捷 《中国食用菌》 1997年第5期3-4,共2页

香菇多糖抗肿瘤作用的机理曲章义牛美娟郭彩玲（黑龙江省哈尔滨医科大学微生物学教研室１５００８６）吕淑云（黑龙江省医学情报研究所哈尔滨）潘迎捷（上海农业科学院食用菌研究所高效、无副作用的抗肿瘤药物的筛选和开发利用，一直是... 香菇多糖抗肿瘤作用的机理曲章义牛美娟郭彩玲（黑龙江省哈尔滨医科大学微生物学教研室１５００８６）吕淑云（黑龙江省医学情报研究所哈尔滨）潘迎捷（上海农业科学院食用菌研究所高效、无副作用的抗肿瘤药物的筛选和开发利用，一直是预防、治疗癌症领域中的重点研究课题... 展开更多

关键词 香菇 多糖 抗肿瘤作用

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风疹病毒毒株的分离鉴定及其E1基因部分序列分析 被引量：2

15

作者 王燕 姜昕 +1 位作者 谷鸿喜 郭彩玲 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2001年第4期26-27,共2页

利用逆转录巢式PCR技术检测 6 1例风疹高发人群的血液标本 ,经细胞培养技术从RVRNA阳性标本中分离风疹病毒株 ,应用细胞病变、血凝试验、电镜观察及PCR扩增等实验证实其为风疹病毒 ,命名为HRB株。同时还对该分离株的E1基因部分片段进行... 利用逆转录巢式PCR技术检测 6 1例风疹高发人群的血液标本 ,经细胞培养技术从RVRNA阳性标本中分离风疹病毒株 ,应用细胞病变、血凝试验、电镜观察及PCR扩增等实验证实其为风疹病毒 ,命名为HRB株。同时还对该分离株的E1基因部分片段进行序列分析并与其它型别基因进行比较 ,结果显示 ,此分离株与中国疫苗株(BRDⅡ )及另外 2株香港分离株均不在同一分支 ,而是位于由 2 0世纪 6 展开更多

关键词 风疹病毒 分离鉴定 E1基因 序列分析

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常规培养与缺氧条件下BCG菌体内外sRNA的表达检测 被引量：1

16

作者 韩雪 顾伟 +4 位作者 李婷 范云帆 张文莉 赵吉子 付英梅 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2021年第2期60-66,共7页

近期发现细菌的sRNA在菌体内和菌体外均具有一定的生物学功能。为研究结核分枝杆菌菌体内外sRNA的表达情况,通过分析卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin Vaccine,BCG)菌体和外泌体RNA测序结果,采用RT-qPCR法检测常规培养与缺氧条件下BCG... 近期发现细菌的sRNA在菌体内和菌体外均具有一定的生物学功能。为研究结核分枝杆菌菌体内外sRNA的表达情况,通过分析卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin Vaccine,BCG)菌体和外泌体RNA测序结果,采用RT-qPCR法检测常规培养与缺氧条件下BCG菌体内外sRNA相对表达量,分析菌体内外sRNA谱的差异。结果显示,常规培养时,菌体内丰度较高的sRNA为MTS2823、MTS1338与ASdes,菌体外丰度较高的为Mcr3、MTS2823和AS1890。菌体内受缺氧诱导表达增加的是MTS2823、MTS1338、MTS0997和G2。其中MTS1338与G2的启动子区发现了DosR的结合基序。无论是否缺氧,MTS0997、G2、Mcr7和AS1890在菌体外的相对表达量均高于菌体内,而C8只在缺氧时菌体外表达增高。研究揭示了BCG菌体内外sRNA表达谱不同,且一部分sRNA在常规培养和缺氧应激时向菌体外释放,同时发现了细菌受缺氧诱导的sRNA种类。 展开更多

关键词 卡介苗(BCG) 细胞外RNA 细菌sRNA 缺氧 RT-QPCR

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人乳头瘤病毒16型晚期基因L1在大肠杆菌中的表达 被引量：1

17

作者 郭淑元 凌虹 +3 位作者 庄敏 林道红 郭彩玲 谷鸿喜 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2000年第4期22-23,54,共3页

人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）感染与宫颈癌的发生关系密切。其晚期蛋白Ｌ１是主要结构蛋白，可以刺激机体产生中和抗体，对病毒攻击可以起到保护作用。本研究将ＨＰＶ１６型中国分离株的Ｌ１基因定向克隆到原核表达载体ｐＥＴ－２１ｃ质粒中... 人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）感染与宫颈癌的发生关系密切。其晚期蛋白Ｌ１是主要结构蛋白，可以刺激机体产生中和抗体，对病毒攻击可以起到保护作用。本研究将ＨＰＶ１６型中国分离株的Ｌ１基因定向克隆到原核表达载体ｐＥＴ－２１ｃ质粒中，建立ＨＰＶ１６ Ｌ１在大肠杆菌中的高效表达系统ｐＥＴ２１ｃ－ＨＰＶ１６Ｌ１，该系统在ＩＰＴＧ的诱导下可表达 ６０ｋｕ的 Ｌ１蛋白，表达效率为 ２３％，此蛋白通过Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ得到证实。该表达体系的成功建立可以为进一步研究ＨＰＶ１６ Ｌ１蛋白的分子和免疫学特性以及基因疫苗的研制提供实验依据。 展开更多

关键词 人类乳头瘤病毒16型 晚期基因L1 基因表达 大肠杆菌

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采用正交设计优化HPV16L1重组蛋白表达的实验研究 被引量：1

18

作者 陈思佳 商庆龙 +3 位作者 王燕 李晓波 刘希君 谷鸿喜 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第1期46-49,共4页

通过正交试验对构建的人乳头瘤病毒(HPV)16型L1蛋白的重组表达菌株pQE31-HPV16L1/M15(pREP4)进行表达条件的优化,以增加目的蛋白的表达量。实验选取影响蛋白表达的4个主要因素,分别为诱导时间、诱导剂浓度、细菌密度和诱导温度,采用四... 通过正交试验对构建的人乳头瘤病毒(HPV)16型L1蛋白的重组表达菌株pQE31-HPV16L1/M15(pREP4)进行表达条件的优化,以增加目的蛋白的表达量。实验选取影响蛋白表达的4个主要因素,分别为诱导时间、诱导剂浓度、细菌密度和诱导温度,采用四因素两水平正交试验,通过SDS-PAGE及Western blot测定重组表达蛋白,以Tanon凝胶成像系统分析目的蛋白含量作为检测条件优化效果的指标,所得数据采用SAS软件进行统计分析。实验结果表明在37℃、IPTG0.5mmol/L,菌密度OD600为1.0的条件下诱导4h所得蛋白量最大;经统计正交分析的最佳诱导条件为37℃、0.5mmol/LIPTG和菌密度OD600为1.0的条件下诱导7h。经实验验证,应用正交分析的最佳条件诱导所得目的蛋白量最大,但实际中通常采用诱导4h条件。实验证明正交试验可以用于基因工程菌株蛋白表达条件优化过程,提高工作效率。 展开更多

关键词 人乳头瘤病毒16型 L1蛋白 正交试验 条件优化

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细菌基因组结构:识别种系群的分子标志(英文) 被引量：1

19

作者 刘树林 刘桂荣 +9 位作者 李绍贤 刘葳峤 郑君芳 朱万孚 谷鸿喜 郭晓奎 马佳毓 K.E.Sanderson 周宇光 R.N.Johnston 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期457-463,共7页

目的 :评价细菌基因组结构作为种系标志在细菌亲缘关系识别中的应用。方法 :本研究选用 3个属的细菌 :Klebsiel la ,Neisseria以及Vibrio。为得到完整的基因组DNA ,整个提取的操作过程都在琼脂糖凝胶中进行。经proteinaseK除蛋白后 ,基... 目的 :评价细菌基因组结构作为种系标志在细菌亲缘关系识别中的应用。方法 :本研究选用 3个属的细菌 :Klebsiel la ,Neisseria以及Vibrio。为得到完整的基因组DNA ,整个提取的操作过程都在琼脂糖凝胶中进行。经proteinaseK除蛋白后 ,基因组DNA置于TE缓冲液中待用。内切酶Ⅰ CeuⅠ是本研究中主要的工具酶。酶切后的基因组DNA经脉冲场电泳分离。结果 :Klebsiella的所有菌株 (两个种 ,即Klebsiellapneumoniae和Klebsiellaoxytoca)都有一个共同的基因组结构 ,而这一“Klebsiella基因组结构”与Escherichiacoli或Salmonella的基因组结构很相似 ,其主要不同之处有 3点 :(1)有 8个rrn操纵子 (Escherichiacoli和Salmonella各有 7个 ) ;(2 )基因组较大 ;(3)Ⅰ CeuⅠE片段易位。以往学术界认为Neisseria具有高度易变和多态的基因组结构。而我们的研究结果表明 ,Neisseria的基本基因组结构是相对稳定的。我们比较研究了 30 0株N .meningitidis,结果仅仅发现了少数几个不同的基因组结构。其中Z2 4 91株代表 5 0 %的群体 (Ⅰ型基因组结构 ) ,MC5 8株代表 2 0 %的群体 (Ⅱ型基因组结构 ) ,N0 4 5株代表 17%的群体 (Ⅲ型基因组结构 )。已知Z2 4 91和MC5 8代表不同的种系群 。 展开更多

关键词 基因结构 种系群 I-Ceu I

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HPV16和11型L1基因双价重组质粒的构建

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作者 庄敏 谷鸿喜 +2 位作者 魏兰兰 肖鹏 孔卫兰 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2003年第2期60-60,共1页

关键词 HPVl6型 Ll基因 双价重组质粒 构建 人乳头瘤病毒 HPV11型

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