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抗人羧酸酯酶-Ⅱ单克隆抗体的制备与鉴定
被引量：
3
1
作者
武正华
唐晓波
+4 位作者
王志刚
纪宏宇
于磊
刘慧文
朱大岭
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第2期148-151,共4页
目的制备鼠抗人羧酸酯酶-Ⅱ(humancarboxyles-terases-Ⅱ,hCE-Ⅱ)单克隆抗体(mAb)并对其特性进行鉴定。方法以含hCE-Ⅱ的人肝脏微粒体蛋白混合抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备鼠抗hCE-Ⅱ的mAb,并用Protein-G亲和层析法纯化mAb。...
目的制备鼠抗人羧酸酯酶-Ⅱ(humancarboxyles-terases-Ⅱ,hCE-Ⅱ)单克隆抗体(mAb)并对其特性进行鉴定。方法以含hCE-Ⅱ的人肝脏微粒体蛋白混合抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备鼠抗hCE-Ⅱ的mAb,并用Protein-G亲和层析法纯化mAb。用间接ELISA法测定mAb的效价,以Westernblot鉴定mAb的特异性、免疫组化染色法对mAb相应的抗原进行组织定位。用免疫沉淀和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assistedlaserdesorption/ionizationtime-of-flightmassspectrometry,MALDI-TOF-MS)得到相应的肽质量指纹谱(peptidemassfingerprint,PMF),再通过Mascot在人类蛋白质数据库中分析比对鉴定mAb对应的抗原。结果获得1株可持续、稳定分泌抗hCE-Ⅱ的mAb的杂交瘤细胞系。杂交瘤细胞分泌的mAbIg的亚类(型)为IgG1(κ),腹水mAb的效价达1×10-7。Westernblot分析显示,在Mr为62000处有1条清晰的带。免疫组化染色显示,该mAb可与肝细胞的浆蛋白结合(hCE-Ⅱ存在于肝细胞浆内微粒体),而不与血管平滑肌细胞内的蛋白结合。该mAb免疫沉淀物的Mr为62000,与hCE-Ⅱ的Mr相符。对免疫沉淀的蛋白质进行质谱鉴定证实,该mAb对应的抗原为hCE-Ⅱ。结论制备出的鼠抗hCE-Ⅱ的mAb效价高、特异性良好,为进一步研究hCE-Ⅱ的功能及其在肝癌等癌症的诊断和治疗中的作用提供了工具。
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关键词
人羧酸酯酶-Ⅱ
单克隆抗体
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
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职称材料
地塞米松对不同月龄雌性大鼠成骨细胞雌激素受体表达的影响
2
作者
聂雷生
陶树清
+2 位作者
张国峰
刘慧雯
陶天遵
《中国骨质疏松杂志》
CAS
CSCD
2007年第6期385-389,共5页
目的观察体外培养的不同月龄雌性大鼠成骨细胞内雌激素受体水平的差异及地塞米松(1×10-8mol/L)对不同月龄雌性大鼠成骨细胞雌激素受体表达的影响。方法采用酶消化法分别提取、纯化和培养新生(24h以内)、2、4、8、12月龄雌性Wistar...
目的观察体外培养的不同月龄雌性大鼠成骨细胞内雌激素受体水平的差异及地塞米松(1×10-8mol/L)对不同月龄雌性大鼠成骨细胞雌激素受体表达的影响。方法采用酶消化法分别提取、纯化和培养新生(24h以内)、2、4、8、12月龄雌性Wistar大鼠成骨细胞,并且用Western-blot、ECL法检测体外培养成骨细胞雌激素受体的水平。结果提取的大鼠成骨细胞生长情况良好,碱性磷酸酶染色阳性,具有成骨细胞特性。Western-blot结果显示:雌性大鼠成骨细胞内雌激素受体水平在新生鼠和8月龄鼠较高,在2、4、12月龄鼠较低;地塞米松组成骨细胞雌激素受体表达水平在新生和2月龄低于对照组,在4、8、12月龄高于对照组。结论不同月龄雌性大鼠体外培养的成骨细胞雌激素受体的表达水平不同;1×10-8mol/L地塞米松对体外培养的雌性大鼠成骨细胞雌激素受体水平有影响且与大鼠的月龄有关。
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关键词
成骨细胞
地塞米松
雌激素受体
大鼠
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职称材料
题名
抗人羧酸酯酶-Ⅱ单克隆抗体的制备与鉴定
被引量：
3
1
作者
武正华
唐晓波
王志刚
纪宏宇
于磊
刘慧文
朱大岭
机构
哈尔滨医科大学
药
学院
生物制药学
教研室
哈尔滨医科大学
附属二院药学部
哈尔滨医科大学基础医学院组织与胚胎学教研室
哈尔滨医科大学
黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第2期148-151,共4页
基金
中国人类肝脏蛋白质组计划(2004BA711A20)
黑龙江省科技厅科技攻关项目(230103550116131)
黑龙江省教育厅科学技术研究项目(10551158)
文摘
目的制备鼠抗人羧酸酯酶-Ⅱ(humancarboxyles-terases-Ⅱ,hCE-Ⅱ)单克隆抗体(mAb)并对其特性进行鉴定。方法以含hCE-Ⅱ的人肝脏微粒体蛋白混合抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备鼠抗hCE-Ⅱ的mAb,并用Protein-G亲和层析法纯化mAb。用间接ELISA法测定mAb的效价,以Westernblot鉴定mAb的特异性、免疫组化染色法对mAb相应的抗原进行组织定位。用免疫沉淀和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assistedlaserdesorption/ionizationtime-of-flightmassspectrometry,MALDI-TOF-MS)得到相应的肽质量指纹谱(peptidemassfingerprint,PMF),再通过Mascot在人类蛋白质数据库中分析比对鉴定mAb对应的抗原。结果获得1株可持续、稳定分泌抗hCE-Ⅱ的mAb的杂交瘤细胞系。杂交瘤细胞分泌的mAbIg的亚类(型)为IgG1(κ),腹水mAb的效价达1×10-7。Westernblot分析显示,在Mr为62000处有1条清晰的带。免疫组化染色显示,该mAb可与肝细胞的浆蛋白结合(hCE-Ⅱ存在于肝细胞浆内微粒体),而不与血管平滑肌细胞内的蛋白结合。该mAb免疫沉淀物的Mr为62000,与hCE-Ⅱ的Mr相符。对免疫沉淀的蛋白质进行质谱鉴定证实,该mAb对应的抗原为hCE-Ⅱ。结论制备出的鼠抗hCE-Ⅱ的mAb效价高、特异性良好,为进一步研究hCE-Ⅱ的功能及其在肝癌等癌症的诊断和治疗中的作用提供了工具。
关键词
人羧酸酯酶-Ⅱ
单克隆抗体
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
Keywords
human carboxylesterases- Ⅱ
monoclonal antibody
matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
地塞米松对不同月龄雌性大鼠成骨细胞雌激素受体表达的影响
2
作者
聂雷生
陶树清
张国峰
刘慧雯
陶天遵
机构
哈尔滨医科大学
附属第二医院骨外科
哈尔滨医科大学
基础
医学院
组胚
教研室
出处
《中国骨质疏松杂志》
CAS
CSCD
2007年第6期385-389,共5页
基金
黑龙江省"十五"攻关项目(G00C190702)
文摘
目的观察体外培养的不同月龄雌性大鼠成骨细胞内雌激素受体水平的差异及地塞米松(1×10-8mol/L)对不同月龄雌性大鼠成骨细胞雌激素受体表达的影响。方法采用酶消化法分别提取、纯化和培养新生(24h以内)、2、4、8、12月龄雌性Wistar大鼠成骨细胞,并且用Western-blot、ECL法检测体外培养成骨细胞雌激素受体的水平。结果提取的大鼠成骨细胞生长情况良好,碱性磷酸酶染色阳性,具有成骨细胞特性。Western-blot结果显示:雌性大鼠成骨细胞内雌激素受体水平在新生鼠和8月龄鼠较高,在2、4、12月龄鼠较低;地塞米松组成骨细胞雌激素受体表达水平在新生和2月龄低于对照组,在4、8、12月龄高于对照组。结论不同月龄雌性大鼠体外培养的成骨细胞雌激素受体的表达水平不同;1×10-8mol/L地塞米松对体外培养的雌性大鼠成骨细胞雌激素受体水平有影响且与大鼠的月龄有关。
关键词
成骨细胞
地塞米松
雌激素受体
大鼠
Keywords
Osteoblast
Dexamethasone
Estrogen receptor： Rat
分类号
R782.2 [医药卫生—口腔医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗人羧酸酯酶-Ⅱ单克隆抗体的制备与鉴定
武正华
唐晓波
王志刚
纪宏宇
于磊
刘慧文
朱大岭
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007
3
在线阅读
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职称材料
2
地塞米松对不同月龄雌性大鼠成骨细胞雌激素受体表达的影响
聂雷生
陶树清
张国峰
刘慧雯
陶天遵
《中国骨质疏松杂志》
CAS
CSCD
2007
0
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