猪瘟病毒RT-nPCR检测方法的建立及陕西部分地区猪瘟病毒E0基因分子特征分析 被引量：6

1

作者 吴旭锦 朱小甫 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2014年第10期15-21,共7页

【目的】建立一种基于E0基因高保守性的猪瘟病毒(CSFV)RT-nPCR检测方法,为临床诊断提供一种可靠方法,同时对获得的陕西猪瘟病毒E0基因进行序列分析,揭示猪瘟病毒基因的分子衍化特征,为防控猪瘟提供参考。【方法】根据GenBank中的猪瘟病... 【目的】建立一种基于E0基因高保守性的猪瘟病毒(CSFV)RT-nPCR检测方法,为临床诊断提供一种可靠方法,同时对获得的陕西猪瘟病毒E0基因进行序列分析,揭示猪瘟病毒基因的分子衍化特征,为防控猪瘟提供参考。【方法】根据GenBank中的猪瘟病毒参考序列,设计并合成了2对引物,建立猪瘟RT-nPCR检测方法,并对该方法的灵敏度和特异性进行检测。用该方法对采自陕西部分猪场的32份疑似猪瘟病料进行检测,并对获得的8株流行毒株E0基因进行测序及同源性分析。【结果】建立了猪瘟病毒RT-nPCR检测方法,该方法检测CSFV cDNA含量的最低极限为6.7×10-5 ng/L,从BVDV、PRRSV、PCV-2、PRV和PPV等参考毒株中提取或反转录获得的DNA/cDNA中不能扩增出目的条带,提示方法灵敏度高、特异性强。对32份疑似猪瘟组织病料的检测发现,有12份呈现阳性,阳性率为37.5%。序列分析表明,8株流行毒株间E0核苷酸、氨基酸同源性分别在97.0%~99.3%和94.8%~98.5%。与参考毒株的核苷酸同源性为83.4%~95.4%,氨基酸同源性为85.8%~98.1%。流行毒株与我国疫苗毒株HCLV、C HVRI的核苷酸同源性仅为83.4%~85.1%,氨基酸同源性仅为86.1%~89.1%,呈现出较明显的远离疫苗株的变异趋势。进化树分析发现,8个流行毒株均属于基因Ⅱ群。首次发现了1株流行毒株(SXWN02株)E0Rnase活性基序位点第94位由E变异为K,其他位点未发生变异。【结论】建立的RT-nPCR检测方法灵敏度高、特异性强,可作为猪瘟病毒的临床诊断方法。陕西部分地区猪场猪瘟感染仍较严重,需要做好防控工作。流行毒株E0基因发生较大变异,尤其是在关键位点上出现变异毒株,需要密切关注。 展开更多

关键词 猪瘟 RT-nPCR方法 E0基因 分子特征

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利用M基因鉴别新城疫病毒中强毒株与弱毒株RT-nPCR方法的建立 被引量：6

2

作者 朱小甫 吴旭锦 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2017年第5期21-25,共5页

根据GenBank上公开的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)基因序列,针对M基因差异位点设计了3对引物,通过优化反应体系与条件,建立了能够区分NDV中强毒株与弱毒株的RT-nPCR检测方法。特异性试验显示,NDV中强毒株扩增出543、375 bp... 根据GenBank上公开的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)基因序列,针对M基因差异位点设计了3对引物,通过优化反应体系与条件,建立了能够区分NDV中强毒株与弱毒株的RT-nPCR检测方法。特异性试验显示,NDV中强毒株扩增出543、375 bp两个条带,弱毒株仅出现375 bp一个条带,其他常见禽病毒为阴性。灵敏度试验结果表明,该方法检测c DNA含量极限为6.15×10^(-4)ng/μL。临床样品检测发现鸡群NDV弱毒带毒率高,中强毒株带毒率较低。结果表明,本研究成功建立了一种基于M基因的快速鉴别诊断NDV中强毒株与弱毒株的RT-nPCR方法。 展开更多

关键词 新城疫病毒 中强毒株 弱毒株 M基因 鉴别诊断

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2013年-2017年陕西省猪伪狂犬病病毒分子流行病学调查与gE基因序列变异分析 被引量：6

3

作者 朱小甫 吴旭锦 《动物医学进展》 北大核心 2019年第2期22-27,共6页

调查2013年-2017年间陕西省猪伪狂犬病流行情况,并对流行毒株gE基因进行测序分析,为猪伪狂犬病防控提供参考。采用套式PCR,检测了陕西9个地市、556个存在繁殖障碍现象猪场的1 390份样品中PRV感染情况,通过Vero细胞传代分离到11个PRV地... 调查2013年-2017年间陕西省猪伪狂犬病流行情况,并对流行毒株gE基因进行测序分析,为猪伪狂犬病防控提供参考。采用套式PCR,检测了陕西9个地市、556个存在繁殖障碍现象猪场的1 390份样品中PRV感染情况,通过Vero细胞传代分离到11个PRV地方流行毒株,并进行了gE基因片段克隆与序列分析。2013年-2017年间陕西存在繁殖障碍的猪场中PRV感染阳性率38.1%~83.3%,样品阳性率46.5%~85.3%。11株PRV核苷酸同源性为99.2%~100%,氨基酸同源性为98.3%~100%,提示这11个PRV流行毒株高度同源。在测定的118个氨基酸位点中,有6个位点与参考序列存在一定差异,分别是T/I31→S31、Q33→L33、Q52→R52、L/R67→A67、A68→D68和T115→R/P/S115。基因进化树分析显示,11株PRV亲缘关系很近,集中分布在一个小的分支上,与我国福建流行毒株Min-A关系密切,与欧美毒株亲缘关系较远。陕西省采样猪场表现出PRV感染率高、感染强度大的特点,gE基因出现多个点突变,且变异趋势相同,形成了一个独立的进化分支。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病病毒 分子流行病学 GE基因 变异 病毒分离

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新城疫国标RT-PCR诊断方法的优化与应用 被引量：5

4

作者 吴旭锦 朱小甫 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2015年第3期27-31,共5页

【目的】对新城疫(ND)国标RT-PCR诊断方法进行改进和优化,建立一种灵敏度高、特异性好、能直接从组织病料中进行目的基因检测的NDV套式RT-PCR(nest RT-PCR,RT-nPCR)方法。【方法】根据GenBank上发表的新城疫病毒基因序列,设计并合成了2... 【目的】对新城疫(ND)国标RT-PCR诊断方法进行改进和优化,建立一种灵敏度高、特异性好、能直接从组织病料中进行目的基因检测的NDV套式RT-PCR(nest RT-PCR,RT-nPCR)方法。【方法】根据GenBank上发表的新城疫病毒基因序列,设计并合成了2对引物,通过筛选最佳RT-nPCR条件,建立了NDV RT-nPCR检测方法。通过灵敏性试验、特异性试验、病料检测对比试验等,验证了RT-nPCR方法的可靠性和适用性。【结果】建立的NDV RT-nPCR方法灵敏度较高,检测的极限为5.6×10-5 ng/L;特异性较好,仅能从NDV中扩增到目的条带。从6份疑似组织病料中能直接检测出4份阳性结果,而国标方法均未检出,病毒分离鉴定结果与优化后的RT-nPCR方法符合率达100%。【结论】建立了一种灵敏度高、特异性好、可直接从组织病料中快速检测NDV核酸的RT-nPCR方法。 展开更多

关键词 新城疫 诊断方法 RT-PCR

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PRRSV经典株和变异株RT-nPCR鉴别诊断方法的建立 被引量：2

5

作者 朱小甫 吴旭锦 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2016年第1期25-30,共6页

【目的】建立一种能够区分猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)经典株和变异株的RT-nPCR诊断方法,能够从病料组织、血清或精液中直接进行目的基因检测,达到快速诊断的目的。【方法】根据GenBank上发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒基因序列,设计... 【目的】建立一种能够区分猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)经典株和变异株的RT-nPCR诊断方法,能够从病料组织、血清或精液中直接进行目的基因检测,达到快速诊断的目的。【方法】根据GenBank上发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒基因序列,设计并合成了2对引物,通过改变不同的反应体系和反应条件,建立PRRSV经典株和变异株的RT-nPCR诊断方法,并通过灵敏性试验、特异性试验、病料组织和血清或精液样品检测,验证建立RT-nPCR方法的适用性。【结果】建立了PRRSV经典株和变异株的RT-nPCR诊断方法,该方法检测的cDNA含量极限为1.3×10-7 pg/μL;且仅能从PRRSV毒株中扩增到目的条带,从CH-1R经典株扩增出649bp条带,从SXXY/2013变异株扩增出562bp条带,电泳后能清晰区别,而从其他参考毒株中均不能扩增出目的条带。从48份疑似病料组织和血清中能直接检测出31份阳性结果。【结论】建立了一种灵敏度高、特异性好、可直接从病料组织和血清中快速鉴别PRRSV经典株和变异株的RT-nPCR方法。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征 经典株 变异株 诊断方法

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咸阳地区猪瘟病毒E2基因扩增与序列分析 被引量：2

6

作者 吴旭锦 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第12期49-53,共5页

为了解陕西咸阳地区猪瘟流行毒株 E2基因变异情况，采用套式 PCR 方法，扩增了17个流行毒株和2个市售疫苗毒株 E2基因主要抗原区，并进行了序列比对分析。结果表明，17个流行毒株和兔化弱毒株（HCLV）株相比，E2基因主要抗原区核苷酸同... 为了解陕西咸阳地区猪瘟流行毒株 E2基因变异情况，采用套式 PCR 方法，扩增了17个流行毒株和2个市售疫苗毒株 E2基因主要抗原区，并进行了序列比对分析。结果表明，17个流行毒株和兔化弱毒株（HCLV）株相比，E2基因主要抗原区核苷酸同源性在79．0％～80．9％，氨基酸同源性在80．0％～84．4％。市售疫苗和 HCLV 株核苷酸同源性为93．4％，氨基酸同源性为90．0％。系统发育树分析发现17个流行毒株同属基因Ⅱ群。流行毒株与 HCLV 相应氨基酸位点相比，总体变异氨基酸位点占26．4％，呈现出典型的变异特征。17个流行毒株在2个氨基酸关键位点出现了705（T→I）、729（L→A）变异现象，可能导致抗原性发生改变。发现 E2蛋白高保守序列 RYLASLH（713～719）变异现象，即 XYSY01株719位发生了 H→R 变异。结果提示，近年陕西咸阳地区猪瘟病毒流行毒株变异较为一致，E2基因核苷酸与编码氨基酸有较明显的变异。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E2 基因 分子流行病学 变异分析

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鹦鹉幼稚病PCR诊断方法的建立与应用

7

作者 朱小甫 吴旭锦 +2 位作者 张文娟 熊忙利 邢蕾 《动物医学进展》 北大核心 2020年第5期19-24,共6页

建立一种鹦鹉幼稚病(BFD)PCR诊断方法,为临床快速确诊鹦鹉幼稚病提供技术手段。参考GenBank中公开的BFDV基因组序列,设计了2对用于阳性质粒构建引物和1对检测引物,采用套式PCR从临床疑似病料中扩增BFDV VP1基因,构建VP1基因阳性质粒,以... 建立一种鹦鹉幼稚病(BFD)PCR诊断方法,为临床快速确诊鹦鹉幼稚病提供技术手段。参考GenBank中公开的BFDV基因组序列,设计了2对用于阳性质粒构建引物和1对检测引物,采用套式PCR从临床疑似病料中扩增BFDV VP1基因,构建VP1基因阳性质粒,以阳性质粒为模板,优化检测引物扩增体系与条件,进行灵敏度试验、特异性检测和临床样品检测,挑选3份不同地区阳性样品测序验证。结果显示,成功构建了BFDV VP1基因阳性质粒pGEM-T-VP1,建立的PCR检测方法检测下限为105.8copies/μL。用该方法检测时仅能以pGEM-T-VP1为模板扩增到目的条带,检测5种常见禽病毒均为阴性。应用建立的方法对75份疑似病料进行检测,结果19份为阳性,阳性率为25.3%。测定了3株不同地区BFDV流行毒株VP1基因片段序列,比对分析发现核苷酸序列同源性为99.4%~100%,在基因进化树上这3株病毒处在一个独立的分支上,显示出一定的地域特征。成功建立了一种灵敏度高、特异性好的BFD PCR诊断方法,应用于临床诊断显示出良好效果。 展开更多

关键词 鹦鹉幼稚病 PCR诊断 多瘤病毒 序列分析

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鸡痘的病原、诊断与防治

8

作者 吴旭锦 《养殖技术顾问》 2014年第7期118-118,共1页

鸡痘在全世界广泛分布,集约化鸡场更易出现流行。其危害主要表现为鸡生长迟缓,产蛋率下降,易继发其他传染病,如葡萄球菌病、支原体感染、传染性鼻炎等,严重时可以导致鸡群死亡率上升。1病原特点鸡痘是由禽痘病毒引起的鸡接触性传染病。... 鸡痘在全世界广泛分布,集约化鸡场更易出现流行。其危害主要表现为鸡生长迟缓,产蛋率下降,易继发其他传染病,如葡萄球菌病、支原体感染、传染性鼻炎等,严重时可以导致鸡群死亡率上升。1病原特点鸡痘是由禽痘病毒引起的鸡接触性传染病。痘病毒属双股脱氧核糖核酸病毒,痘病毒科,病毒颗粒呈复式对称,有囊膜。各种动物的痘病毒虽然形态结构相似,但对寄主的感染严格专一,禽痘病毒致鸡痘病、鸽痘病,马痘病毒致马痘病,牛痘病毒致牛痘病。 展开更多

关键词 病原特点 鸡痘病 接触性传染病 禽痘病毒 支原体感染 防治 诊断 脱氧核糖核酸

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Ⅰ群禽腺病毒套式PCR检测方法的建立与应用 被引量：8

9

作者 朱小甫 吴旭锦 +1 位作者 高睿 尚红梅 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第3期74-77,共4页

本研究根据GenBank发表的Ⅰ群禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)基因序列,设计了2对通用检测引物,通过反应体系和条件优化,建立了Ⅰ群禽腺病毒套式PCR检测方法。通过灵敏性检测、特异性试验以及对临床病料中FAdV检测验证实用性与可靠性。... 本研究根据GenBank发表的Ⅰ群禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)基因序列,设计了2对通用检测引物,通过反应体系和条件优化,建立了Ⅰ群禽腺病毒套式PCR检测方法。通过灵敏性检测、特异性试验以及对临床病料中FAdV检测验证实用性与可靠性。建立的套式PCR检测方法灵敏度为3.12×10-6 ng/μL;特异性试验证实该方法仅能从FAdV参考阳性株扩增出750 bp的预期目的条带,其他5种常见禽病毒均为阴性。结果表明,本研究成功建立了一种灵敏度高、特异性好的检测Ⅰ群禽腺病毒通用套式PCR方法,为临床FAdV感染的快速准确诊断提供了技术手段。 展开更多

关键词 群禽腺病毒 Hexon基因 套式PCR 检测

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陕甘地区猪PCV3流行毒株的检测 被引量：6

10

作者 朱小甫 吴旭锦 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2018年第11期11-17,共7页

【目的】调查陕甘地区猪场PCV3流行情况,为进一步研究与防控PCV3奠定基础。【方法】根据GenBank中PCV3基因序列,设计并合成了1对引物,对96个猪场的96份混合样本进行PCV3检测,将阳性样品进行序列测定分析,同时对PCV3阳性样品进行6种常见... 【目的】调查陕甘地区猪场PCV3流行情况,为进一步研究与防控PCV3奠定基础。【方法】根据GenBank中PCV3基因序列,设计并合成了1对引物,对96个猪场的96份混合样本进行PCV3检测,将阳性样品进行序列测定分析,同时对PCV3阳性样品进行6种常见猪群病毒病检测。【结果】检测出了PCV3阳性样品8份,阳性率为8.33%。其中7份样品与其他6种常见猪群病毒存在不同程度的混合感染现象,混合感染率87.5%。序列分析表明,陕甘地区猪场8株PCV3基因片段核苷酸同源性在98.3%～100%,与不同地域参考毒株的同源性在97.6%～100%。【结论】陕甘地区2015年样品中即存在PCV3感染,不同地区的PCV3基因同源性较高,遗传稳定;基因进化树显示不同地域PCV3毒株交叉分布,没有明显的地域特征。 展开更多

关键词 猪圆环病毒3型 陕甘地区 序列分析 流行病学

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猪伪狂犬病病毒套式PCR检测方法的建立与应用 被引量：7

11

作者 吴旭锦 朱小甫 《动物医学进展》 北大核心 2016年第6期18-21,共4页

对伪狂犬病病毒(PRV)国标PCR方法进行优化,建立一种高灵敏度的套式PCR方法。根据伪狂犬病病毒gD基因序列,设计并合成了2对引物,通过反应体系和条件的优化建立套式PCR方法。通过灵敏性试验、特异性试验、病料检测对比试验等验证建立方法... 对伪狂犬病病毒(PRV)国标PCR方法进行优化,建立一种高灵敏度的套式PCR方法。根据伪狂犬病病毒gD基因序列,设计并合成了2对引物,通过反应体系和条件的优化建立套式PCR方法。通过灵敏性试验、特异性试验、病料检测对比试验等验证建立方法的适用性。结果表明,建立的方法检测伪狂犬病病毒DNA的极限为2.6×10-7 ng/mL,灵敏度比国家标准方法提高了1 000倍,从疑似PRV感染组织病料中能大幅度提高阳性检出率。本研究成功建立了一种灵敏度高、特异性好的快速检测猪伪狂犬病病毒的套式PCR检测方法。 展开更多

关键词 伪狂犬病病毒 套式PCR 诊断 应用

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蛋鸡禽腺病毒4型流行毒株SX17株的分离与鉴定 被引量：2

12

作者 朱小甫 吴旭锦 +1 位作者 张文娟 熊忙利 《动物医学进展》 北大核心 2020年第6期124-129,共6页

从陕西渭南蛋鸡场疑似心包积液-肝炎综合征病例中分离鉴定病原,并研究其致病性与分子特征,为防控心包积液-肝炎综合征提供参考。采集并处理临床样品,通过SPF鸡胚绒毛尿囊膜接种传代分离病毒,测定分离毒株的血凝性和鸡胚半数致死量(ELD5... 从陕西渭南蛋鸡场疑似心包积液-肝炎综合征病例中分离鉴定病原,并研究其致病性与分子特征,为防控心包积液-肝炎综合征提供参考。采集并处理临床样品,通过SPF鸡胚绒毛尿囊膜接种传代分离病毒,测定分离毒株的血凝性和鸡胚半数致死量(ELD50),进行攻毒试验、组织病理观察和病毒在不同组织中的分布检测,测定hexon基因序列并比对分析。结果显示,病毒传至第5代后鸡胚死亡出现规律性,鸡胚不同部位病毒分布检测发现肝脏、卵黄囊、尿囊液和绒毛尿囊膜中有病毒分布,将获得的病毒命名为SX17株。血凝性测定结果表明,SX17株对鸡、鸭、鹅红细胞均无血凝特性;测得ELD50为10-3.54/0.1 mL;攻毒2 d后试验鸡陆续出现临床症状,病理组织学检查肝脏、脾脏、心脏和肾脏均有典型变化;攻毒死亡鸡只肝脏、肠道、心包积液和肾脏中有病毒分布,在肌肉、粪便、心肌、肺脏和气管中未检测到病毒核酸。hexon基因序列比对提示SX17株为FAdV-4型流行毒株。结果表明,鸡胚分离血清4型禽腺病毒可收获肝脏、卵黄囊、绒毛尿囊膜和尿囊液,临床病例样品采集以肝脏、肠道、心包积液和肾脏为佳,分离到的SX17株为致病性较强的FAdV-4型流行毒株。 展开更多

关键词 禽腺病毒 心包积液-肝炎综合征 hexon基因 ELD50 分离与鉴定

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鉴别伪狂犬病毒gE基因缺失疫苗毒与野毒套式PCR方法的建立 被引量：4

13

作者 朱小甫 吴旭锦 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2016年第4期26-30,共5页

为建立一种能够鉴别伪狂犬病毒gE基因缺失疫苗毒与野毒套式PCR方法,根据GenBank上发表的伪狂犬病毒gD、gE基因序列,设计并合成了4对引物,对反应体系和条件进行优化,建立复合套式PCR方法。通过灵敏性试验、特异性试验、病料中PRV检测对... 为建立一种能够鉴别伪狂犬病毒gE基因缺失疫苗毒与野毒套式PCR方法,根据GenBank上发表的伪狂犬病毒gD、gE基因序列,设计并合成了4对引物,对反应体系和条件进行优化,建立复合套式PCR方法。通过灵敏性试验、特异性试验、病料中PRV检测对比等方法验证建立方法的适用性。结果表明,该方法检测的极限为2.78×10^(-4)pg/L,并且仅能从PRV野毒株扩增出354、217 bp目的条带,PRV疫苗扩增出了217bp单条带,其他5种常见感染猪的病毒均为阴性。 展开更多

关键词 伪狂犬病毒 GD基因 GE基因 鉴别诊断 套式PCR

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Ⅰ群禽腺病毒hexon基因分型与序列分析 被引量：6

14

作者 朱小甫 吴旭锦 《动物医学进展》 北大核心 2018年第10期46-49,共4页

对鸡群中感染的Ⅰ群禽腺病毒hexon基因进行分型与序列分析,以期明确Ⅰ群禽腺病毒基因型的分布和hexon基因变异情况。参考GenBank上FAdV基因序列,设计2对引物,采用套式PCR技术扩增临床病料中Ⅰ群禽腺病毒hexon基因,测序后获得了8株FAdV h... 对鸡群中感染的Ⅰ群禽腺病毒hexon基因进行分型与序列分析,以期明确Ⅰ群禽腺病毒基因型的分布和hexon基因变异情况。参考GenBank上FAdV基因序列,设计2对引物,采用套式PCR技术扩增临床病料中Ⅰ群禽腺病毒hexon基因,测序后获得了8株FAdV hexon基因片段。结果表明,构建系统进化树发现,其中HM、SXFS、LQQD、HXGB、GSPL、DYQY和FP共7株属于FAdV-4型,而GS株属于FAdV-1型。7株FAdV-4型毒株核苷酸同源性在99.9%～100%之间,推导的氨基酸序列同源性均为100%,提示这7株FAdV-4型流行毒株高度同源。FAdV-1型的GS与CELO株核苷酸、推导的氨基酸序列同源性均为99.2%,提示GS与CELO株亲缘关系较近。在鸡群中发现存在FAdV-1型和FAdV-4型Ⅰ群禽腺病毒,各血清型毒株之间高度同源,毒株遗传稳定性高。 展开更多

关键词 I群禽腺病毒 hexon基因 序列分析 基因分型

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一起蛋鸡鸡白痢病例的病原分离与鉴定 被引量：2

15

作者 吴旭锦 朱小甫 +4 位作者 杨萍 高睿 张文娟 熊忙利 邢蕾 《陕西农业科学》 2019年第5期76-79,共4页

调查陕西渭南一育成鸡场鸡群发病死亡原因,为临床拟定控制方案提供参考。通过采集待检组织样品,细菌连续划线分离、生化试验鉴定、PCR检测细菌特异性基因、动物回归试验与药敏试验,检测排查常见禽病毒性病原,并对鸡场水质进行了检测。... 调查陕西渭南一育成鸡场鸡群发病死亡原因,为临床拟定控制方案提供参考。通过采集待检组织样品,细菌连续划线分离、生化试验鉴定、PCR检测细菌特异性基因、动物回归试验与药敏试验,检测排查常见禽病毒性病原,并对鸡场水质进行了检测。结果分离到一种中等大小的革兰氏阴性杆菌,通过细菌生化试验与鸡白痢沙门氏菌invA基因PCR检测证实分离到一株鸡白痢沙门氏菌。细菌纯培养物接种小白鼠12h全部死亡。药物敏感性试验表明分离菌耐药性极强,供试35种药物仅米诺环素中度敏感。常见禽病毒性病原核酸检测均为阴性。鸡场水质检测发现细菌严重超标,证实本病例是由于水质污染导致的鸡白痢沙门氏菌病。综合以上结果确诊为单纯鸡白痢沙门氏菌病,提出了具体控制措施,取得了良好效果。 展开更多

关键词 鸡白痢沙门氏菌 水质检测 分离 鉴定

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一例赛鸽毛滴虫病的诊治 被引量：8

16

作者 朱小甫 吴旭锦 秦永康 《陕西农业科学》 2019年第10期103-104,共2页

对陕西西安某赛鸽公棚发病鸽进行了临床症状观察、病理剖检以及实验室病原检测,确诊为鸽毛滴虫病。对病例进行了病因分析并提出了防治措施,取得了良好效果。该病例可为赛鸽养殖防治鸽毛滴虫病提供参考。

关键词 鸽毛滴虫病 赛鸽 诊治

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猪腹泻病例中大肠杆菌的分离与鉴定 被引量：3

17

作者 吴旭锦 朱小甫 《陕西农业科学》 2018年第6期72-74,共3页

从咸阳市某猪场采集腹泻仔猪病料,进行细菌分离培养、生化试验、动物致病性试验与药敏试验,并进行腹泻性病毒检测排查。病料镜检发现一种革兰氏阴性、两端钝圆、中等大小的杆菌。分离纯化后进行生化试验,发现本菌符合大肠杆菌生化特征... 从咸阳市某猪场采集腹泻仔猪病料,进行细菌分离培养、生化试验、动物致病性试验与药敏试验,并进行腹泻性病毒检测排查。病料镜检发现一种革兰氏阴性、两端钝圆、中等大小的杆菌。分离纯化后进行生化试验,发现本菌符合大肠杆菌生化特征。细菌纯培养物接种小白鼠24 h全部死亡。对分离菌进行药物敏感性试验,结果表明分离菌对头孢哌酮、复方新诺明、头孢曲松、呋喃妥因与头孢噻肟高度敏感。常见猪群病毒性腹泻检测均为阴性。结果表明仔猪腹泻病原为大肠杆菌。 展开更多

关键词 猪 腹泻 大肠杆菌 分离 鉴定

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H9亚型禽流感病毒DJ15株的分离与鉴定 被引量：4

18

作者 朱小甫 杨萍 吴旭锦 《陕西农业科学》 2016年第5期66-67,共2页

从临床发病鸡群中采集病料,进行了鸡胚接种、HA-HI试验以及RT-PCR鉴定。结果表明分离到的病毒能凝集鸡红细胞,但是该血凝性仅能被AIV H9阳性血清所抑制,不能被NDV、EDS76和AIVH5阳性血清所抑制;AIV H9特异性RT-PCR诊断结果为阳性,最终... 从临床发病鸡群中采集病料,进行了鸡胚接种、HA-HI试验以及RT-PCR鉴定。结果表明分离到的病毒能凝集鸡红细胞,但是该血凝性仅能被AIV H9阳性血清所抑制,不能被NDV、EDS76和AIVH5阳性血清所抑制;AIV H9特异性RT-PCR诊断结果为阳性,最终确定分离到H9亚型禽流感病毒,命名为DJ15株。 展开更多

关键词 H9亚型 禽流感 DJ15株 分离 鉴定

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猪瘟疫苗毒株和流行毒株RT-nPCR检测方法的建立 被引量：1

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作者 吴旭锦 朱小甫 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期335-341,共7页

为给临床快速鉴别诊断猪瘟提供技术依据,根据GenBank公布的CSFV全基因序列,结合猪瘟序列测定结果,针对NS5B基因区域设计2条通用外扩引物、2条通用内扩引物和1条疫苗毒株特异性内扩引物,建立一种可鉴别猪瘟疫苗毒株和流行毒株的RT-nPCR... 为给临床快速鉴别诊断猪瘟提供技术依据,根据GenBank公布的CSFV全基因序列,结合猪瘟序列测定结果,针对NS5B基因区域设计2条通用外扩引物、2条通用内扩引物和1条疫苗毒株特异性内扩引物,建立一种可鉴别猪瘟疫苗毒株和流行毒株的RT-nPCR诊断方法。结果显示,该方法可从HCLV株扩增出2条大小分别为261bp和157bp的片段,可从Shimen、SXYL2006、GX54和SD2002等流行毒株扩增出1条261bp的片段,其他几种常见猪病毒检测均呈阴性;灵敏度试验表明,检测的cDNA质量浓度极限为3.4×10-7 pg/L;116份临床样品中有37份样品检测呈阳性,阳性率为32%;分析部分阳性病料E2基因序列也证实检测结果的准确性。说明:建立的RT-nPCR鉴别诊断方法灵敏度高、特异性好,能直观区分猪瘟疫苗毒株和流行毒株。 展开更多

关键词 猪瘟 反转录-复合套式聚合酶链式反应 鉴别诊断

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一起高致病性猪蓝耳病和圆环病毒2型混合感染病例分析 被引量：3

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作者 朱小甫 吴旭锦 《陕西农业科学》 2015年第12期51-52,共2页

对某发病猪场一起以呼吸道症状为主的败血性疾病进行了临床症状观察、病理剖检以及实验室病原PCR/RT-PCR检测,确诊为高致病性猪蓝耳病和圆环病毒2型混合感染。分析了发病原因并提出了防治措施,为养殖户提供案例参考。

关键词 高致病性猪蓝耳病 圆环病毒2型 检测

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