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陕西省猪流行性腹泻病毒S基因克隆与生物学信息分析
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作者 朱小甫 吴旭锦 +2 位作者 郑红青 尹宝英 熊忙利 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2023年第2期1-10,21,共11页
【目的】分析2014-2021年陕西省猪群猪流行性腹泻病毒(PEDV)主要毒力基因的生物学信息特征,揭示陕西省PEDV流行毒株基因变异情况,为防控猪流行性腹泻提供理论参考。【方法】参考PEDV全基因序列设计4对引物,采用RT-PCR方法分段扩增10株... 【目的】分析2014-2021年陕西省猪群猪流行性腹泻病毒(PEDV)主要毒力基因的生物学信息特征,揭示陕西省PEDV流行毒株基因变异情况,为防控猪流行性腹泻提供理论参考。【方法】参考PEDV全基因序列设计4对引物,采用RT-PCR方法分段扩增10株陕西省PEDV流行毒株S基因。利用生物信息分析软件,将获得的PEDV流行毒株S基因与GenBank中公开的57株PEDV序列进行比对分析。【结果】获得了10株陕西省PEDV流行毒株S基因全序列,长度为4149~4167 bp。将序列上传GenBank,获得相应的登录号为OL855978~OL855987。系统进化树分析显示,67个PEDV毒株分为G1a、G1b、G2a和G2b 4个亚群,10株PEDV流行毒株均属于G2b亚群,且遗传距离较近,与我国多个省区近年流行毒株亲缘关系较近。同源性分析结果表明,10株流行毒株之间S基因核苷酸序列同源性为95.4%~98.3%,氨基酸同源性为91.0%~98.1%;10株流行毒株与疫苗毒株S基因核苷酸序列同源性为91.7%~98.5%,氨基酸同源性为87.8%~98.5%。与G1a亚群的SD-M、CV777疫苗毒株核苷酸、氨基酸相比同源性均较低,而与G2b亚群的AJ1102、LNCT2、LW/L、XJ-DB2疫苗毒株核苷酸、氨基酸相比同源性均较高。与CV777 S蛋白相比较,共有88个氨基酸位点出现变异,变异位点占总位点数的6.36%(88/1383),其中在59~62位氨基酸有7株毒株出现了QGVN插入,在140位氨基酸有8株毒株出现N插入,在160~161位氨基酸有7株毒株出现DG缺失。S蛋白主要的中和表位、抗原表位和单抗识别表位出现多个变异位点。二级结构预测发现,与CV777相比较,多数流行毒株S蛋白的α螺旋、无规则卷曲占比稍有增加,β转角、延伸占比有所下降。S蛋白糖基化位点预测结果表明,与CV777株相比,流行毒株有多个引入或缺失的糖基化位点。【结论】陕西省PEDV流行毒株S蛋白抗原性发生了较大变化,推测疫苗免疫保护效果下降与此密切相关。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 S基因 基因序列分析 生物学信息 陕西省
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鸽源血清4型禽腺病毒分离鉴定及免疫原性分析
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作者 吴旭锦 朱小甫 +2 位作者 尹宝英 郑红青 翁茂洋 《山西农业科学》 2025年第3期128-134,共7页
为研究鸽源禽腺病毒病原的致病性及其灭活苗的保护效果,通过采集临床样品,采用LMH细胞接种传代分离病毒、PCR检测及序列分析鉴定病毒,测定分离毒株的半数组织细胞感染量(TCID_(50)),制备油乳剂灭活苗,免疫SPF鸡后每7 d采血定量测定禽腺... 为研究鸽源禽腺病毒病原的致病性及其灭活苗的保护效果,通过采集临床样品,采用LMH细胞接种传代分离病毒、PCR检测及序列分析鉴定病毒,测定分离毒株的半数组织细胞感染量(TCID_(50)),制备油乳剂灭活苗,免疫SPF鸡后每7 d采血定量测定禽腺病毒抗体水平。结果表明,病料接种LMH细胞4代后细胞病变出现规律性,序列测定表明,分离毒株为血清4型禽腺病毒,将获得的病毒命名为XAYB2022株。TCID_(50)测定结果为每毫升10^(-6.1)。发病死亡鸡病理检查肝脏、肾脏、心包以及肺脏均有典型变化。灭活苗免疫结果表明,抗体在第4周达到顶峰,质量浓度为14.266 ng/L,随后抗体质量浓度缓慢下降,16周时抗体质量浓度为5.471 ng/L,此时攻毒抗体仍能够完全保护。综上所述,成功分离到鸽源禽腺病毒流行毒株,该毒株制备的灭活苗显示出良好的保护效果。 展开更多
关键词 鸽源 禽腺病毒 灭活苗 血清4型 抗体
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一起赛鸽禽腺病毒与球虫混合感染的诊治
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作者 吴旭锦 朱小甫 +1 位作者 尹宝英 郑红青 《上海畜牧兽医通讯》 2024年第4期71-73,共3页
2023年9月,陕西咸阳某赛鸽公棚发生鸽群死亡病例。通过临床症状观察、解剖学病变分析与实验室检测,确定病因为禽腺病毒感染并发球虫感染。通过采取禽腺病毒高免卵黄抗体注射、抗球虫药物饮水以及对症疗法等综合性防制措施,鸽群恢复正常。
关键词 赛鸽 禽腺病毒 球虫 混合感染 诊治
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鹦鹉喙羽症病毒PCR检测方法的建立与应用
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作者 彭腾 王茜晨 +5 位作者 杨尚彤 李藤 朱小甫 吴旭锦 尹宝英 郑红青 《现代畜牧科技》 2024年第9期25-27,共3页
为建立一种灵敏特异的检测鹦鹉喙羽症病毒PCR方法,给临床快速诊断鹦鹉喙羽症提供技术支持,根据Genbank上公开的鹦鹉喙羽症病毒基因序列,比对分析找出高保守区域,设计了1对检测引物,提取鹦鹉喙羽症病毒阳性样品DNA模板,对扩增体系和反应... 为建立一种灵敏特异的检测鹦鹉喙羽症病毒PCR方法,给临床快速诊断鹦鹉喙羽症提供技术支持,根据Genbank上公开的鹦鹉喙羽症病毒基因序列,比对分析找出高保守区域,设计了1对检测引物,提取鹦鹉喙羽症病毒阳性样品DNA模板,对扩增体系和反应条件进行一系列调整,确定理想的PCR反应方案;通过10倍梯度稀释DNA模板法,确定该检测方法的灵敏度极限;应用该方法检测传染性法氏囊炎病毒、鸡传染性支气管炎病毒、新城疫病毒、传染性喉气管炎病毒、鸡痘病毒和Ⅰ群禽腺病毒4型这6种禽病病原,确定方法的特异性;运用该PCR方法检测90份临床样品,测试其实用性。结果表明,设计的检测引物能特异性扩增鹦鹉喙羽症病毒,其它6种家禽病毒均为阴性,其检测DNA浓度的下限是3.725×10^(-6)ng/μL。临床应用表明,90份疑似病料有28份为阳性,阳性率为31.1%。成功建立了一种灵敏度高、特异性好的鹦鹉喙羽症病毒PCR方法。 展开更多
关键词 鹦鹉喙羽症 病毒 聚合酶链式反应 检测 诊断
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猪圆环病毒3型LAMP检测方法的建立与应用 被引量:3
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作者 朱小甫 吴旭锦 李虹 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第3期133-137,共5页
建立一种检测PCV3的LAMP方法,为现场快速诊断提供技术支持。根据PCV3全基因序列,设计了4条特异性引物,通过反应成分和反应条件的优化,建立了检测PCV3的LAMP方法,经过灵敏度试验、特异性试验、重复性试验和临床样品检测对比试验,确定该... 建立一种检测PCV3的LAMP方法,为现场快速诊断提供技术支持。根据PCV3全基因序列,设计了4条特异性引物,通过反应成分和反应条件的优化,建立了检测PCV3的LAMP方法,经过灵敏度试验、特异性试验、重复性试验和临床样品检测对比试验,确定该方法的实用性。结果表明,该方法检测的极限为10 copies/μL的质粒模板,与PRV、PPV、PCV-2、猪大肠杆菌、猪沙门菌DNA无交叉反应,重复性良好。应用该方法检测84份组织病料或血清,PCV3阳性率为15.5%,常规PCR方法阳性率为13.1%,两种检测方法符合率为97.6%(82/84)。LAMP方法比常规PCR方法检出率更高,可用于PCV3的现场快速诊断。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型 环介导等温扩增 LAMP 检测
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一起猪流行性腹泻病毒与博卡病毒混合感染病例分析 被引量:4
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作者 朱小甫 吴旭锦 +1 位作者 郑红青 尹宝英 《陕西农业科学》 2022年第1期79-80,共2页
陕西渭南某猪场发生了一起仔猪腹泻病例,通过临床症状观察、病理解剖、细菌分离以及病原RT-PCR检测,确诊为一起流行性腹泻病毒混感博卡病毒病例。针对发病原因提出了防治措施,为防控仔猪腹泻提供参考。
关键词 猪流行性腹泻病毒 博卡病毒 诊断 检测
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猪德尔塔冠状病毒RT-nPCR检测方法的建立与N基因变异分析 被引量:1
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作者 朱小甫 吴旭锦 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第6期72-77,共6页
建立一种基于猪德尔塔冠状病毒(PDCo V)N基因的RT-n PCR检测方法,对陕西省猪群PDCo V感染情况进行流行病学调查,分析PDCo V流行毒株N基因变异情况。通过病毒分离、检测引物设计、反应体系与条件优化、灵敏性试验和特异性试验,建立了PDCo... 建立一种基于猪德尔塔冠状病毒(PDCo V)N基因的RT-n PCR检测方法,对陕西省猪群PDCo V感染情况进行流行病学调查,分析PDCo V流行毒株N基因变异情况。通过病毒分离、检测引物设计、反应体系与条件优化、灵敏性试验和特异性试验,建立了PDCo V RT-nPCR检测方法,并对N基因片段进行序列分析。结果表明:建立的RT-n PCR方法能够扩增出303 bp的N基因目的片段,检测单链c DNA的极限为2.0194×10^(-3)ng·μL^(-1),该方法检测PEDV、TGEV、PRo V、CSFV与PRRSV均无交叉反应,特异性良好;陕西省猪场184份样品检测结果显示,PDCo V阳性率为6.52%(12/184);N基因序列分析发现,获得的HY2019、QLS2020的N基因片段同源性为99.0%,提示可能为同一来源;进化树分析发现,HY2019、QLS2020与我国四川株SCNC201705、Sichuan2017、Sichuan2019同处于一个小的进化分支上,且均存在168~179位“TGTCTGTCTCTA”共12个核苷酸缺失,推测陕西株与四川株高度同源,可能起源于早期四川毒株。 展开更多
关键词 猪德尔塔冠状病毒 仔猪腹泻 检测 反转录-聚合酶链式反应
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猪博卡病毒1型nPCR检测方法的建立与 SXWN20株基因序列分析 被引量:1
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作者 朱小甫 吴旭锦 +4 位作者 郑红青 尹宝英 熊忙利 张文娟 张兆顺 《陕西农业科学》 2022年第11期82-86,共5页
建立了检测猪博卡病毒1型(PBoV)的nPCR方法,对陕西省部分猪群PBoV1型感染情况进行流行病学调查。通过优化反应体系与条件,测试了方法的灵敏性和特异性,建立了PBoV1型nPCR检测方法,并对阳性样品进行测序分析。结果表明,建立nPCR方法检测P... 建立了检测猪博卡病毒1型(PBoV)的nPCR方法,对陕西省部分猪群PBoV1型感染情况进行流行病学调查。通过优化反应体系与条件,测试了方法的灵敏性和特异性,建立了PBoV1型nPCR检测方法,并对阳性样品进行测序分析。结果表明,建立nPCR方法检测PBoV1型单链DNA的极限为4.742×10^(-2) ng/μL,该方法与PCV2、PCV3、PPV、猪链球菌和猪大肠杆菌DNA均无交叉反应,特异性良好。检测了陕西省猪场60份样品,PBoV1型阳性率为3.33%(2/60)。测序获得的SXWN20株VP1/VP2基因序列比对发现,SXWN20株与参比的PBoV1型毒株核苷酸同源性为96.6%~97.5%,与PBoV2/3/4/5型同源性仅为53.8%~59.7%。进化树分析显示,所有参比毒株分为3个大分支,SXWN20株与PBoV1型毒株处在一个进化分支,PBoV2型处在一个进化分支,PBoV3/4/5型处在一个进化分支。 展开更多
关键词 猪博卡病毒 核酸检测 序列分析 聚合酶链式反应
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复方牛至油纳米乳液制备及其对奶牛乳房炎四种病原菌的体外抗菌试验
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作者 张文娟 朱小甫 +1 位作者 尹宝英 熊忙利 《中南农业科技》 2022年第5期42-45,65,共5页
通过绘制伪三元相图,选择牛至油复合纳米乳液配方。采用透射电子显微镜和激光粒度分析仪对纳米乳液的乳滴形态和粒径分布进行了研究。通过光照试验、高速离心试验、加速试验和长期试验,研究了复方牛至油纳米乳液的稳定性。同时研究了复... 通过绘制伪三元相图,选择牛至油复合纳米乳液配方。采用透射电子显微镜和激光粒度分析仪对纳米乳液的乳滴形态和粒径分布进行了研究。通过光照试验、高速离心试验、加速试验和长期试验,研究了复方牛至油纳米乳液的稳定性。同时研究了复方牛至油纳米乳液对4种奶牛乳房炎病原菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和停乳链球菌)的体外抗菌活性。结果表明,牛至油和丁香酚(质量比2∶1)为油性相,蒸馏水为水相,吐温-80与无水乙醇在混合表面活性剂中的质量比为3∶1,复合表面活性剂与油的质量比为4∶1时,制备的复方牛至油纳米乳液为水油型。透射电子显微镜下为球形,无黏附,平均粒径为33.4 nm,多分散系数为0.062。复方牛至油纳米乳液在光照试验、高速离心试验、加速试验和长期试验中外观始终保持清澈透明,无分层、絮凝、脱色、破乳等现象。复方牛至油纳米乳液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和停乳链球菌的最小抑菌浓度(MIC)分别为0.375、0.375、0.187和0.187 g/mL,最低杀菌浓度(MBC)分别为0.750、0.750、0.375和0.375 g/mL,复方牛至油纳米乳液对引起奶牛乳房炎的4种常见病原菌具有良好的抑菌和杀菌作用,为开发防治奶牛乳房炎的中药有效成分提供了理论依据。 展开更多
关键词 复方牛至油纳米乳液 奶牛乳房炎 处方优化 抗菌试验
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