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抗间质上皮转化因子(c-Met)单价抗体的制备及生物学活性检测: 1; 作者郭佳蒋明 +5 位作者靳令经尹衍新孙慧于丽华毛玉婷房健民《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1544-1548,1553,共6页; 目的用抗人间质上皮转化因子(c-Met)阻断型嵌合抗体ch3E1D7表达质粒构建单价抗体慢病毒穿梭质粒,利用慢病毒表达系统实现其在HEK293T细胞中快速表达,并对纯化后抗体的亲和力及中和活性进行检测。方法设计抗c-Met的单价抗体,命名为mono3E... 展开更多; 关键词 C-MET 嵌合抗体单价抗体慢病毒表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

细胞间质上皮转化因子(c-Met)中和抗体的筛选及鉴定: 2; 作者蒋明于丽华 +2 位作者付敏毛玉婷尹衍新《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期777-782,共6页; 目的通过抗体的随机突变库和细胞展示技术,对具有中和活性的细胞间质上皮转化因子(c-Met)抗体进行结构和活性优化,获得亲和力高、激动活性低的抗体,并使其保持亲本抗体的中和及内化活性,提高抗体偶联药物(ADC)的成药性。方法构建和筛选c... 展开更多; 关键词细胞间质上皮转化因子(c-Met) 中和抗体流式细胞术; 在线阅读下载PDF 职称材料

抗人肝细胞生长因子受体单链抗体慢病毒载体的构建和应用被引量：3: 3; 作者陈永华郭佳 +4 位作者尹衍新蒋明朱红胜张国栋李冰宇《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期960-963,967,共5页; 目的构建可表达抗人肝细胞生长因子受体(HGFR)单链抗体(scFv)的慢病毒表达载体,将其感染HEK293细胞,检测该抗体的表达及与抗原结合活性。方法采用反转录PCR(RT-PCR)从分泌小鼠抗人HGFR抗体的杂交瘤细胞株(8E8)中扩增VH和VL基因,用重叠延... 展开更多; 关键词肝细胞生长因子受体单链抗体慢病毒表达载体; 在线阅读下载PDF 职称材料

间质上皮转化因子(c-Met)嵌合抗体重链CDR3随机突变哺乳动物细胞表面展示文库的构建被引量：1: 4; 作者郭佳蒋韵 +5 位作者滕飞尹衍新于丽华付敏蒋明房健民《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期557-562,共6页; 目的采用哺乳动物细胞表面展示技术构建间质上皮转化因子(c-Met)嵌合抗体3E1D7的重链补体决定区3(CDR3)随机突变抗体库。方法用定向进化的方法在嵌合抗体3E1D7重链CDR3内部造成基因随机突变,将其通过双酶切克隆到哺乳动物细胞展示载体pS... 展开更多; 关键词间质上皮转化因子(c-Met) 哺乳动物细胞表面展示流式细胞术; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名抗间质上皮转化因子(c-Met)单价抗体的制备及生物学活性检测: 1; 作者郭佳蒋明靳令经尹衍新孙慧于丽华毛玉婷房健民; 机构同济大学苏州研究院生物医药中心烟台荣昌制药股份有限公司同济大学生命科学与技术学院同济大学附属同济医院神经内科; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1544-1548,1553,共6页; 基金国家科技部“重大新药创制”科技重大专项(2014ZX09102-043-003) 国家自然科学基金(81371403,81501102) +1 种基金苏州市科技计划项目(ZXY2012029); 文摘目的用抗人间质上皮转化因子(c-Met)阻断型嵌合抗体ch3E1D7表达质粒构建单价抗体慢病毒穿梭质粒,利用慢病毒表达系统实现其在HEK293T细胞中快速表达,并对纯化后抗体的亲和力及中和活性进行检测。方法设计抗c-Met的单价抗体,命名为mono3E1D7,利用基因工程技术构建单价抗体三条链的慢病毒表达载体,磷酸钙法转染HEK293T细胞,表达的单价抗体经蛋白A琼脂糖4B亲和层析柱纯化,SDS-PAGE检测抗体完整性,ELISA检测单价抗体在体外阻断c-Met与其配体HGF结合的生物学活性。结果感染单价抗体慢病毒的HEK293T细胞上清纯化后,SDS-PAGE分析可见55 ku的重链、25 ku的轻链以及30 ku的杵状结构链(Knob)三条带。且纯化后的单价抗体能与c-Met抗原结合,同时还具有阻断c-Met与HGF结合的中和活性。结论成功获得抗人c-Met阻断型单价抗体。; 关键词 C-MET 嵌合抗体单价抗体慢病毒表达; Keywords c-Met chimeric antibody monovalent antibody lentiviral expression; 分类号 R392.11 [医药卫生—免疫学] Q876 [生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名细胞间质上皮转化因子(c-Met)中和抗体的筛选及鉴定: 2; 作者蒋明于丽华付敏毛玉婷尹衍新; 机构同济大学苏州研究院生物医药研究中心; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期777-782,共6页; 基金国家科技重大专项-重大新药创制(2019ZX09732002-012) 国家科技重大专项-重大新药创制(2019ZX09732002-007-002) +1 种基金国家自然科学基金(82071473) 山东省重点研发计划(2020CXGC011301)。; 文摘目的通过抗体的随机突变库和细胞展示技术,对具有中和活性的细胞间质上皮转化因子(c-Met)抗体进行结构和活性优化,获得亲和力高、激动活性低的抗体,并使其保持亲本抗体的中和及内化活性,提高抗体偶联药物(ADC)的成药性。方法构建和筛选c-Met中和激动型抗体3E1D7的重链互补决定区3(CDR3)随机突变库,获得CDR3区有4个氨基酸突变的候选抗体2G5。通过ELISA检测2G5的中和活性,流式细胞术检测其在A549细胞的内化,CCK-8法检测2G5对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的影响,通过Transwell^(TM)小室检测2G5对A549细胞迁移的影响,通过Western blot法检测2G5对c-Met磷酸化的影响。结果突变抗体2G5与抗原c-Met保持较高的结合能力,半数有效浓度(EC_(50))为41.53 ng/mL,并具有较高的中和活性。在A549细胞中,2G5引起显著的内化效应,但不激活c-Met信号通路和细胞迁移。2G5不能引起HUVEC增殖。结论通过建立抗体随机突变库可优化c-Met抗体的活性,获得成药性更高的突变型抗体。; 关键词细胞间质上皮转化因子(c-Met) 中和抗体流式细胞术; 分类号 R392-33 [医药卫生—免疫学] Q279 [生物学—细胞生物学] R979.19 [医药卫生—药品] S852.43 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名抗人肝细胞生长因子受体单链抗体慢病毒载体的构建和应用被引量：3: 3; 作者陈永华郭佳尹衍新蒋明朱红胜张国栋李冰宇; 机构苏州市立医院东区检验科同济大学苏州研究院生物医药中心; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期960-963,967,共5页; 基金江苏省自然科学基金(BK2012162) 苏州市科技发展计划(SYG201131) 苏州市生物新药创制重点实验室(SZS201002); 文摘目的构建可表达抗人肝细胞生长因子受体(HGFR)单链抗体(scFv)的慢病毒表达载体,将其感染HEK293细胞,检测该抗体的表达及与抗原结合活性。方法采用反转录PCR(RT-PCR)从分泌小鼠抗人HGFR抗体的杂交瘤细胞株(8E8)中扩增VH和VL基因,用重叠延伸PCR法将VH和VL进行拼接,得到含有信号肽SP-VH-linker-VL的单链抗体基因(HGFR-scFv),将其插入克隆载体pCR-Blunt中。用内切酶将HGFR-scFv基因从pCR-Blunt上切下,插入慢病毒载体pRRL-CMV中,经相应酶切和测序鉴定,正确构建慢病毒表达载体pRRL HGFR-scFv。磷酸钙法转染HEK293T细胞,48 h后通过荧光显微镜检测绿色荧光蛋白(GFP)的表达,将获得病毒颗粒进一步感染HEK293细胞,RT-PCR和ELISA检测scFv的表达情况。结果抗人HGFRscFv的慢病毒表达载体构建成功,病毒颗粒感染HEK293细胞后,得到了可以稳定表达抗人HGFR-scFv的细胞系;ELISA结果表明,scFv能与人HGFR特异性结合。结论成功克隆了小鼠抗人HGFR抗体的scFv基因,并构建其慢病毒表达系统。; 关键词肝细胞生长因子受体单链抗体慢病毒表达载体; Keywords hepatocyte growth factor receptor scFv lentiviral vector; 分类号 R392.11 [医药卫生—免疫学] Q876 [生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名间质上皮转化因子(c-Met)嵌合抗体重链CDR3随机突变哺乳动物细胞表面展示文库的构建被引量：1: 4; 作者郭佳蒋韵滕飞尹衍新于丽华付敏蒋明房健民; 机构同济大学苏州研究院生物医药中心上海市同济医院同济大学生命科学与技术学院; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期557-562,共6页; 基金江苏省自然科学基金青年基金(BK20150278) 上海市科学技术委员会科研计划(19431903200); 文摘目的采用哺乳动物细胞表面展示技术构建间质上皮转化因子(c-Met)嵌合抗体3E1D7的重链补体决定区3(CDR3)随机突变抗体库。方法用定向进化的方法在嵌合抗体3E1D7重链CDR3内部造成基因随机突变,将其通过双酶切克隆到哺乳动物细胞展示载体pSZI-CD中构建随机突变抗体库。抗体库基因转染CHO细胞,流式细胞术检测抗体基因是否在细胞表面表达。结果3E1D7重链CDR3随机突变抗体库构建成功,库容量达到5.52×10^6。随机挑选20个阳性克隆进行测序鉴定,20个克隆均在不同位置发生碱基突变且没有重复突变,编码20种不同的氨基酸序列,抗体库具有较好的多样性和随机性。流式细胞术分析抗体基因库上膜情况,均检测到全长抗体在CHO细胞表面的表达。结论通过哺乳动物细胞表面展示技术,成功构建了库容量达到5.52×10^6的c-Met嵌合抗体重链CDR3随机突变抗体库。; 关键词间质上皮转化因子(c-Met) 哺乳动物细胞表面展示流式细胞术; Keywords c-Met mammalian cell surface display flow cytometry; 分类号 R392 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	抗间质上皮转化因子(c-Met)单价抗体的制备及生物学活性检测	郭佳蒋明靳令经尹衍新孙慧于丽华毛玉婷房健民	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2016	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	细胞间质上皮转化因子(c-Met)中和抗体的筛选及鉴定	蒋明于丽华付敏毛玉婷尹衍新	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2024	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	抗人肝细胞生长因子受体单链抗体慢病毒载体的构建和应用	陈永华郭佳尹衍新蒋明朱红胜张国栋李冰宇	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2014	3	在线阅读下载PDF 职称材料
4	间质上皮转化因子(c-Met)嵌合抗体重链CDR3随机突变哺乳动物细胞表面展示文库的构建	郭佳蒋韵滕飞尹衍新于丽华付敏蒋明房健民	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2019	1	在线阅读下载PDF 职称材料