本文通过不同手段探讨了STCH(stress and chaperone)对多巴胺能神经元的作用。采用RT-PCR检测STCH的组织表达模式;采用免疫-激光捕获显微切割技术获得单一多巴胺能神经元,采用RT-PCR检测STCH在中脑不同亚区多巴胺能神经元的表达差异;分...本文通过不同手段探讨了STCH(stress and chaperone)对多巴胺能神经元的作用。采用RT-PCR检测STCH的组织表达模式;采用免疫-激光捕获显微切割技术获得单一多巴胺能神经元,采用RT-PCR检测STCH在中脑不同亚区多巴胺能神经元的表达差异;分别构建STCH过表达pEGFP-N2载体和pSuper-EGFP干扰载体,转染HEK293和SH-SY5Y细胞株,检测细胞对MPP+毒性的反应。结果显示:STCH在海马表达最低,肝脏最高;在中央灰质区的多巴胺能神经元可检测到表达,在黑质区检测不到;将STCH干扰片段转染至HEK293细胞,细胞死亡明显;转染至SH-SY5Y细胞,对细胞生长无明显影响,但细胞形态发生改变;与对照组相比过表达STCH的SH-SY5Y细胞对MPP+毒性有抵抗作用,并能抑制MPP+处理细胞中caspase-12的表达。这些结果提示:STCH对多巴胺能神经元具有潜在的保护作用,其机制可能是通过抑制内质网应激诱导的凋亡途径而实现。该结果为寻找Parkinson病的治疗靶向提供了有益的线索。展开更多
文摘本文通过不同手段探讨了STCH(stress and chaperone)对多巴胺能神经元的作用。采用RT-PCR检测STCH的组织表达模式;采用免疫-激光捕获显微切割技术获得单一多巴胺能神经元,采用RT-PCR检测STCH在中脑不同亚区多巴胺能神经元的表达差异;分别构建STCH过表达pEGFP-N2载体和pSuper-EGFP干扰载体,转染HEK293和SH-SY5Y细胞株,检测细胞对MPP+毒性的反应。结果显示:STCH在海马表达最低,肝脏最高;在中央灰质区的多巴胺能神经元可检测到表达,在黑质区检测不到;将STCH干扰片段转染至HEK293细胞,细胞死亡明显;转染至SH-SY5Y细胞,对细胞生长无明显影响,但细胞形态发生改变;与对照组相比过表达STCH的SH-SY5Y细胞对MPP+毒性有抵抗作用,并能抑制MPP+处理细胞中caspase-12的表达。这些结果提示:STCH对多巴胺能神经元具有潜在的保护作用,其机制可能是通过抑制内质网应激诱导的凋亡途径而实现。该结果为寻找Parkinson病的治疗靶向提供了有益的线索。
