湖北汉族人群对乙肝疫苗免疫应答的水平与HLA-I类分子多态性的相关研究 被引量：27

1

作者 涂正坤 吴雄文 +5 位作者 刘敏 姜晓丹 杨志章 吴锋 龚非力 赵修竹 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期20-22,共3页

目的：探讨人群对乙肝疫苗免疫应答与ＨＬＡ遗传多态性的相关性。方法：对５２名湖北汉族健康自愿者进行ＨＢＶ血源疫苗标准全程接种，共３次（第０、１、６月），末次接种后８ｗ用酶免疫法（ＥＩＡ）检测血清抗ＨＢｓ抗体水平：Ｓ／Ｎ... 目的：探讨人群对乙肝疫苗免疫应答与ＨＬＡ遗传多态性的相关性。方法：对５２名湖北汉族健康自愿者进行ＨＢＶ血源疫苗标准全程接种，共３次（第０、１、６月），末次接种后８ｗ用酶免疫法（ＥＩＡ）检测血清抗ＨＢｓ抗体水平：Ｓ／Ｎ≥２１为应答者；Ｓ／Ｎ＜２１为无应答者。同时对受试者进行ＨＬＡＩ类抗原多态性检测。结果：应答者４２人（８１０％），无应答者１０人（１９０％）；无应答者与ＨＬＡＢ３９具有显著相关性，ＲＲ＝１７５，χ２＝５２２，Ｐ＜００５，而与ＨＬＡＢ６２呈负相关，χ２＝６４１，Ｐ＜００５。结论：在湖北汉族人群中，ＨＬＡＢ３９表型阳性个体对乙肝疫苗免疫应答水平明显低于其他个体，而ＨＬＡＢ６２表型阳性个体明显高于其他个体。 展开更多

关键词 乙型肝炎 疫苗 免疫应答 HLA-I 遗传多态性

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跨膜型TNF-α生物学活性的膜依赖性

2

作者 曾劲杨 李卓娅 +1 位作者 龚非力 姜晓丹 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1998年第2期97-100,共4页

跨膜型TNF-α(TM-TNF-α)是激活的单核/巨噬细胞表达在胞膜上的完整蛋白分子。为了确定TM-TNF与细胞膜的关系,本文借助体外转录翻译系统及微粒体膜结构,建立了表达在微粒体膜上的TM-TNF以及无膜的裸26kD TNF。比较这两种体外表达产物对... 跨膜型TNF-α(TM-TNF-α)是激活的单核/巨噬细胞表达在胞膜上的完整蛋白分子。为了确定TM-TNF与细胞膜的关系,本文借助体外转录翻译系统及微粒体膜结构,建立了表达在微粒体膜上的TM-TNF以及无膜的裸26kD TNF。比较这两种体外表达产物对靶细胞的细胞毒效应,结果表明,只有在微粒体存在时所合成的26kD TNF具有细胞毒活性;而无微粒体存在所合成的裸26kD TNF不显示杀瘤效应。进一步用间接免疫荧光技术观察它们与HL60靶细胞胞膜上TNFR的结合情况,结果显示,结合在微粒体膜上的TM-TNF能与TNFR有效结合,而裸26kD TNF与TNFR则不能有效结合。提示TM-TNF只有“锚定”在细胞膜上,才能利于其空间构型的展示,发挥生物学效应;而一旦与膜分离,则不能与TNFR有效地结合,故丧失了其生物学活性。 展开更多

关键词 跨膜型 TNF-Α 细胞毒活性 微粒体膜

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PKA对跨膜型和分泌型TNF-α胞毒效应的影响 被引量：9

3

作者 石文芳 李卓娅 +4 位作者 龚非力 姜小丹 徐勇 熊平 冯玮 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期190-192,共3页

目的 :研究PKA对跨膜型TNF α(mTNF α)和分泌型TNF α(TNF α)杀瘤效应的影响。方法 :用TNF生物活性检测方法在体外观察PKA激活剂和抑制剂对二型TNF α杀伤不同肿瘤细胞的影响。结果 :PKA激活剂Forskolin(10 μmol L)和抑制剂H8(15 μm... 目的 :研究PKA对跨膜型TNF α(mTNF α)和分泌型TNF α(TNF α)杀瘤效应的影响。方法 :用TNF生物活性检测方法在体外观察PKA激活剂和抑制剂对二型TNF α杀伤不同肿瘤细胞的影响。结果 :PKA激活剂Forskolin(10 μmol L)和抑制剂H8(15 μmol L)可分别增强和抑制sTNF α对其敏感靶细胞的胞毒活性 ,对其余 4株耐受靶细胞却无逆转作用 ,而且对mTNF α的胞毒效应无任何影响。此外 ,PKA活性增强 ,可使sTNF α介导靶细胞的死亡方式发生改变 ,即坏死比例减少 ,凋亡比例增加。结论 :PKA仅参与sTNF α胞毒作用的信号传导 ,与mTNF α无关 ;且与sTNF 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子Α mTNFα STNFα PKA 细胞凋亡

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跨膜型和分泌型TNF-α对TNF受体作用的比较 被引量：13

4

作者 石文芳 李卓娅 龚非力 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期243-246,共4页

用可溶性ＴＮＦＲ预先与ｍＴＮＦα或ｓＴＮＦα温育可明显抑制两型ＴＮＦ随后的胞毒效应；用ｓＴＮＦ封闭靶细胞的ＴＮＦＲ可抑制随后ｓＴＮＦ对之的胞毒效应，却不能影响ｍＴＮＦ的作用。提示ｍＴＮＦ与ｓＴＮＦ一样是依赖ＴＮＦ... 用可溶性ＴＮＦＲ预先与ｍＴＮＦα或ｓＴＮＦα温育可明显抑制两型ＴＮＦ随后的胞毒效应；用ｓＴＮＦ封闭靶细胞的ＴＮＦＲ可抑制随后ｓＴＮＦ对之的胞毒效应，却不能影响ｍＴＮＦ的作用。提示ｍＴＮＦ与ｓＴＮＦ一样是依赖ＴＮＦＲ发挥作用的，但二者与ＴＮＦＲ结合位点不同。比较两型ＴＮＦ对表达不同类型ＴＮＦＲ靶细胞的胞毒效应，对ｓＴＮＦ敏感的靶细胞主要表达ＴＮＦＲＩ，而ｍＴＮＦ则对表达Ⅰ型和／或Ⅱ型ＴＮＦＲ的靶细胞均有杀伤作用。抗ＴＮＦＲ抗体与ｍＴＮＦ相似，可杀伤对ｓＴＮＦ耐受肿瘤细胞系；将其预先与靶细胞作用并不能封闭ｍＴＮＦ的杀瘤效应，提示二者与ＴＮＦＲ结合位点不同。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子 TNF受体 跨膜型 分泌型

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NF-κB结合位点在LPS诱导人TNF-α基因转录中的调节作用 被引量：5

5

作者 史须 卜夏 +4 位作者 黄家强 熊平 徐勇 李卓娅 龚非力 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期651-655,共5页

为探讨人TNF α基因启动子区域NF κB结合位点对LPS诱导性基因表达的调节作用 ,将构建的含人TNF α基因启动子区域及其不同缺失片段的pGL2萤光素酶报道基因重组体 ,体外转染HL 60细胞 ,观察LPS刺激对TNF基因启动子指导萤光素酶表达的影... 为探讨人TNF α基因启动子区域NF κB结合位点对LPS诱导性基因表达的调节作用 ,将构建的含人TNF α基因启动子区域及其不同缺失片段的pGL2萤光素酶报道基因重组体 ,体外转染HL 60细胞 ,观察LPS刺激对TNF基因启动子指导萤光素酶表达的影响 .发现TNF α基因启动子区域的 3个NF κB结合位点的存在是该基因最大组成性表达和LPS诱导性表达所必需 ;将这 3个位点缺失可完全阻断报道基因的LPS诱导性表达 ,并使其组成性表达明显受到抑制 (P <0 .0 0 1) .缺失κB1和κB2位点 ,使基因组成性表达与LPS诱导性表达均减少约 50 % (P <0 .0 1) ,但诱导倍数则与非突变体相近 ;反之 ,用κB3反义寡核苷酸封闭κB3位点 ,保留κB1和κB2功能 ,使LPS诱导性基因表达抑制 70 % (P <0 .0 0 1) ,诱导倍数明显降低 .保留原有κB3位点 ,再将κB3位点取代κB1和κB2位点 ,可使基因组成性和诱导性表达几乎完全恢复 ;将κB3位点向TSS移近 (- 98→ - 52 ) ,取代Sp1位点 ,虽然κB1和κB2位点仍然缺失 ,但仅一个κB3位点即可使基因组成性和LPS诱导性表达恢复到 80 % .用反义寡核苷酸封闭这个κB3位点 ,不但可使TNF α启动子完全丧失对LPS的反应性 ,还可完全阻断所控基因的组成性表达 .结果表明 ,人TNF α启动子区域 3个NF κB位点均参与该? 展开更多

关键词 核因子ΚB 肿瘤坏死因子α 萤光素酶报道基因 内毒素 结合位点 转录 基因调控

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人 TNF-α 分泌型、膜型和膜稳定型重组体的构建、表达及杀瘤效应研究 被引量：4

6

作者 黄家强 卜夏 +3 位作者 史须 严宜明 李卓娅 龚非力 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1998年第12期15-20,共6页

通过用ＩＬ－２信号肽编码序列置换ＴＮＦ前导肽编码序列，构建出一种在真核细胞中仅产生分泌型ＴＮＦ的重组体；通过缺失二型ＴＮＦ转换的酶解部位而构建出跨膜表达的膜稳定型ＴＮＦ重组体，并建立分别只表达分泌型或膜型及可同时表达... 通过用ＩＬ－２信号肽编码序列置换ＴＮＦ前导肽编码序列，构建出一种在真核细胞中仅产生分泌型ＴＮＦ的重组体；通过缺失二型ＴＮＦ转换的酶解部位而构建出跨膜表达的膜稳定型ＴＮＦ重组体，并建立分别只表达分泌型或膜型及可同时表达两型ＴＮＦ的真核细胞株，比较二型ＴＮＦ的杀瘤效应。结果显示，膜型ＴＮＦ主要经效－靶细胞间直接接触发挥胞毒效应，杀瘤谱比分泌型ＴＮＦ广；ＴＮＦ的分泌型和膜型具有协同效应。通过基因直接注射方式，使膜型及膜稳定型ＴＮＦ重组体稳定表达小于鼠体内，为膜型ＴＮＦ转基因应用奠定了基础。 展开更多

关键词 分泌型 TNF-Α 膜型 基因突变 杀瘤效应 转基因

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秋水仙碱对巨噬细胞分泌TNF－α的影响 被引量：10

7

作者 李卓娅 冯新为 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第2期70-74,共5页

微管聚合抑制剂秋水仙碱（Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ，Ｃｏｌ．）能剂量依赖性地抑制ＬＰＳ刺激的大鼠巨噬细胞（Ｍψ）分泌ＴＮＦ－α。Ｃｏ１的衍生物β－ｌｕｍｉｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ对微管无影响，对ＴＮＦ－α的分泌亦无影响；其他微... 微管聚合抑制剂秋水仙碱（Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ，Ｃｏｌ．）能剂量依赖性地抑制ＬＰＳ刺激的大鼠巨噬细胞（Ｍψ）分泌ＴＮＦ－α。Ｃｏ１的衍生物β－ｌｕｍｉｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ对微管无影响，对ＴＮＦ－α的分泌亦无影响；其他微管抑制剂如长春新碱等亦能抑制Ｍψ分泌ＴＮＦ－α。间接免疫荧光染色和原位杂交法显示，ＬＰＳ能促进微管聚合，并使ＴＮＦ－αｍＲＮＡ及蛋白质表达明显增加；当ＬＰＳ与Ｃｏｌ．联用时，微管解聚，ＴＮＦ－αｍＲＮＡ表达及其蛋白质合成减少，ＴＮＦ－α失去原有的胞浆定位，弥散分布于胞浆。说明ＴＮＦ－α的合成需要完好的微管结构与功能，并提示在生理或病理条件下微管功能的变化可能直接或间接参与对ＴＮＦ－α生物合成的调节。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子 α 微管 秋水仙碱 巨噬细胞

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一种快速简便的缺失突变方法 被引量：4

8

作者 曾劲杨 黄家强 +1 位作者 李卓娅 龚非力 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1998年第4期289-291,共3页

为了构建能表达稳定的、不易降解的ＴＭ－ＴＮＦ突变体（ＴＭ－ＴＮＦｍ）的基因，本文用改良的Ｓ－ＰＣＲ和ＯＥ－ＰＣＲ两种定位突变技术，成功地构建了缺失３６个碱基的ｐＢＳＫ－ＴＭ－ＴＮＦ突变重组体。与ＯＥ－ＰＣＲ技术（用两... 为了构建能表达稳定的、不易降解的ＴＭ－ＴＮＦ突变体（ＴＭ－ＴＮＦｍ）的基因，本文用改良的Ｓ－ＰＣＲ和ＯＥ－ＰＣＲ两种定位突变技术，成功地构建了缺失３６个碱基的ｐＢＳＫ－ＴＭ－ＴＮＦ突变重组体。与ＯＥ－ＰＣＲ技术（用两对引物进行两次ＰＣＲ反应）相比较，Ｓ－ＰＣＲ技术（用一对引物做一次ＰＣＲ反应）具有快速、经济、简便等优点，但其突变率较ＯＥ－ＰＣＲ低。 展开更多

关键词 TM-TNF-Α 一次重组 缺失突变法 聚合酶链反应

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中国湖北汉族重症肌无力与HLA-Ⅱ类等位基因的关联 被引量：2

9

作者 龚非力 杨志章 +7 位作者 熊平 徐金枝 徐勇 姜晓丹 吴雄文 S.FERENCIK YANJUN LIU H.GROSSE WILDE 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第7期580-584,共5页

目的和方法：探讨中国湖北汉族重症肌无力（ＭＧ）患者与ＨＬＡ－Ⅱ类等位基因的关联。利用ＰＣＲ／ＳＳＰ和ＰＣＲ－ＲＦＬＰ技术对湖北地区９１例ＭＧ患者进行ＨＬＡ－Ⅱ类（ＨＬＡ－ＤＲＢ１、ＤＱＢ１和ＤＰＢ１）基因型别分析，并... 目的和方法：探讨中国湖北汉族重症肌无力（ＭＧ）患者与ＨＬＡ－Ⅱ类等位基因的关联。利用ＰＣＲ／ＳＳＰ和ＰＣＲ－ＲＦＬＰ技术对湖北地区９１例ＭＧ患者进行ＨＬＡ－Ⅱ类（ＨＬＡ－ＤＲＢ１、ＤＱＢ１和ＤＰＢ１）基因型别分析，并与１６８例正常个体比较。结果：患者组（１）：ＨＬＡ－ＤＲＢ１０９０１、ＤＱＢ１０３０３和ＤＰＢ１０５０１等位基因频率明显高于对照组，ＲＲ值分别为４１２、３０４和３０１，Ｐ＜０．０１；（２）ＨＬＡ－ＤＰＢ１０２０２等位基因频率明显低于对照组，ＲＲ值为０１３，Ｐ＜０．０５。结论：中国湖北汉族群体中ＭＧ与ＨＬＡ－ＤＲＢ１０２０２、等位基因正关联，而与ＨＬＡ－ＤＰＢ１０２０２等位基因呈负关联，与白种人群相比，这种关联对中国湖北汉族ＭＧ病人来说是特有的。 展开更多

关键词 重症肌无力 HLA抗原 基因表达 AchR抗体

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湖北汉人全身性红斑狼疮患者补体第4成分基因限制性片段长度多态性的研究 被引量：2

10

作者 杨颖 吴雄文 +8 位作者 姜晓丹 杨志章 魏承宏 刘敏 吴锋 龚非力 赵修竹 何培根 张胜桃 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期112-115,共4页

用Ｃ４５末端探针和限制性内切酶ＴａｑⅠ对７５例湖北汉人ＳＬＥ患者和５８例正常人进行了ＲＦＬＰ检测，同时用琼脂糖凝胶电泳免疫固定方法测定了其中５１例患者和５７例正常对照的Ｃ４蛋白质表达情况，结果发现，患者中２４例（３... 用Ｃ４５末端探针和限制性内切酶ＴａｑⅠ对７５例湖北汉人ＳＬＥ患者和５８例正常人进行了ＲＦＬＰ检测，同时用琼脂糖凝胶电泳免疫固定方法测定了其中５１例患者和５７例正常对照的Ｃ４蛋白质表达情况，结果发现，患者中２４例（３２．０％）的ＲＦＬＰ带型为７．０－５．４ｋｂ（Ａ型），１０例（１３．３％）为７．０－６．０ｋｂ（Ｂ型），４０例（５３．３％）患者ＲＦＬＰ带型为７．０－６．０－５．４ｋｂ（Ｃ型），仅一例（１．３％）带型为７．０－６．４－５．４ｋｂ（Ｄ型），即带有表示Ｃ４Ａ基因缺失的６．４ｋｂ片段。正常对照组中ＲＦＬＰ带型仅检出Ａ、Ｂ、Ｃ三型，与患者组在分布上无统计学差异。Ｃ４表型分析结果发现，患者中Ｃ４ＡＱ０者为２２例（４３％），正常对照中Ｃ４ＡＱ０者为１０例（１７．５％），计算ＲＲ值＝３．５６，χ２＝８．４６，Ｐ＜０．０１。上述结果表明，Ｃ４Ａ蛋白质缺失与ＳＬＥ易感性密切相关，但在湖北人群中Ｃ４Ａ蛋白质缺失的主要原因可能不是由于Ｃ４Ａ基因的缺失所致。 展开更多

关键词 系统性红斑狼疮 补体4 RFLP 遗传学 免疫学

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膜稳定型TNF突变体的构建、表达及活性研究 被引量：2

11

作者 黄家强 卜夏 +1 位作者 李卓娅 龚非力 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期178-180,197,共4页

目的 :TNF α可以分泌型 (S TNF)及其前体膜型 (M TNF)两种活性形式同时存在于体内。为膜型TNF的转基因应用 ,构建一种可表达于胞膜而不被酶解的膜稳定型TNF重组体 (mTNFm)。方法 :在克隆M TNFcDNA的基础上 ,删除两型TNF转换酶酶解部位... 目的 :TNF α可以分泌型 (S TNF)及其前体膜型 (M TNF)两种活性形式同时存在于体内。为膜型TNF的转基因应用 ,构建一种可表达于胞膜而不被酶解的膜稳定型TNF重组体 (mTNFm)。方法 :在克隆M TNFcDNA的基础上 ,删除两型TNF转换酶酶解部位的编码序列 ,构建出mTNFm并测序验证 ;建立只表达膜型TNF的真核细胞株。结果 :Westernblot分析及活性测定结果表明 ,mTNFm不再发生酶切转换且只通过效 靶细胞间直接接触发挥胞毒效应。通过基因直接注射方式 ,使mTNFm稳定表达于小鼠体内。结论 展开更多

关键词 膜型TNF-α 基因突变 真核表达 基因治疗

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重症肌无力患者HLA－DRB_1等位基因分析 被引量：2

12

作者 高波廷 杨明山 +1 位作者 龚非力 姜晓丹 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第1期18-21,共4页

作者应用ＰＣＲ－ＳＳＰ方法，对３４例重症肌无力（ＭＧ）患者和８６名健康汉人ＨＬＡ－ＤＲＢ１等位基因进行分析、研究，结果发现，ＭＧ病人组ＭＲＢ１区域内０９０１、１３０１两对等位基因的频率明显高于对照组（ＲＲ分别为１６．... 作者应用ＰＣＲ－ＳＳＰ方法，对３４例重症肌无力（ＭＧ）患者和８６名健康汉人ＨＬＡ－ＤＲＢ１等位基因进行分析、研究，结果发现，ＭＧ病人组ＭＲＢ１区域内０９０１、１３０１两对等位基因的频率明显高于对照组（ＲＲ分别为１６．９４４和５．５１２，Ｐ均＜０．０１）。其中８例伴有胸腺瘤的ＭＧ患者除０９０１、１３０１两对等位基因频率增高外，０４０１基因频率亦明显高于正常对照组（ＲＲ分别为３９．５０３、４．９８０和４．０００．Ｐ均＜０．０１）。作者认为，ＭＧ发病可能与ＨＬＡ－ＤＲＢ１区域内０９０１、１３０１和０４０１三对等住基因相关联。 展开更多

关键词 重症肌无力 等位基因 病理

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肝素、三氟啦嗪对去甲肾上腺素调控大鼠腹腔巨噬细胞Ia抗原表达 被引量：2

13

作者 黄家强 龚非力 +1 位作者 熊平 冯新为 《中国免疫学杂志》 CSCD 北大核心 1994年第1期35-38,共4页

用细胞膜放射性标记和离子交换层析法、Ｃａ￣（２＋）指示剂的分光光谱法和ＡＰＡＡＰ桥联酶标法分别检测Ｍ内ＩＰ＿３、〔Ｃａ￣（２＋）〕ｉ和膜上Ｉａ抗原的表达，研究ＩＰ＿３受体阻断剂肝素（Ｈ）和钙调蛋白（ＣａＲＰ）抑制剂三... 用细胞膜放射性标记和离子交换层析法、Ｃａ￣（２＋）指示剂的分光光谱法和ＡＰＡＡＰ桥联酶标法分别检测Ｍ内ＩＰ＿３、〔Ｃａ￣（２＋）〕ｉ和膜上Ｉａ抗原的表达，研究ＩＰ＿３受体阻断剂肝素（Ｈ）和钙调蛋白（ＣａＲＰ）抑制剂三氟啦嗪（ＴＦＰ）对ＮＥ调控ＭＩａ抗原表达的影响。结果显示：Ｈ（４０μｇ／ｍｌ）不影响ＮＥ（１０￣（－８）ｍｏｌ／Ｌ）增高Ｍ内ＩＰ＿３的作用（４５２±３０ｃ．ｐ．ｍ．／１０￣６ｃｅｌｌｓ，ＮＥ组：４４２±２２ｃ．ｐ．ｍ．／１０￣６ｃｅｌｌｓ，Ｐ＞０．０５）；但能阻断ＮＥ增高Ｍ〔Ｃａ￣（２＋）〕ｉ的作用（１１４±４３ｎｍｏｌ／Ｌ，ＮＥ组：３２２±７６ｎｍｏｌ／Ｌ，Ｐ＜０．０１）；还能阻断ＮＥ促进ＭＩ－Ａ、Ｉ－Ｅ表达的效应（４６％±４％、４５％±７％，ＮＥ组：６４％±８％、５８％±６％，Ｐ＜０．０１）。ＴＦＰ（５０μｍｏｌ／Ｌ）不影响ＮＥ升高Ｍ〔Ｃａ￣（２＋）〕的作用（３２８±８９ｎｍｏｌ／Ｌ，ＮＥ组：３２２±７６ｎｍｏｌ／Ｌ，Ｐ＞０．０５），却能阻断ＮＥ促进ＭＩ－Ａ、Ｉ－Ｅ表达的效应（４５％±４％、４４％±５％，ＮＥ组：６４％±８％、５８％±６％，Ｐ＜０．０１）。结果提示：ＮＥ调控ＭＩａ抗原表达的效? 展开更多

关键词 巨噬细胞 去甲肾上腺素 抗原 肝素

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建立预测同种异体间组织相容性细胞模型 被引量：1

14

作者 郝友华 吴雄文 +4 位作者 梁智辉 熊平 姜晓丹 徐勇 龚非力 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期316-319,共4页

目的 :建立了预测受、供者间组织相容性信息的体外实验模型 ,探讨了借助此模型预测的组织相容性与BMT术后GVHR发生时间的相关性及其与小鼠移植皮肤存活时间的相关性。方法 :借助所建立的实验模型和细胞模型预测供、受者间组织相容性差... 目的 :建立了预测受、供者间组织相容性信息的体外实验模型 ,探讨了借助此模型预测的组织相容性与BMT术后GVHR发生时间的相关性及其与小鼠移植皮肤存活时间的相关性。方法 :借助所建立的实验模型和细胞模型预测供、受者间组织相容性差异。结果 :①显示其与BMT术后GVHR发生时间呈一定相关性 ,即实验模型检测的受、供者间杀伤活性比值愈大 ,GVHR发生时间愈晚 ;②显示其与同种异体小鼠皮肤移植物存活时间呈正相关 ,即实验模型检测的供、受者间杀伤活性比值愈大 ,小鼠皮肤移植物存活时间愈长。结论 :该模型对选择组织兼容性的移植物供者和判断移植术的预后 ,提供了实验依据和研究线索。 展开更多

关键词 组织相容性 同种异体移植 组织相容性模型 组织抗原 体外模型

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抗CD3-抗B细胞白血病独特型双特异性抗体的制备及细胞毒性 被引量：1

15

作者 朱慧芬 王晓林 +2 位作者 张悦 沈关心 熊伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1998年第1期40-42,共3页

采用化学偶联法制备抗ＣＤ３抗Ｂ细胞性白血病独特型双特异性抗体，研究了该双特异性抗体诱导ＬＡＫ细胞的增殖及其细胞毒作用。结果提示，双特异性抗体可显著提高ＬＡＫ细胞与Ｄａｕｄｉ细胞的结合率；促进淋巴细胞的增殖。乳酸脱氢... 采用化学偶联法制备抗ＣＤ３抗Ｂ细胞性白血病独特型双特异性抗体，研究了该双特异性抗体诱导ＬＡＫ细胞的增殖及其细胞毒作用。结果提示，双特异性抗体可显著提高ＬＡＫ细胞与Ｄａｕｄｉ细胞的结合率；促进淋巴细胞的增殖。乳酸脱氢酶试验检测发现，加入双特异性抗体后，ＬＡＫ细胞对Ｄａｕｄｉ细胞的细胞毒性作用显著高于对照组。 展开更多

关键词 BsAB 双特异性抗体 制备 细胞毒性

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跨膜突变型TNF-α的基因构建及体外表达 被引量：1

16

作者 曾劲杨 李卓娅 +2 位作者 龚非力 徐勇 熊平 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期254-256,共3页

目的：跨膜型ＴＮＦα（ＴＭＴＮＦα）易在某些蛋白酶的作用下转换为分泌型ＴＮＦα（ＳＴＮＦα）。拟用基因突变技术获得稳定表达的、不能转换成ＳＴＮＦ的ＴＭＴＮＦ突变体（ＴＭＴＮＦｍ）。方法：应用ＲＴＰ... 目的：跨膜型ＴＮＦα（ＴＭＴＮＦα）易在某些蛋白酶的作用下转换为分泌型ＴＮＦα（ＳＴＮＦα）。拟用基因突变技术获得稳定表达的、不能转换成ＳＴＮＦ的ＴＭＴＮＦ突变体（ＴＭＴＮＦｍ）。方法：应用ＲＴＰＣＲ技术，从人外周血单核细胞中扩增出编码ＴＭＴＮＦα的全长ｃＤＮＡ序列并构建ｐＢＳＫＴＮＦα重组体。以此为模板，借助改进的“一次重组ＰＣＲ”定位突变技术，造成ＴＭＴＮＦ转换为ＳＴＮＦ酶切位点的缺失，获得ＴＭＴＮＦ突变重组体（ＴＭＴＮＦｍ）。结果：将ＴＭＴＮＦｍｃＤＮＡ片段克隆至表达载体ｐＧＥＭ３Ｚｆ，利用体外转录翻译系统表达出具有生物学活性的跨膜突变型ＴＮＦα蛋白。经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析证实，用胶原酶不能将ＴＭＴＮＦ突变体酶解成为ＳＴＮＦ。结论：提示所构建的ＴＭＴＮＦｍ去除了可转换为ＳＴＮＦ的酶解氨基酸序列，为进一步研究跨膜型ＴＮＦ杀瘤作用奠定了基础。 展开更多

关键词 跨膜型TNF-Α 免疫 TM-TNFm-α 体外转录翻译

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单纯分泌型TNF-α真核表达质粒的构建及表达细胞株的建立 被引量：1

17

作者 黄家强 卜夏 +2 位作者 史须 李卓娅 龚非力 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第1期6-9,共4页

目的揭示膜结合的TNF α前体(mTNF α)与分泌型TNF α(sTNF α)生物学活性的不同。方法在克隆出mTNF α基因的基础上,我们采用IL 2信号肽编码序列置换m TNF α前导肽编码序列,构建出只产生分泌型TNF α的真核表达质粒pBK sTNFm,并转染至... 目的揭示膜结合的TNF α前体(mTNF α)与分泌型TNF α(sTNF α)生物学活性的不同。方法在克隆出mTNF α基因的基础上,我们采用IL 2信号肽编码序列置换m TNF α前导肽编码序列,构建出只产生分泌型TNF α的真核表达质粒pBK sTNFm,并转染至NIH3T3细胞中。结果筛选出的阳性克隆细胞经Westernblot分析及活性测定显示,pBK sTNFm转染细胞裂解液及培养上清 ,均可检出相对分子质量 (Mr)17000的TNF α,且上清具有sTNF α活性,但细胞固定后其活性丧失。结论成功地构建了在真核细胞中只产生sTNF α的表达质粒,并建立相应的表达细胞株。为比较两种类型的TNF α的生物学活性及其作用机制奠定了基础。 展开更多

关键词 真核表达 质粒构建 细胞株 分泌型TNF-Α

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C5a受体(C5aR,CD88) 被引量：4

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作者 赵修竹 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1997年第3期60-64,共5页

Ｃ５ａ是一个重要的炎症介质，但其作用的机制是在对其受体Ｃ５ａＲ（ＣＤ８８）近年来有了较明确的认识后才得以阐明的。本文就Ｃ５ａＲ的结构、作用的分子机理、作用后的信号转导机制、Ｃ５ａＲ的脱敏与内移，以及Ｃ５ａＲ的基因结构... Ｃ５ａ是一个重要的炎症介质，但其作用的机制是在对其受体Ｃ５ａＲ（ＣＤ８８）近年来有了较明确的认识后才得以阐明的。本文就Ｃ５ａＲ的结构、作用的分子机理、作用后的信号转导机制、Ｃ５ａＲ的脱敏与内移，以及Ｃ５ａＲ的基因结构及其表达调控等的一些新进展加以介绍。 展开更多

关键词 C5A GPCR 信号转导 C5A受体

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PHA、抗CD_3单克隆抗体、LI-2诱导牌细胞培养上清液抗肿瘤效应的研究

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作者 王晓林 沈关心 +3 位作者 朱慧芬 张悦 邵静芳 黄乐平 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 1994年第S2期103-105,共3页

本文探讨了PHA、CD_3单克隆抗体、IL-2体外诱导正常人脾细胞培养上清液抗肿瘤效应及其对LAK细胞抗肿瘤效应的增强作用。结果显示，IL-2诱导脾细胞的培养上清液在体外不仅具有直接杀伤肿瘤细胞效应，并且能增强LAK细胞的抗肿瘤作用。PHA... 本文探讨了PHA、CD_3单克隆抗体、IL-2体外诱导正常人脾细胞培养上清液抗肿瘤效应及其对LAK细胞抗肿瘤效应的增强作用。结果显示，IL-2诱导脾细胞的培养上清液在体外不仅具有直接杀伤肿瘤细胞效应，并且能增强LAK细胞的抗肿瘤作用。PHA、抗CD_3单克隆抗体和IL-2联合刺激可增强脾细胞培养上清液杀伤肿瘤细胞效应。 展开更多

关键词 抗CD₃ 单克隆抗体 LAK细胞培养上清液 肿瘤

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抗B-CLL-IgM Id×抗CD3双功能抗体对LAK细胞杀伤活性的影响

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作者 杨敬 王晓林 +2 位作者 沈关心 苏娜 张智红 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1998年第4期291-291,306,共2页

抗肿瘤双特异性抗体(bispecific antibody,BsAb)由于具有同时与效应细胞及靶瘤细胞两种不同抗原特异性结合的双重特异性,从而提高了效应细胞对靶瘤细胞的特异性杀伤活性,因此,其在肿瘤靶向生物治疗中的应用日益受到重视.本研究通过体外... 抗肿瘤双特异性抗体(bispecific antibody,BsAb)由于具有同时与效应细胞及靶瘤细胞两种不同抗原特异性结合的双重特异性,从而提高了效应细胞对靶瘤细胞的特异性杀伤活性,因此,其在肿瘤靶向生物治疗中的应用日益受到重视.本研究通过体外实验,观察了抗人慢性B淋巴细胞白血病LgM独特型×抗CD3双特异性抗体(抗B-CLL-LgM Id×抗CD3 BsAb)对LAK细胞杀伤靶瘤细胞活性的影响,现报道如下. 展开更多

关键词 LAK细胞 抗肿瘤 双特异性抗体

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