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基于双重PCR技术的鹿茸及其伪品DNA指纹特征和鉴定
被引量：
12
1
作者
高丽君
何程远
+7 位作者
李盈诺
巴宏宇
李梓僮
夏薇
李明成
苑广信
张丽华
艾金霞
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第4期839-844,共6页
目的:分析鹿茸线粒体细胞色素b(Cytb)和细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因特异性,建立双重PCR技术鉴别鹿茸真伪的分子指纹特征。方法:利用碱变性法提取梅花鹿茸、马鹿茸、驯鹿茸和新西兰鹿茸的基因组DNA,应用引物设计软件Premier 5.0针对...
目的:分析鹿茸线粒体细胞色素b(Cytb)和细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因特异性,建立双重PCR技术鉴别鹿茸真伪的分子指纹特征。方法:利用碱变性法提取梅花鹿茸、马鹿茸、驯鹿茸和新西兰鹿茸的基因组DNA,应用引物设计软件Premier 5.0针对Cytb和COⅠ分别设计特异性引物(分别为Cytb 1、2和COⅠ1、2、3),采用单一及双重引物分别进行PCR扩增,筛选特异性强的引物,确定最佳PCR反应条件。结果:采用碱变性法提取的鹿茸基因组DNA片段长度为23 000bp,DNA纯度即A(260)/A(280)为1.80±0.02;应用单一引物进行PCR扩增无法鉴定鹿茸的真伪,而引物Cytb 1和COⅠ1组合后,解链温度为58℃时,梅花鹿茸(吉林、安徽)、马鹿茸均能扩增出395和525bp大小的2个片段,而驯鹿茸和新西兰鹿茸均未能扩增出相应片段;采用该提取方法及最优化的PCR反应条件,对市售样品进行检测,检测结果与实际情况完全一致。结论:双重PCR技术可从分子水平鉴别鹿茸的真伪,该方法特异性高、实用性强,且简便快捷,在鹿茸真伪鉴别方面具有较高的应用价值。
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关键词
鹿茸
细胞色素B
细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ
双重聚合酶链反应
DNA指纹
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职称材料
牛肉PCR-核酸试纸条快速鉴定方法的建立及试剂盒的研制
被引量：
15
2
作者
姜海瀛
张志杰
+5 位作者
王艳双
张莉
高丽君
李明成
孙丽媛
张丽华
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第18期275-281,共7页
该研究建立肉类食品中牛肉PCR-核酸试纸条快速鉴定方法,并开发快速检测试剂盒。对国家标准中牛的特异性引物进行标记,研发牛肉DNA快速提取试剂和基因检测试剂,采用核酸试纸条进行可视化检测;应用分子克隆及测序技术,克隆牛肉标准品;并...
该研究建立肉类食品中牛肉PCR-核酸试纸条快速鉴定方法,并开发快速检测试剂盒。对国家标准中牛的特异性引物进行标记,研发牛肉DNA快速提取试剂和基因检测试剂,采用核酸试纸条进行可视化检测;应用分子克隆及测序技术,克隆牛肉标准品;并对试剂的特异性、重现性、稳定性及灵敏度进行考察。提取基因组DNA的方法简单、快速,DNA的完整性、浓度及纯度均非常好;退火温度59℃、在20个循环时试纸条检测结果最特异,牛肉正品均出现2条条带,易混品及空白对照均出现1条条带。克隆测序后的牛肉DNA序列与牛线粒体DNA特异指纹区段序列同源性100%。自主研发的试剂盒特异性、重现性、稳定性良好,模板DNA最低检出量为1 pg/μL。该研究建立的PCR-核酸试纸条方法特异性强、灵敏、准确、简便、快速;研制的试剂盒操作简便快速、结果可视稳定,适用于实地监测。
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关键词
PCR
核酸试纸条
牛肉
快速检测试剂盒
分子克隆
测序
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职称材料
题名
基于双重PCR技术的鹿茸及其伪品DNA指纹特征和鉴定
被引量：
12
1
作者
高丽君
何程远
李盈诺
巴宏宇
李梓僮
夏薇
李明成
苑广信
张丽华
艾金霞
机构
北华大学医学检验学院临床血液与体液检验教研室
北华大学药学院药物分析教研室
吉林雷宁食品药品检测技术服务有限公司
出处
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第4期839-844,共6页
基金
吉林省科技厅重点科技成果转化项目资助课题(20160307030YY
20170307001YY)
+3 种基金
吉林省科技厅重点科技攻关项目资助课题(20160204004NY)
吉林省发改委产业技术研究与开发项目资助课题(2015Y077)
吉林省教育厅"十二五"科学技术研究项目资助课题(吉教科合字[2015]D143)
国家级大学生创新创业训练计划项目资助课题(201711923018)
文摘
目的:分析鹿茸线粒体细胞色素b(Cytb)和细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因特异性,建立双重PCR技术鉴别鹿茸真伪的分子指纹特征。方法:利用碱变性法提取梅花鹿茸、马鹿茸、驯鹿茸和新西兰鹿茸的基因组DNA,应用引物设计软件Premier 5.0针对Cytb和COⅠ分别设计特异性引物(分别为Cytb 1、2和COⅠ1、2、3),采用单一及双重引物分别进行PCR扩增,筛选特异性强的引物,确定最佳PCR反应条件。结果:采用碱变性法提取的鹿茸基因组DNA片段长度为23 000bp,DNA纯度即A(260)/A(280)为1.80±0.02;应用单一引物进行PCR扩增无法鉴定鹿茸的真伪,而引物Cytb 1和COⅠ1组合后,解链温度为58℃时,梅花鹿茸(吉林、安徽)、马鹿茸均能扩增出395和525bp大小的2个片段,而驯鹿茸和新西兰鹿茸均未能扩增出相应片段;采用该提取方法及最优化的PCR反应条件,对市售样品进行检测,检测结果与实际情况完全一致。结论:双重PCR技术可从分子水平鉴别鹿茸的真伪,该方法特异性高、实用性强,且简便快捷,在鹿茸真伪鉴别方面具有较高的应用价值。
关键词
鹿茸
细胞色素B
细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ
双重聚合酶链反应
DNA指纹
Keywords
velvet antler
eytochrome b gene
cytochrome C oxideae subunit I
duplex polymerase chain reaction
DNA fingerprint
分类号
R282.5 [医药卫生—中药学]
Q523 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
牛肉PCR-核酸试纸条快速鉴定方法的建立及试剂盒的研制
被引量：
15
2
作者
姜海瀛
张志杰
王艳双
张莉
高丽君
李明成
孙丽媛
张丽华
机构
北华大学医学
技术
学院
北华大学临床学院
北华大学医学院
北华大学
吉林
省中药DNA指纹
检测
技术
科技创新中心
吉林
市第三十二中学
吉林雷宁食品药品检测技术服务有限公司
出处
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第18期275-281,共7页
基金
吉林省科技发展计划项目(20190303093SF,20190301014NY,20200404152YY,20200403047SF)
吉林省科技创新中心建设项目(20190902018TC)
吉林省北华大学大学生创新创业训练计划项目(S202110201120)。
文摘
该研究建立肉类食品中牛肉PCR-核酸试纸条快速鉴定方法,并开发快速检测试剂盒。对国家标准中牛的特异性引物进行标记,研发牛肉DNA快速提取试剂和基因检测试剂,采用核酸试纸条进行可视化检测;应用分子克隆及测序技术,克隆牛肉标准品;并对试剂的特异性、重现性、稳定性及灵敏度进行考察。提取基因组DNA的方法简单、快速,DNA的完整性、浓度及纯度均非常好;退火温度59℃、在20个循环时试纸条检测结果最特异,牛肉正品均出现2条条带,易混品及空白对照均出现1条条带。克隆测序后的牛肉DNA序列与牛线粒体DNA特异指纹区段序列同源性100%。自主研发的试剂盒特异性、重现性、稳定性良好,模板DNA最低检出量为1 pg/μL。该研究建立的PCR-核酸试纸条方法特异性强、灵敏、准确、简便、快速;研制的试剂盒操作简便快速、结果可视稳定,适用于实地监测。
关键词
PCR
核酸试纸条
牛肉
快速检测试剂盒
分子克隆
测序
Keywords
PCR
nucleic acid test strips
beef
rapid detection kits
molecular cloning
sequencing
分类号
TS251.7 [轻工技术与工程—农产品加工及贮藏工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于双重PCR技术的鹿茸及其伪品DNA指纹特征和鉴定
高丽君
何程远
李盈诺
巴宏宇
李梓僮
夏薇
李明成
苑广信
张丽华
艾金霞
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2018
12
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
牛肉PCR-核酸试纸条快速鉴定方法的建立及试剂盒的研制
姜海瀛
张志杰
王艳双
张莉
高丽君
李明成
孙丽媛
张丽华
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2021
15
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职称材料
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