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骨髓间充质干细胞来源外泌体诱导自噬对MPP+抑制SH-SY5Y细胞存活的影响及其机制 被引量：4
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作者 汪文涛 米旭光 +4 位作者 周阳 蒲文星 高佳旭 景猛 孟繁凯 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期606-614,共9页
目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)来源外泌体(Exo)诱导自噬对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP^(+))抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞存活的影响,阐明其作用机制。方法:将人神经细胞肿瘤SH-SY5Y细胞分别给予不同浓度(0、0.25、0.50、1.00和2.00... 目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)来源外泌体(Exo)诱导自噬对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP^(+))抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞存活的影响,阐明其作用机制。方法:将人神经细胞肿瘤SH-SY5Y细胞分别给予不同浓度(0、0.25、0.50、1.00和2.00 mmol·L^(-1))MMP+作用24和48 h后检测各组细胞存活率。实验分为对照组[给予磷酸盐缓冲液(PBS)]、MPP^(+)组(给予0.50 mmol·L^(-1) MPP^(+))、MPP^(+)+BMSCs的上清液(BMSCs-Sup)组(给予0.50 mmol·L^(-1) MPP^(+)和BMSCs Sup)、MPP^(+)+BMSCs-Exo组(给予0.50 mmol·L^(-1) MPP^(+)和100 mg·L^(-1) BMSCs Exo)、MPP^(+)+雷帕霉素(Rap)组(给予0.50 mmol·L^(-1) MPP^(+)和2 mmol·L^(-1) Rap)和MPP^(+)+BMSCs-Exo+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(给予0.50 mmol·L^(-1) MPP^(+)、100 mg·L^(-1) BMSCs-Exo和1 mmol·L^(-1)3-MA)。MTT法检测各组SH-SY5Y细胞存活率,共聚焦显微镜下观察吖啶橙染色后各组SH-SY5Y细胞中自噬酸性囊泡荧光强度,Western blotting法检测各组细胞中CD63、TGS101和Calnexin蛋白表达情况。结果:MTT检测,SH-SY5Y细胞存活率随着MPP^(+)浓度的升高或处理时间的延长逐渐降低(P<0.05),且呈浓度和时间依赖性。与MPP^(+)组比较,MPP^(+)+BMSCs-Sup组、MPP^(+)+BMSCs-Exo组和MPP^(+)+Rap组SH-SY5Y细胞存活率升高(P<0.05);与MPP^(+)+BMSCs-Exo组比较,MPP^(+)+BMSCs-Exo+3-MA组SH-SY5Y细胞存活率降低(P<0.05)。细胞吖啶橙染色,与MPP^(+)组比较,MPP^(+)+BMSCs-Sup组、MPP^(+)+BMSCs-Exo组和MPP^(+)+Rap组SH-SY5Y细胞中自噬酸性囊泡荧光强度增加(P<0.05);与MPP^(+)+BMSCs-Exo组比较,MPP^(+)+BMSCs-Exo+3-MA组SH-SY5Y细胞中自噬酸性囊泡荧光强度降低(P<0.05)。Western blotting法检测,各组细胞中外泌体标志蛋白CD63和TGS101蛋白高表达,内质网标志蛋白Calnexin低表达。结论:BMSCs-Exo通过激活细胞自噬抵抗MPP^(+)诱导的SH-SY5Y细胞存活率下降。 展开更多
关键词 外泌体 骨髓间充质干细胞 自噬 细胞存活率 SH-SY5Y细胞
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