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金黄色葡萄球菌IsdB表位蛋白与HBc蛋白融合表达 被引量:2
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作者 白靓 成岩 +3 位作者 徐芳菲 刘燕 张树军 曹瑞珍 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期269-274,共6页
目的:采用大肠杆菌表达HBc-IsdB50-285融合蛋白,探讨其在原核表达系统中的表达效果。方法:设计并克隆HBc-IsdB50-285融合基因片段,构建表达质粒pET-28-HBc-IsdB50-285,并转化入E.coli BL21,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达。SDS-P... 目的:采用大肠杆菌表达HBc-IsdB50-285融合蛋白,探讨其在原核表达系统中的表达效果。方法:设计并克隆HBc-IsdB50-285融合基因片段,构建表达质粒pET-28-HBc-IsdB50-285,并转化入E.coli BL21,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达。SDS-PAGE分析蛋白可溶性及相对分子质量;BCA法测蛋白浓度;采用免疫接种法检测重组蛋白的免疫活性。40只小鼠随机分为rIsdB+adjuvant组、HBc-IsdB50-285+adjuvant组、HBcIsdB50-285组和PBS组,每组10只,间接ELISA法检测小鼠特异性IgG效价值,采用金黄色葡萄球菌Newman株对免疫后小鼠攻毒,检测各组小鼠重组蛋白免疫保护效果。结果:表达质粒pET-28-HBc-IsdB50-285经测序及酶切鉴定证明构建正确;SDS-PAGE分析,重组蛋白以部分可溶形式存在于培养上清中,相对分子质量约为44 000,亲和纯化后蛋白质水平为1.0g·L-1。ELISA检测,使用rIsdB蛋白包被酶标板,HBc-IsdB50-285+adjuvan组小鼠血清特异性抗体滴度的效价值低于rIsdB+adjuvant组(P<0.01);使用HBc-IsdB50-285蛋白包被酶标板,HBc-IsdB50-285+adjuvant组的小鼠血清特异性抗体滴度的效价值高于rIsdB+adjuvant和HBc-IsdB50-285组。攻毒实验,HBc-IsdB50-285+adjuvant组小鼠对金黄色葡萄球菌免疫保护率低于rIsdB+adjuvant组,但差异无统计学意义(P>0.05);且其与HBc-IsdB50-285未添加佐剂组比较差异也无统计学意义(P>0.05);与PBS组比较,HBc-IsdB50-285+adjuvant组小鼠对金黄色葡萄球免疫保护率升高(P<0.01),HBc-IsdB50-285组小鼠对金黄色葡萄球菌攻毒保护率亦升高(P<0.05)。结论:HBc-IsdB50-285原核表达载体构建成功;在大肠杆菌中成功表达具有较好生物活性的HBc-IsdB50-285融合蛋白。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 乙型肝炎病毒核心蛋白 铁调节表面决定因子B 表位
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紫金龙总生物碱超声波辅助提取工艺 被引量:4
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作者 肖凤艳 高静 孙莉佳 《湖北农业科学》 北大核心 2011年第20期4256-4257,4272,共3页
采用酸性染料比色法测定紫金龙(Dactylicapnos scandens)总生物碱的含量,通过正交设计方法,以总生物碱提取率为评价指标,优化超声波辅助提取工艺。结果表明,超声波辅助提取总生物碱的影响因素大小顺序为乙醇体积分数>提取时间>料... 采用酸性染料比色法测定紫金龙(Dactylicapnos scandens)总生物碱的含量,通过正交设计方法,以总生物碱提取率为评价指标,优化超声波辅助提取工艺。结果表明,超声波辅助提取总生物碱的影响因素大小顺序为乙醇体积分数>提取时间>料液比,用料液比为1∶9(m/V,g∶mL),90%(V/V,下同)的乙醇溶解,超声波辅助提取40 min为最佳提取工艺条件,此工艺条件下,总生物碱提取率为2.69%。 展开更多
关键词 紫金龙(Dactylicapnos scandens) 总生物碱 超声波辅助提取 正交设计
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RP-HPLC法测定西洋参茎叶中二醇皂苷5种成分含量 被引量:3
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作者 尹尚军 吴鸿雁 +1 位作者 徐芳菲 尹笠佥 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期658-660,共3页
目的建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)同时测定西洋参茎叶二醇皂苷中5个成分(人参皂苷Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd)含量测定方法。方法采用高效液相色谱法。色谱柱AgilentTC-C18(4.6mm×250mm,5μm);乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱... 目的建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)同时测定西洋参茎叶二醇皂苷中5个成分(人参皂苷Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd)含量测定方法。方法采用高效液相色谱法。色谱柱AgilentTC-C18(4.6mm×250mm,5μm);乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱;检测波长203nm;体积流量1.0ml/min;柱温40℃。结果5种成分均达到基线分离,线性良好。人参皂苷Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd平均回收率分别为98.39%、97.36%、98.02%、97.70%、97.01%。结论该方法能快速、准确地测定西洋叁茎叶二醇皂苷5种成分的含量,而且重复性好。 展开更多
关键词 西洋参茎叶二醇皂苷 人参皂苷Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd 高效液相色谱法
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葛根护肝片组方配伍及其辅助护肝功能研究 被引量:8
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作者 史保银 刘新宇 +4 位作者 邸琳 史顶聪 秦海龙 赵宏宇 张凤清 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2020年第10期299-305,共7页
目的:研究葛根、白芍、甘草3种药材不同配伍对小鼠酒精性肝损伤的影响。方法:采用L9(34)正交试验,测定急性酒精性肝损伤小鼠血清中极低密度脂蛋白(VLDL)及肝脏中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量给予保肝作用综合评分,求得葛根、甘草、... 目的:研究葛根、白芍、甘草3种药材不同配伍对小鼠酒精性肝损伤的影响。方法:采用L9(34)正交试验,测定急性酒精性肝损伤小鼠血清中极低密度脂蛋白(VLDL)及肝脏中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量给予保肝作用综合评分,求得葛根、甘草、白芍的最优配伍。以小鼠肝脏中GSH含量、血清中GPT和GOT水平以及总胆红素(TBIL)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)等为指标,研究最优配伍低、中、高剂量组对亚急性酒精肝损伤小鼠的影响,计算肝指数,同时取部分肝脏组织进行病理学染色观察。结果:葛根护肝片最优配伍组合为葛根4 g、白芍2 g、甘草2 g。与亚急性酒精性肝损伤模型组比较,该配伍的中剂量组可降低小鼠血清中GPT和GOT的活性,显著降低TBIL、TC、TG、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)及VLDL的含量(P<0.05),肝细胞以疏松变性为主,未见坏死及炎细胞浸润,变性的程度得到有效减轻。结论:该葛根护肝片最优配伍为葛根4 g、白芍2 g、甘草2 g,对小鼠酒精性肝损伤有明显的辅助保护作用。 展开更多
关键词 葛根护肝片 白芍 甘草 配伍优化 酒精性肝损伤
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