反向遗传操作技术在瘟病毒属研究中的应用 被引量：1

1

作者 洪焜 刁乃超 +2 位作者 李建明 时坤 杜锐 《中国兽药杂志》 北大核心 2017年第7期57-63,共7页

反向遗传操作技术已经成为研究瘟病毒属的一条有效的途径。针对反向遗传技术在瘟病毒属基因结构和功能研究、致病机制研究和新型疫苗研制中的应用以及瘟病毒属的感染性克隆策略的选择进行了综述,以期为预防、控制和消灭瘟病毒属病毒提... 反向遗传操作技术已经成为研究瘟病毒属的一条有效的途径。针对反向遗传技术在瘟病毒属基因结构和功能研究、致病机制研究和新型疫苗研制中的应用以及瘟病毒属的感染性克隆策略的选择进行了综述,以期为预防、控制和消灭瘟病毒属病毒提供参考。 展开更多

关键词 反向遗传操作技术 瘟病毒属 致病机制 应用

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黄连总生物碱对结核菌PhoPR双组份系统基因转录水平影响的研究 被引量：1

2

作者 曾范利 于丹 +5 位作者 姜园园 时坤 李健明 宗颖 赵丹 杜锐 《中国兽药杂志》 北大核心 2016年第9期6-10,共5页

为研究黄连总生物碱对结核菌Pho PR双组份系统基因转录水平的影响,对不同药物作用的菌液提取总RNA并进行反转录,根据Gen Bank中H37Rv的Pho P(0757)基因、PhoR(0758)基因和Sig A的基因序列,应用Primer6.0软件设计荧光定量引物并进行荧光... 为研究黄连总生物碱对结核菌Pho PR双组份系统基因转录水平的影响,对不同药物作用的菌液提取总RNA并进行反转录,根据Gen Bank中H37Rv的Pho P(0757)基因、PhoR(0758)基因和Sig A的基因序列,应用Primer6.0软件设计荧光定量引物并进行荧光定量PCR分析。结果显示:在高浓度黄连生物碱作用时,多药耐药结核菌MT-7、MB-1的Pho P和PhoR的基因的表达水平明显下降,并且黄连总生物碱与RPF联合作用时,多药耐药结核菌MT-7、MB-1的Pho P和PhoR的基因的表达水平明显下降,表明黄连生物碱是RFP抗菌增效剂。本试验为结核菌抗菌增效作用机制研究奠定了理论基础。 展开更多

关键词 黄连总生物碱 结核菌 Pho PR双组份系统 转录水平

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5种中药提取物对金黄色葡萄球菌抑制作用的研究 被引量：7

3

作者 王双双 吴胜奎 +7 位作者 孙江洋 石金凤 宗颖 时坤 李健明 赵丹 曾范利 杜锐 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2017年第12期55-57,I0005,共4页

采用水提,水浴加热的方法提取黄芩、黄连、黄柏、鱼腥草和五倍子五味中药的有效成分,通过二倍稀释法测出各个药的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),采用肉汤稀释棋盘法测定五味中药的联合抑菌情况。结果显示,金黄色葡萄球菌对黄连... 采用水提,水浴加热的方法提取黄芩、黄连、黄柏、鱼腥草和五倍子五味中药的有效成分,通过二倍稀释法测出各个药的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),采用肉汤稀释棋盘法测定五味中药的联合抑菌情况。结果显示,金黄色葡萄球菌对黄连高度敏感;对黄芩、黄柏、五倍子和鱼腥草为中度敏感。黄芩、黄连和五倍子的杀菌作用较强,鱼腥草和黄柏的杀菌作用较弱。通过联合抑菌指数(FLCL)可知五倍子与黄芩、五倍子与黄连联合用药为协同作用。五倍子与鱼腥草、黄连与鱼腥草、黄连与黄芩的联合作用,表现为相加作用。黄连与黄柏、黄芩与鱼腥草、黄芩与黄柏、五倍子与黄柏的联合作用,表现为无关作用。鱼腥草与黄柏表现为拮抗作用。 展开更多

关键词 中药提取物 金黄色葡萄球菌 最小抑菌浓度 最小杀菌浓度 联合抑菌指数

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鹿尾蛋白与多肽制备工艺优化及其对TM3细胞增殖活性研究 被引量：5

4

作者 郭鑫 吴梦阳 +4 位作者 郭子奕 时坤 李建明 宗颖 杜锐 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第22期181-186,共6页

以梅花鹿尾为研究对象,采用正交试验优化超声水提蛋白工艺及水酶法提取多肽工艺,比较两种最佳工艺所得物对小鼠睾丸间质细胞(TM3)增殖活性的影响。结果表明,超声水提蛋白工艺最佳条件为料液比1∶5 g/mL、超声功率200 W、提取时间1 h、... 以梅花鹿尾为研究对象,采用正交试验优化超声水提蛋白工艺及水酶法提取多肽工艺,比较两种最佳工艺所得物对小鼠睾丸间质细胞(TM3)增殖活性的影响。结果表明,超声水提蛋白工艺最佳条件为料液比1∶5 g/mL、超声功率200 W、提取时间1 h、提取温度40℃,在此条件下蛋白含量为60.72%±0.56%;水酶法提取多肽工艺中最佳蛋白酶为胰蛋白酶,酶解最佳条件为pH8、加酶量1500 U/g、酶解时间4 h、提取温度50℃,在此条件下水解度为22.85%±0.35%。水酶法提取鹿尾多肽对小鼠睾丸间质细胞(TM3)增殖活性优于超声水提鹿尾蛋白。 展开更多

关键词 鹿尾 蛋白 多肽 酶解产物 CCK-8法 小鼠睾丸间质细胞(TM3) 增殖活性

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植物精油的抑菌作用研究进展 被引量：9

5

作者 王慧 周红潮 +5 位作者 张旭 任晓航 时坤 李建明 杜锐 宗颖 《动物医学进展》 北大核心 2019年第4期107-111,共5页

近年来,随着细菌/真菌感染率大幅度上升,食源性疾病的全球发病率不断增多,而伴随致病菌耐药性的出现,现有抗菌药物的抑菌效果越来越有限,并对机体产生较大的毒副作用。精油系植物提取物的主要有效组分具有抗炎、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤... 近年来,随着细菌/真菌感染率大幅度上升,食源性疾病的全球发病率不断增多,而伴随致病菌耐药性的出现,现有抗菌药物的抑菌效果越来越有限,并对机体产生较大的毒副作用。精油系植物提取物的主要有效组分具有抗炎、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤和抗菌等多重药理作用,其显著的抗细菌和抗真菌活性对于解决食品中日渐增多的耐药性细菌/真菌感染问题有着重要意义。论文对植物精油抑菌作用进行阐述,并详细地分析精油主要成分含量的影响因素,为更好的利用精油提供参考,同时为保障食品安全及相关研究提供科学依据。 展开更多

关键词 植物精油 抑菌作用 食源性疾病

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水貂阿留申病毒诱导CrFK细胞凋亡信号通路的研究 被引量：3

6

作者 葛桂阳 栾美慧 +8 位作者 宫庆龙 刘艺 李东丽 麻宝艺 盛陈艳 时坤 李健明 冷雪 杜锐 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1089-1095,共7页

本实验室前期研究表明水貂阿留申病毒(AMDV)G株感染猫肾细胞(CrFK)可以引起其凋亡,为研究AMDV在体外通过何种途径诱导CrFK细胞的凋亡,本实验采用MOI 1的AMDV G株感染CrFK细胞,于感染后不同时间(2 h、12 h、24 h、36 h、48 h和60 h,下同... 本实验室前期研究表明水貂阿留申病毒(AMDV)G株感染猫肾细胞(CrFK)可以引起其凋亡,为研究AMDV在体外通过何种途径诱导CrFK细胞的凋亡,本实验采用MOI 1的AMDV G株感染CrFK细胞,于感染后不同时间(2 h、12 h、24 h、36 h、48 h和60 h,下同)通过分光光度法检测试剂盒检测Caspase-8、Caspase-9的活性;利用western blot检测Caspase-8和Caspase-9蛋白的表达情况。采用Caspase-8和Caspase-9抑制剂处理CrFK细胞后感染AMDV G株,于不同时间检测Caspase-3的活性。于AMDV G株感染CrFK细胞后不同时间,利用荧光定量PCR检测细胞中死亡受体通路分子Caspase-8、Fas、FasL和线粒体通路分子Caspase-9、Bax、Bcl-2、Cyt C以及凋亡执行因子Caspase-3的mRNA转录水平;采用JC-10线粒体膜电位试剂盒检测各时间点细胞线粒体膜电位的去极化情况。结果显示,AMDV G株感染CrFK细胞后不同时间Caspase-8的活性均无明显变化,而Caspase-9的活性则随感染时间的延长而明显增强;western blot结果显示,Caspase-8蛋白的表达不受影响,而Caspase-9在AMDV感染后12 h被切割活化。Caspase-3活性的检测结果显示,抑制CrFK细胞中Caspase-8的活性后再感染AMDV,Caspase-3的活性逐渐增强,而抑制细胞中Caspase-9的活性后再感染AMDV,则Caspase-3的活性无明显变化,即抑制了Caspase-9再感染AMDV并不能诱导细胞凋亡;荧光定量PCR结果显示,AMDV感染CrFK细胞后不同时间Caspase-8、Fas、FasL基因的转录水平均无明显变化,而Caspase-9、Caspase-3、Cyt C基因mRNA转录水平及Bax/Bcl-2的比值则随感染时间的延长而逐渐升高。线粒体膜电位结果显示,AMDV感染的CrFK细胞线粒体膜电位下降,发生了明显去极化现象,表现为细胞发生了凋亡。综上,本研究首次证实AMDV G株感染CrFK细胞后激活了线粒体途径的细胞凋亡执行分子Caspase-3及线粒体通路相关基因Bax、Bcl-2、Caspase-9和Cyt C,并未激活死亡受体通路相关分子,AMDV G株是通过激活细胞线粒体通路而诱导CrFK细胞的凋亡。本研究为AMDV感染CrFK细胞凋亡机制的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 水貂阿留申病毒 CrFK细胞 凋亡 信号通路

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中药抗牛病毒性腹泻病毒作用研究现状 被引量：3

7

作者 王慧 杜锐 +4 位作者 周红潮 时坤 李建明 曾范利 宗颖 《动物医学进展》 北大核心 2018年第2期123-126,共4页

将牛病毒性腹泻病毒侵染细胞过程与中药抗病毒的作用机理相结合,对中药体外抗牛病毒性腹泻病毒(BVDV)作用的现代研究内容及方法进行总结,同时针对已研究出的具有抗牛病毒性腹泻病毒活性作用的中药有效部位及中药复方的研究现状进行了全... 将牛病毒性腹泻病毒侵染细胞过程与中药抗病毒的作用机理相结合,对中药体外抗牛病毒性腹泻病毒(BVDV)作用的现代研究内容及方法进行总结,同时针对已研究出的具有抗牛病毒性腹泻病毒活性作用的中药有效部位及中药复方的研究现状进行了全面的阐述,为开展抗BVDV中药的筛选及深入研究提供借鉴,为牛病毒性腹泻病毒引起的传染性疾病的研究与防控提供新的思路,为抗牛病毒性腹泻病毒的中药制剂开发提供科学依据,并展望了抗BVDV的中药开发前景以供参考。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒 中药 有效部位 中药复方

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分支杆菌Rv0024诱导生物膜的形成和抗细胞壁作用研究进展 被引量：2

8

作者 刘巍 李东 +6 位作者 曾范利 李健明 时坤 宗颖 冷雪 王春凤 杜锐 《动物医学进展》 北大核心 2017年第7期70-73,共4页

多药耐药结核菌和广泛耐药结核菌的出现,使得结核病成为全球第二大传染病。而生物膜的形成在几个人类病原体发病机制作用是公认的。然而,在结核分支杆菌感染情况下生物膜的作用和生物膜形成的遗传因素仍然存在很大程度上的未知。论文通... 多药耐药结核菌和广泛耐药结核菌的出现,使得结核病成为全球第二大传染病。而生物膜的形成在几个人类病原体发病机制作用是公认的。然而,在结核分支杆菌感染情况下生物膜的作用和生物膜形成的遗传因素仍然存在很大程度上的未知。论文通过查阅大量外文文献阐述了细胞壁在结核分支杆菌中的耐药机制,并且发现生物膜中Rv0024为新的NlpC/p60蛋白质家族的一员,通过结核分支杆菌Rv0024异位表达,编码一个假定的肽酶,并且随着抗结核药物异烟肼和吡嗪酰胺耐药性的出现,生物膜形成的Rv0024也显著增加。Rv0024可能在初次感染过程中发挥了关键作用,参与宿主细胞的耐药性产生。因此,Rv0024可作为治疗肺结核的一个潜在的药物靶标进行深入研究。 展开更多

关键词 分支杆菌 Rv0024 生物膜 耐药性

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水貂阿留申病毒感染过程中主要分子蛋白作用机理研究进展 被引量：1

9

作者 栾美慧 李健明 +7 位作者 时坤 刘艺 徐宁 郜艳雪 宫庆龙 孙志博 冷雪 杜锐 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期973-976,共4页

水貂阿留申病(Aleutian mink disease,AMD)是由AMD病毒(AMDV)感染水貂引起的自身免疫系统功能紊乱,并引发自身免疫的慢性、传染性疾病,在全球范围的水貂养殖国家造成了重大的经济损失[1-2]。由于其特殊的致病机制和抗体依赖性增强作用(A... 水貂阿留申病(Aleutian mink disease,AMD)是由AMD病毒(AMDV)感染水貂引起的自身免疫系统功能紊乱,并引发自身免疫的慢性、传染性疾病,在全球范围的水貂养殖国家造成了重大的经济损失[1-2]。由于其特殊的致病机制和抗体依赖性增强作用(ADE)[3-4],尚无预防该病的商业疫苗。目前主要通过检疫淘汰病貂来净化貂厂,但该方法无法从根本上杜绝该病的发生发展。因此国内外对AMDV致病机制进行了大量研究,结果表明AMDV中参与ADE的结构蛋白、负责调控病毒复制的非结构蛋白及宿主的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspases)在致病机制中具有重要作用。本文对AMDV感染过程中各主要分子蛋白的相关调控进行阐述,以期为AMDV的致病机理以及进一步研究和防治AMD奠定理论基础。 展开更多

关键词 水貂阿留申病毒 感染过程 非结构蛋白 致病机制 自身免疫 传染性疾病 病毒复制 水貂养殖

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牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的亚细胞定位研究 被引量：1

10

作者 刁乃超 时坤 +5 位作者 李健明 李仲乐 姜园园 刘东旭 王春凤 杜锐 《中国兽药杂志》 北大核心 2016年第4期1-5,共5页

为深入研究牛病毒性腹泻病毒E_2蛋白的生物学功能,了解其在哺乳动物细胞中的亚细胞定位情况,采用RT-PCR扩增牛病毒性腹泻病毒Changchun184株E_2基因,将其克隆至真核表达载体pc DNA3.1/V5His A中,并进行酶切鉴定和测序分析,将构建的重组... 为深入研究牛病毒性腹泻病毒E_2蛋白的生物学功能,了解其在哺乳动物细胞中的亚细胞定位情况,采用RT-PCR扩增牛病毒性腹泻病毒Changchun184株E_2基因,将其克隆至真核表达载体pc DNA3.1/V5His A中,并进行酶切鉴定和测序分析,将构建的重组质粒pc DNA3.1/V5His A-E_2经脂质体介导转染至MDBK细胞。继续培养48h后,在激光共聚焦显微镜下观察E_2蛋白在细胞中的亚细胞定位情况。结果表明,E_2蛋白在细胞核与细胞质中均有表达,且绿色荧光呈点状均匀分布。该研究为进一步研究牛病毒性腹泻病毒E_2蛋白的相关功能奠定了基础。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒 E2蛋白 亚细胞定位

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不同毒力结核分枝杆菌对THP-1细胞凋亡及细胞因子表达的影响 被引量：2

11

作者 张妍 宋纪伟 +6 位作者 曾范利 时坤 李健明 刘杨 刘菲 孙凡婷 杜锐 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1600-1605,共6页

为探讨不同毒力结核分枝杆菌(MTB)感染巨噬细胞后不同时间点细胞凋亡情况与其分泌的几种主要细胞因子转录与表达之间的关系,建立THP-1体外巨噬细胞模型,用不同毒力MTB(强毒株H37Rv、弱毒株BCG)感染细胞,应用流式细胞术检测巨噬细胞在六... 为探讨不同毒力结核分枝杆菌(MTB)感染巨噬细胞后不同时间点细胞凋亡情况与其分泌的几种主要细胞因子转录与表达之间的关系,建立THP-1体外巨噬细胞模型,用不同毒力MTB(强毒株H37Rv、弱毒株BCG)感染细胞,应用流式细胞术检测巨噬细胞在六个时间点的凋亡情况,应用荧光定量PCR检测细胞因子TNF-α、IL-10、IL-6的转录水平,应用ELISA方法检测细胞上清液中三种细胞因子的分泌量。结果显示:BCG组和H37Rv组的早期凋亡率均显著高于对照组(P<0.05)。巨噬细胞细胞因子TNF-α、IL-6的转录水平与分泌水平相符,弱毒菌株巨噬细胞凋亡情况随时间延长成上升趋势,其分泌的细胞因子TNF-α表现为相同趋势,IL-6表现为相反趋势。强毒株巨噬细胞凋亡情况低于弱毒株,细胞因子分泌情况复杂,一般表现为一种先增强后抑制的情况。本试验通过对不同时间点细胞因子与凋亡情况关系的研究为结核分枝杆菌对巨噬细胞凋亡机制提供新思路。 展开更多

关键词 不同毒力结核分枝杆菌 THP-1细胞 凋亡 细胞因子

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猪伪狂犬病毒的分离鉴定及其部分毒力基因序列遗传变异分析 被引量：5

12

作者 徐宁 葛桂阳 +8 位作者 李东丽 刘艺 宫庆龙 麻宝艺 盛陈艳 时坤 李健明 冷雪 杜锐 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第5期1794-1803,共10页

为了解吉林省猪伪狂犬病毒(PRV)的遗传变异情况,本研究将采集自吉林省疑似发生猪伪狂犬病的临床样品,通过细胞传代、PCR检测和测序分析进行病毒分离鉴定。TCID50法测定分离毒株的病毒滴度,通过家兔感染试验测定分离毒株对家兔的致病性。... 为了解吉林省猪伪狂犬病毒(PRV)的遗传变异情况,本研究将采集自吉林省疑似发生猪伪狂犬病的临床样品,通过细胞传代、PCR检测和测序分析进行病毒分离鉴定。TCID50法测定分离毒株的病毒滴度,通过家兔感染试验测定分离毒株对家兔的致病性。对TK、gB、gC、gD和gE基因进行PCR扩增和测序,分析其遗传变异情况。结果表明,临床样品经PK15细胞传代后,有3份样品出现细胞病变,经PCR鉴定和测序分析表明,分离获得3株PRV,分别命名为PRV JL03、JL12和JL15株。通过PK15细胞测定分离毒株的病毒滴度分别为10^(6.5)、10^(6.5)和10^(7.5)TCID50/mL。6只家兔分别接种3株分离毒株(10^(3.5)TCID50/只)后均表现为体温升高、注射部位奇痒和四肢麻痹等症状,且于病毒接种后3~4 d全部死亡。3株分离病毒TK、gB、gC、gD和gE基因推导氨基酸序列分析结果表明,与参考毒株相比,分离株TK基因未发生氨基酸变异;gB、gC、gD和gE基因部分位点发生氨基酸缺失、插入或突变,其中gE基因在第48和496位分别存在1个天冬氨酸的插入,与国内报道的流行毒株变异特征一致。遗传进化树分析结果表明,3株分离毒株TK、gB、gC、gD和gE基因与国内2012年以后分离的参考毒株JS-2012和ZJ01等的上述基因均表现出较高的同源性,说明毒株间亲缘关系较近,位于同一分支;与国外分离毒株NIA3和Becker等亲缘关系较远,位于不同的分支;而与国内早期流行的毒株SC和Ea等亲缘关系介于二者之间。本研究成功分离鉴定了3株PRV变异株,分离毒株对家兔具有较强的致病性,该结果为吉林省PRV流行病学研究提供了新的数据,并为相关后续研究奠定基础。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病毒 分离鉴定 遗传变异分析

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抑制鹿源多药耐药结核菌中药的筛选 被引量：2

13

作者 姜园园 李温明 +7 位作者 刘畅 曾范利 时坤 李健明 刁乃超 李仲乐 刘东旭 杜锐 《动物医学进展》 北大核心 2016年第4期54-57,共4页

为了筛选对鹿源多药耐药结核菌有效的中药耐药抑制剂,通过MABA法检测24种中药的水和乙醇提取物对多药耐药结核菌及标准菌H37Rv的体外抗菌效果,将筛选出的抗菌效果好的黄连醇提物和黄连水提物采用紫外分光光度法进行活性成分含量测定,同... 为了筛选对鹿源多药耐药结核菌有效的中药耐药抑制剂,通过MABA法检测24种中药的水和乙醇提取物对多药耐药结核菌及标准菌H37Rv的体外抗菌效果,将筛选出的抗菌效果好的黄连醇提物和黄连水提物采用紫外分光光度法进行活性成分含量测定,同时以MABA法与标准品比较体外抗结核菌活性。结果显示,黄连、独活和侧柏叶有明显的抗结核活性,其中黄连水粗提物和乙醇粗提物效果最佳,测得它们活性成分即总生物碱含量分别为22.74%和35.23%,并显示二者与小檗碱的体外抗结核作用相同。 展开更多

关键词 鹿 多药耐药结核菌 中药 耐药抑制剂

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