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脐带间充质干细胞外泌体对子宫内膜基质细胞氧化损伤和炎症因子表达的影响
1
作者 王琳 米旭光 +7 位作者 林秀英 付建华 刘磊 王爱乔 杜茜 张文琦 范美娇 方艳秋 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第9期2153-2160,共8页
目的:探讨脐带间充质干细胞外泌体(hUCMSCs-Exo)对双酚AF(BPAF)诱导的子宫内膜基质细胞(hESCs)氧化损伤和炎症因子释放的影响。方法:将hESCs分为Control组、BPAF组(25μmol/L BPAF处理)、BPAF+Exo组(25μmol/L BPAF+hUCMSCs-Exo处理)、B... 目的:探讨脐带间充质干细胞外泌体(hUCMSCs-Exo)对双酚AF(BPAF)诱导的子宫内膜基质细胞(hESCs)氧化损伤和炎症因子释放的影响。方法:将hESCs分为Control组、BPAF组(25μmol/L BPAF处理)、BPAF+Exo组(25μmol/L BPAF+hUCMSCs-Exo处理)、BPAF+Exo+LY组(25μmol/L BPAF+hUCMSCs-Exo+10μmol/L LY294002处理)。MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡、胞内ROS水平以及线粒体膜电位水平;Western blot检测Bcl-2、Bax、Cleaved-caspase-3及PI3K/AKT信号通路蛋白表达;RT-qPCR检测炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA表达。结果:与对照组相比,随着BPAF(≥25μmol/L)浓度升高,hESCs存活率逐渐降低(P<0.01),细胞凋亡率逐渐升高。与对照组相比,BPAF组ROS水平升高,线粒体膜电位水平下降,Bax、Cleaved-caspase-3蛋白表达明显增多,Bcl-2、p-PI3K、p-AKT蛋白表达明显减少。与BPAF组相比,BPAF+Exo组细胞存活率升高(P<0.01),ROS水平降低,线粒体膜电位水平升高,Bax、Cleaved-caspase-3蛋白表达减少,Bcl-2、p-PI3K、p-AKT蛋白表达增加。与BPAF+Exo组相比,BPAF+Exo+LY组细胞Bax、Cleaved-caspase-3蛋白表达增加,Bcl-2、p-PI3K、p-AKT蛋白表达减少。与对照组相比,BPAF组炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA表达明显上调(P<0.01),与BPAF组相比,BPAF+Exo组炎症因子mRNA表达明显下调(P<0.05)。结论:BPAF(≥25μmol/L)可抑制hESCs增殖,促进细胞凋亡,hUCMSCs-Exo通过PI3K/AKT信号通路抑制BPAF诱导的hESCs氧化损伤和炎症因子表达。 展开更多
关键词 子宫内膜基质细胞 外泌体 内分泌干扰物 磷脂酰肌醇3-激酶 蛋白激酶B 炎症因子
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宫腔粘连分解术后宫腔灌注地塞米松对子宫内膜纤维化及炎症的影响
2
作者 付建华 武梦雪 +5 位作者 林秀英 米旭光 王雪 臧欢欢 张文琦 方艳秋 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第10期2324-2328,共5页
目的:探究宫腔粘连分解术后宫腔灌注地塞米松(DM)治疗对宫腔粘连患者临床症状的改善及对子宫内纤维化和炎症因子的影响。方法:选择2021年3月至2023年3月吉林省人民医院生殖医学中心收治的中重度宫腔粘连患者60例,依据随机数表法分为实... 目的:探究宫腔粘连分解术后宫腔灌注地塞米松(DM)治疗对宫腔粘连患者临床症状的改善及对子宫内纤维化和炎症因子的影响。方法:选择2021年3月至2023年3月吉林省人民医院生殖医学中心收治的中重度宫腔粘连患者60例,依据随机数表法分为实验组和对照组,每组30例。对照组单纯宫腔镜下行粘连分解术,实验组行宫腔粘连分解术后采用DM注射液宫腔灌注治疗。观察两组患者临床症状改善情况。RT-qPCR检测两组内膜容受性相关因子ER、EGFR、LIF、ITGB3、HOXA10、HOXA11、纤维化相关因子TGF-β1、E-cadherin、N-cadherin、Smad、炎症相关因子IL-8、IL-2、CD138 mRNA水平变化。Western blot检测炎症相关蛋白IL-8、IL-2、CD138表达水平变化。结果:与治疗前比较,两组患者子宫内膜厚度、ER、EGFR、LIF、ITGB3、HOXA10、HOXA11及E-cadherin mRNA水平明显升高,TGF-β1、N-cadherin、Smad、IL-8、IL-2、CD138 mRNA水平,IL-8、IL-2、CD138蛋白水平,子宫内膜血流参数PI、RI及粘连情况均有所降低。实验组子宫内膜厚度、ER、EGFR、LIF、ITGB3、HOXA10、HOXA11及E-cadherin mRNA水平明显高于对照组,IL-8、IL-2、TGF-β1、N-cadherin、Smad、CD138 mRNA水平、IL-8、IL-2、CD138蛋白水平、子宫内膜血流参数PI、RI及粘连情况均低于对照组(P<0.05)。结论:宫腔粘连分解术后宫腔灌注DM治疗可改善宫腔粘连、血流参数及子宫内膜容受性,预防宫腔粘连的再次发生,其机制可能与上调E-cadherin表达,下调IL-8、IL-2、CD138、TGF-β1、N-cadherin、Smad表达有关。 展开更多
关键词 地塞米松 子宫内膜纤维化 宫腔灌注 TGF-Β1 子宫内膜容受性
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亚精胺对人子宫内膜基质细胞自噬和炎症细胞因子表达的影响
3
作者 张雪 米旭光 +4 位作者 林秀英 付建华 刘磊 高心月 方艳秋 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1023-1029,共7页
目的:探讨克罗米芬(CC)对子宫内膜基质细胞(hEndoSCs)的损伤作用,并研究亚精胺对受损子宫内膜基质细胞自噬和炎症细胞因子表达的影响。方法:实验分为对照组、亚精胺组、克罗米芬组(CC组)、CC+亚精胺组。MTT法检测hEndoSCs与不同浓度CC... 目的:探讨克罗米芬(CC)对子宫内膜基质细胞(hEndoSCs)的损伤作用,并研究亚精胺对受损子宫内膜基质细胞自噬和炎症细胞因子表达的影响。方法:实验分为对照组、亚精胺组、克罗米芬组(CC组)、CC+亚精胺组。MTT法检测hEndoSCs与不同浓度CC或亚精胺共同孵育24 h后细胞的存活率;流式细胞技术检测4组细胞内活性氧(ROS)含量和细胞凋亡水平。Western blot检测自噬途径相关蛋白ULK1、p-ULK1、LC-3Ⅱ和凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase 3的表达。采用RT-qPCR检测IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA表达量。结果:与对照组相比,CC组细胞存活率下降,细胞凋亡率、ROS含量、Bax、Cleaved-caspase 3表达量升高,Bcl-2表达量降低,自噬相关蛋白p-ULK1、LC-3Ⅱ/Ⅰ水平降低,炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA表达升高(P<0.01)。与对照组相比,亚精胺组细胞的存活率无明显变化(P>0.05)。与CC组相比,CC+亚精胺组细胞存活率显著提高,细胞凋亡率、ROS含量、Bax和Cleaved-caspase 3表达量降低,Bcl-2表达量升高,自噬相关蛋白p-ULK1、LC-3Ⅱ/Ⅰ表达升高,炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA表达降低(P<0.01)。结论:CC能够抑制子宫内膜基质细胞增殖,促进细胞凋亡,提高炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α的转录水平。亚精胺可通过激活细胞自噬,降低CC损伤的子宫内膜基质细胞胞内ROS水平,提高细胞存活率,并抑制炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α表达。 展开更多
关键词 亚精胺 子宫内膜基质细胞 炎症 自噬 细胞凋亡 克罗米芬
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Wnt/β-catenin信号通路抑制剂MSAB对人子宫内膜基质细胞纤维化反应的影响 被引量：1
4
作者 王飞娜 米旭光 +7 位作者 林秀英 付建华 刘磊 于歆悦 臧欢欢 刘霖君 陈士玲 方艳秋 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1266-1274,共9页
目的:探讨Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路抑制剂3-(4-甲基苯基磺酰胺基)苯甲酸甲酯(MSAB)对人子宫内膜基质细胞(HESCs)纤维化反应的影响,为MSAB应用于宫腔粘连(IUA)靶向治疗提供依据。方法:体外培养正常HESCs,分为对照组和转化生... 目的:探讨Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路抑制剂3-(4-甲基苯基磺酰胺基)苯甲酸甲酯(MSAB)对人子宫内膜基质细胞(HESCs)纤维化反应的影响,为MSAB应用于宫腔粘连(IUA)靶向治疗提供依据。方法:体外培养正常HESCs,分为对照组和转化生长因子β1(TGF-β1)组;体外培养IUA患者粘连部分的HESCs,作为IUA组。采用Western blotting法检测TGF-β1作用不同时间(0、 12、 24、 48和60h)后各组细胞中纤维化标志蛋白Ⅰ型胶原α1(COL1A1)蛋白表达水平。采用MTT实验检测各组细胞增殖活性。采用Western blotting法检测对照组和IUA组细胞中细胞COL1A1、间质标志蛋白[N-钙黏蛋白和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)]以及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin表达水平。根据MSAB浓度,将正常HESCs分为0(对照组)、 0.25、 0.50、 0.75和1.00μmol·L^(-1) MSAB组,MTT实验检测各组细胞存活率。MSAB作用后,将正常HESCs分为对照组(正常HESCs)、 TGF-β1组(10μg·L^(-1) TGF-β1诱导正常HESCs 24 h后撤药,更换为完全养基并继续培养24 h)和MSAB组(10μg·L^(-1) TGF-β1诱导正常HESCs 24 h后撤药,更换为含0.75μmol·L^(-1) MSAB的完全培养基并继续培养24 h)。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中上皮-间质转化(EMT)相关转录因子Snail、Slug、Smuc、 ZEB1和ZEB2和COL1A1mRNA表达水平,采用Westernblotting法检测各组细胞中COL1A1蛋白、 N-钙黏蛋白、 α-SMA蛋白、 β-catenin和c-myc蛋白表达水平。结果:与对照组(TGF-β1作用0 h)比较,TGF-β1组作用12、24、48和60 h时HESCs中COL1A1蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,IUA组和TGF-β1组HESCs增殖活性差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,IUA组HESCs中COL1A1、β-连环蛋白、N-钙黏蛋白和α-SMA蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,0.75和1.00μmol·L^(-1) MSAB组细胞存活率降低(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,TGF-β1组细胞中Snail、Slug和COL1A1 mRNA表达水平升高(P<0.05或P<0.01);与TGF-β1组比较,MSAB组细胞中Snail、Slug和COL1A1 mRNA表达水平降低(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,作用24 h时TGF-β1组细胞中COL1A1蛋白、N-钙黏蛋白、 α-SMA蛋白、 β-catenin和c-myc蛋白表达水平升高(P<0.01);与TGF-β1组比较,MSAB组细胞中COL1A1蛋白、 N-钙黏蛋白、 α-SMA蛋白、β-catenin和c-myc蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01)。结结论论:MSAB可抑制体外培养HESCs的纤维化反应,该结果为MASB应用于IUA靶向治疗提供了理论基础。 展开更多
关键词 子宫内膜纤维化 转化生长因子Β1 上皮-间质转化 ASHERMAN综合征 宫腔粘连
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人脐带间充质干细胞培养上清对米非司酮处理的人子宫内膜基质细胞存活、凋亡和子宫内膜容受性的影响 被引量：1
5
作者 武梦雪 陈士玲 +4 位作者 刘艳 米旭光 林秀英 付建华 方艳秋 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期79-87,共9页
目的:探讨人脐带间充质干细胞培养上清(hUCMSCs-Sup)对米非司酮(Ms)处理的人子宫内膜基质细胞(hEndoSCs)增殖、凋亡和子宫内膜容受性的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:体外培养hEndoSCs,分为对照组和40、60、80及100μmol·L-1... 目的:探讨人脐带间充质干细胞培养上清(hUCMSCs-Sup)对米非司酮(Ms)处理的人子宫内膜基质细胞(hEndoSCs)增殖、凋亡和子宫内膜容受性的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:体外培养hEndoSCs,分为对照组和40、60、80及100μmol·L-1 Ms组,MTT法检测各组细胞存活率。hEndoSCs分为对照组、40μmol·L-1 Ms组和60μmol·L-1 Ms组,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平并计算Bcl-2/Bax比值。hUCMSCs-Sup作用后,hEndoSCs分为对照组、Ms组、Ms+hUCMSCs-Sup组和Ms+hUCMSCs-Sup+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组,MTT法检测各组细胞存活率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中微管相关蛋白1轻链3B-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)和微管相关蛋白1轻链3B-Ⅰ(LC3B-Ⅰ)蛋白表达水平并计算LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中子宫内膜容受性标志分子mRNA表达水平。结果:与对照组比较,40、60、80和100μmol·L-1 Ms组细胞存活率明显降低(P<0.05),且具有时间和剂量依赖性。与对照组比较,40和60μmol·L-1 Ms组细胞凋亡率明显升高(P<0.05),细胞中Bcl-2/Bax比值明显降低(P<0.05)。hUCMSCs-Sup作用后,与对照组比较,Ms组细胞存活率和细胞中LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),细胞中同源框基因A10 (HOXA10)、白血病抑制因子(LIF)和整合素亚基β3 (ITGB3) mRNA表达水平明显降低(P<0.05);与Ms组比较,Ms+hUCMSCs-Sup组细胞存活率和细胞中LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值明显升高(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.05),细胞中HOXA10、LIF和ITGb3 mRNA表达水平表达明显升高(P<0.05);与Ms+hUCMSCs-Sup组比较,Ms+hUCMSCs-Sup+3-MA组细胞存活率和细胞中LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值明显降低(P<0.05)。结论:hUCMSCs-Sup可提高Ms处理后hEndoSCs的存活率,降低其凋亡率,提高子宫内膜容受性,其机制可能与hUCMSCs-Sup激活hEndoSCs自噬有关。 展开更多
关键词 脐带间充质干细胞 人子宫内膜基质细胞 细胞凋亡 细胞自噬 子宫内膜容受性
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双酚A对子宫内膜间充质干/基质细胞干性的影响及人脐带间充质干细胞源性上清对细胞损伤的改善作用
6
作者 王爱乔 米旭光 +7 位作者 林秀英 付建华 刘磊 王琳 张文琦 邓玲 陈士玲 方艳秋 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1557-1564,共8页
目的:探讨双酚A(BPA)对子宫内膜间充质干/基质细胞(eMSCs)增殖活性和干性特征的影响,阐明人脐带间充质干细胞源性上清(hUCMSC-Sup)对细胞损伤的改善作用。方法:体外培养eMSCs,以0、200、250、300、350、400μmol·L^(-1)BPA处理。将... 目的:探讨双酚A(BPA)对子宫内膜间充质干/基质细胞(eMSCs)增殖活性和干性特征的影响,阐明人脐带间充质干细胞源性上清(hUCMSC-Sup)对细胞损伤的改善作用。方法:体外培养eMSCs,以0、200、250、300、350、400μmol·L^(-1)BPA处理。将eMSCs分为对照组(仅培养液培养)、BPA组(含200μmol·L^(-1)BPA的等体积培养液培养)、BPA+hUCMSC-Sup组(含200μmol·L^(-1)BPA及50%体积比hUCMSC-Sup的等体积培养液培养)和BPA+CHIR-99021组(含200μmol·L^(-1)BPA及10μmol·L^(-1)CHIR-99021的等体积培养液培养),使用干细胞成球培养液培养eMSCs干细胞球,其余细胞均使用DMEM/F12完全培养基培养。噻唑蓝(MTT)法检测各组eMSCs存活率,球体形成实验检测各组eMSCs干细胞球数和直径,CCK-8法检测各组eMSCs干细胞球中细胞增殖活性,流式细胞术检测各组eMSCs中CD73+细胞百分率,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组eMSCs中性别决定区Y框蛋白2(Sox2)、八聚体结合转录因子4(Oct4)和Nanog mRNA表达水平,Western blotting法检测各组eMSCs中β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达水平。结果:MTT法检测,BPA作用24和48 h,与0μmol·L^(-1)BPA组比较,200、250、300、350和400μmol·L^(-1)BPA组eMSCs存活率均明显降低(P<0.01)。药物作用24 h时,与对照组比较,BPA组eMSCs存活率明显降低(P<0.01);药物作用48 h时,与对照组比较,BPA组eMSCs存活率明显降低(P<0.01);与BPA组比较,BPA+hUCMSC-Sup组eMSCs存活率明显升高(P<0.05)。球体形成实验检测,与培养3 d组比较,培养4和5 d组eMSCs干细胞球数和直径均明显增加(P<0.05或P<0.01);与对照组比较,培养48 h时BPA组eMSCs干细胞球数和直径均明显减少(P<0.05或P<0.01)。CCK-8法检测,处理24和48 h时,与对照组比较,BPA组eMSCs干细胞球中细胞增殖活性均明显降低(P<0.01);与BPA组比较,BPA+hUCMSC-Sup组eMSCs干细胞球中细胞增殖活性均明显升高(P<0.01)。流式细胞术检测,与对照组比较,BPA组eMSCs中CD73+细胞百分率明显降低(P<0.01);与BPA组比较,BPA+hUCMSC-Sup组eMSCs中CD73+细胞百分率明显升高(P<0.01)。RT-qPCR法检测,与对照组比较,BPA组eMSCs中Sox2、Oct4和Nanog mRNA表达水平均明显降低(P<0.01);与BPA组比较,BPA+hUCMSC-Sup组和BPA+CHIR-99021组eMSCs中Sox2、Oct4及Nanog mRNA表达水平均明显升高(P<0.01)。Western blotting法检测,与对照组比较,BPA组eMSCs中β-catenin蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与BPA组比较,BPA+hUCMSC-Sup组和BPA+CHIR-99021组eMSCs中β-catenin蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)。结论:BPA能够抑制eMSCs的干性特征,损伤子宫内膜的自我更新及修复作用,其机制可能与下调细胞中Wnt/β-catenin信号通路活性有关。hUCMSC-Sup可以促进受损eMSCs的增殖,并对BPA诱导的eMSCs干性损伤起到改善作用。 展开更多
关键词 双酚A 子宫内膜间充质干/基质细胞 人脐带间充质干细胞 干细胞球
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APS复发性流产患者血小板的活化及其对内皮细胞的影响 被引量：4
7
作者 马寅芙 刘磊 +5 位作者 王起来 芦小单 孙牧男 林秀英 谭岩 方艳秋 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第19期2396-2399,共4页
目的:探讨APS复发性流产患者血小板活化状态及其对内皮细胞活化的作用。方法:流式细胞术分别检测23例APS患者和31例正常早孕人群血小板CD62P和CD40L的表达水平。洗涤血小板悬液与人脐静脉内皮细胞(HUVECs)共培养6 h,ELISA法分析HUVECs... 目的:探讨APS复发性流产患者血小板活化状态及其对内皮细胞活化的作用。方法:流式细胞术分别检测23例APS患者和31例正常早孕人群血小板CD62P和CD40L的表达水平。洗涤血小板悬液与人脐静脉内皮细胞(HUVECs)共培养6 h,ELISA法分析HUVECs培养上清IL-8的水平,荧光定量PCR法检测HUVECs细胞ICAM-1的mRNA水平。结果:APS组血小板CD62P和CD40L阳性表达百分率为(10.27±3.76)%和(13.26±5.21)%,较正常早孕组显著升高(P<0.05);APS组血小板悬液能显著促进HUVEC细胞ICAM-1基因表达水平和分泌IL-8水平。特异性CD40L单抗可以显著抑制HUVEC细胞表达ICAM-1水平和分泌IL-8水平。结论:APS流产患者外周血血小板活化程度增加,血小板-内皮细胞反应参与APS导致高凝、炎症和流产的病理过程。 展开更多
关键词 复发性流产 血小板 内皮细胞 CD40L CD62P
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