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人骨髓间充质干细胞与成骨细胞共培养诱导破骨细胞方法的建立和鉴定
被引量：
6
1
作者
梅红
李一雷
+4 位作者
王心蕊
张丽红
刘巍
王建民
李玉林
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第5期824-826,共3页
目的:建立人骨髓间充质干细胞(hMSCs)与人成骨细胞共培养体系,为人破骨细胞体外培养提供更完善的方法。方法:采用酶消化法分离流产胎儿头盖骨,获取人成骨细胞,对在体外培养的成骨细胞进行碱性磷酸酶染色(ALP染色);利用Percoll梯度分离...
目的:建立人骨髓间充质干细胞(hMSCs)与人成骨细胞共培养体系,为人破骨细胞体外培养提供更完善的方法。方法:采用酶消化法分离流产胎儿头盖骨,获取人成骨细胞,对在体外培养的成骨细胞进行碱性磷酸酶染色(ALP染色);利用Percoll梯度分离法和贴壁筛选法培养hMSCs,应用流式细胞术检测hMSCs免疫学表型,对其进行鉴定;将获得的成骨细胞和hMSCs在体外共培养作为实验组,单独培养的成骨细胞作为对照组;对诱导后的细胞应用抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP)进行鉴定。结果:体外分离、培养的hMSCs具有独特的细胞免疫学表型,即CD73和CD105阳性,CD34和CD45阴性。hMSCs与成骨细胞共同培养5d后,即可见单个核细胞融合成多核细胞,TRAP染色可见多数细胞胞浆呈酒红色,为诱导成功的破骨细胞。结论:hMSCs与人成骨细胞共同培养能诱导为具有典型的破骨细胞表型的多核细胞。
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关键词
破骨细胞
骨髓间充质干细胞
成骨细胞
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职称材料
整合素α_Vβ_3在细胞外基质调控人黑色素瘤MMP-2表达和活化中的作用
被引量：
2
2
作者
梅红
郭玉芳
+5 位作者
郑贤红
王心蕊
张丽红
朱桂彬
王建民
李一雷
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期182-185,共4页
目的:探讨整合素αVβ3在细胞外基质调控人黑色素瘤细胞基质金属蛋白酶2(matrixmetalloproteinase-2,MMP-2)表达和活化中的作用和地位。方法:选择黑色素瘤细胞系M21及突变型M21-L(M21-L不表达整合素αVβ3),通过观察2个细胞系在同一试...
目的:探讨整合素αVβ3在细胞外基质调控人黑色素瘤细胞基质金属蛋白酶2(matrixmetalloproteinase-2,MMP-2)表达和活化中的作用和地位。方法:选择黑色素瘤细胞系M21及突变型M21-L(M21-L不表达整合素αVβ3),通过观察2个细胞系在同一试验条件下的差异,研究整合素αVβ3在黑色素瘤细胞系M21与M21-L及其在MMP-2表达和活化中的作用;应用酶谱分析法检测黑色素瘤细胞系M21与M21-L,在包被I型胶原(type I collagen,Icol)、纤维黏连蛋白(fibronectin,FN)及ECM胶3种细胞外基质成分后,黑色素瘤细胞系M21与M21-L两者MMP?2表达量及活性的变化;通过RT-PCR方法检测包被后黑色素瘤细胞系M21与M21-L两者MT1-MMP mRNA表达水平的变化;通过Boyden小室膜侵袭实验观察黑色素瘤细胞系M21和M21-L细胞侵袭性差异。结果:培养于三维聚合Ⅰ型胶原、纤维黏连蛋白及ECM胶的M21细胞酶谱分析结果中出现了62 000的MMP-2的活化带,其膜型基质金属蛋白酶1(membrane?typematrixmetalloproteinase-1,MT1-MMP)mRNA表达均较没有包被3种细胞外基质的空白对照组增高;而M21-L在包被细胞外基质成分前后未出现MMP-2的活化,其MT1-MMP mRNA表达水平变化无统计学意义;Boyden小室检测表明,M21细胞侵袭力明显高于M21-L细胞。结论:整合素αVβ3参与了人黑色素瘤细胞M21的MMP-2表达和活化过程,是细胞外基质成分调控黑色素瘤细胞MMP-2表达和活化的必要条件。
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关键词
受体
玻连蛋白
细胞外基质
明胶酶A
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职称材料
题名
人骨髓间充质干细胞与成骨细胞共培养诱导破骨细胞方法的建立和鉴定
被引量：
6
1
作者
梅红
李一雷
王心蕊
张丽红
刘巍
王建民
李玉林
机构
吉林
大学基础医学院病理生物学教育部重点实验室
吉林
大学人兽共患病研究所人兽共患病教育部重点实验室
吉林省中西医结合医院骨科
出处
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第5期824-826,共3页
基金
国家863重大专项资助课题(2004AA205020)
文摘
目的:建立人骨髓间充质干细胞(hMSCs)与人成骨细胞共培养体系,为人破骨细胞体外培养提供更完善的方法。方法:采用酶消化法分离流产胎儿头盖骨,获取人成骨细胞,对在体外培养的成骨细胞进行碱性磷酸酶染色(ALP染色);利用Percoll梯度分离法和贴壁筛选法培养hMSCs,应用流式细胞术检测hMSCs免疫学表型,对其进行鉴定;将获得的成骨细胞和hMSCs在体外共培养作为实验组,单独培养的成骨细胞作为对照组;对诱导后的细胞应用抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP)进行鉴定。结果:体外分离、培养的hMSCs具有独特的细胞免疫学表型,即CD73和CD105阳性,CD34和CD45阴性。hMSCs与成骨细胞共同培养5d后,即可见单个核细胞融合成多核细胞,TRAP染色可见多数细胞胞浆呈酒红色,为诱导成功的破骨细胞。结论:hMSCs与人成骨细胞共同培养能诱导为具有典型的破骨细胞表型的多核细胞。
关键词
破骨细胞
骨髓间充质干细胞
成骨细胞
Keywords
osteoclasts bone marrow mesenchymal stem cells
osteoblasts
分类号
Q813.1 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
整合素α_Vβ_3在细胞外基质调控人黑色素瘤MMP-2表达和活化中的作用
被引量：
2
2
作者
梅红
郭玉芳
郑贤红
王心蕊
张丽红
朱桂彬
王建民
李一雷
机构
吉林
大学基础医学院病理生物学教育部重点实验室
陕
西医
学高等专科学校病理学教研室
吉林
大学基础医学院病原生物学教研室
吉林省中西医结合医院骨科
出处
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期182-185,共4页
基金
国家自然科学基金资助课题(30370548)
文摘
目的:探讨整合素αVβ3在细胞外基质调控人黑色素瘤细胞基质金属蛋白酶2(matrixmetalloproteinase-2,MMP-2)表达和活化中的作用和地位。方法:选择黑色素瘤细胞系M21及突变型M21-L(M21-L不表达整合素αVβ3),通过观察2个细胞系在同一试验条件下的差异,研究整合素αVβ3在黑色素瘤细胞系M21与M21-L及其在MMP-2表达和活化中的作用;应用酶谱分析法检测黑色素瘤细胞系M21与M21-L,在包被I型胶原(type I collagen,Icol)、纤维黏连蛋白(fibronectin,FN)及ECM胶3种细胞外基质成分后,黑色素瘤细胞系M21与M21-L两者MMP?2表达量及活性的变化;通过RT-PCR方法检测包被后黑色素瘤细胞系M21与M21-L两者MT1-MMP mRNA表达水平的变化;通过Boyden小室膜侵袭实验观察黑色素瘤细胞系M21和M21-L细胞侵袭性差异。结果:培养于三维聚合Ⅰ型胶原、纤维黏连蛋白及ECM胶的M21细胞酶谱分析结果中出现了62 000的MMP-2的活化带,其膜型基质金属蛋白酶1(membrane?typematrixmetalloproteinase-1,MT1-MMP)mRNA表达均较没有包被3种细胞外基质的空白对照组增高;而M21-L在包被细胞外基质成分前后未出现MMP-2的活化,其MT1-MMP mRNA表达水平变化无统计学意义;Boyden小室检测表明,M21细胞侵袭力明显高于M21-L细胞。结论:整合素αVβ3参与了人黑色素瘤细胞M21的MMP-2表达和活化过程,是细胞外基质成分调控黑色素瘤细胞MMP-2表达和活化的必要条件。
关键词
受体
玻连蛋白
细胞外基质
明胶酶A
Keywords
receptors, vitronectin
extracellular matrix
gelatinase A
分类号
R363 [医药卫生—病理学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人骨髓间充质干细胞与成骨细胞共培养诱导破骨细胞方法的建立和鉴定
梅红
李一雷
王心蕊
张丽红
刘巍
王建民
李玉林
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007
6
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
整合素α_Vβ_3在细胞外基质调控人黑色素瘤MMP-2表达和活化中的作用
梅红
郭玉芳
郑贤红
王心蕊
张丽红
朱桂彬
王建民
李一雷
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006
2
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