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紫花苜蓿组织培养体系的建立及其遗传转化 被引量：7
1
作者 周晓馥 吕杰 +2 位作者 苗璐 高峰 徐洪伟 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期63-68,共6页
为建立高效的农杆菌介导的紫花苜蓿的遗传转化体系,以紫花苜蓿无菌苗叶片作为外植体,用8种含有不同激素浓度梯度的培养基对其进行愈伤组织及不定芽的诱导,结果表明,M7培养基(MS+1 mg/L 2,4-D+2 mg/L CH+0.25 mg/L KT+2mg/L琼脂)的愈伤... 为建立高效的农杆菌介导的紫花苜蓿的遗传转化体系,以紫花苜蓿无菌苗叶片作为外植体,用8种含有不同激素浓度梯度的培养基对其进行愈伤组织及不定芽的诱导,结果表明,M7培养基(MS+1 mg/L 2,4-D+2 mg/L CH+0.25 mg/L KT+2mg/L琼脂)的愈伤组织诱导率最高,可达100%;继代表现最好,为胚性愈伤组织;同时,继续培养后可直接分化出不定芽,分化率达100%。结果表明,最适宜条件分别为卡那霉素(Kan)筛选浓度为75 mg/L;农杆菌菌液OD_(600)值为0.45-0.6之间。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 组织培养 高频再生遗传转化农杆菌 卡那霉素OD600值
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银中杨叶片离体再生体系的建立及Gt5GT7基因的遗传转化 被引量：1
2
作者 徐洪伟 高峰 +2 位作者 杨伟新 王晶 周晓馥 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第13期144-146,I0001,共4页
以银中杨幼嫩枝条为外植体,探究不同预培养方式、激素配比对其叶片离体再生体系的影响.结果表明,枝条在MS营养液中预培养3d为最优方式;不定芽诱导最佳培养基为MS＋TDZ 0.1 mg/L＋NAA 0.02 mg/L,叶片可不经历愈伤组织直接形成丛生芽,最... 以银中杨幼嫩枝条为外植体,探究不同预培养方式、激素配比对其叶片离体再生体系的影响.结果表明,枝条在MS营养液中预培养3d为最优方式;不定芽诱导最佳培养基为MS＋TDZ 0.1 mg/L＋NAA 0.02 mg/L,叶片可不经历愈伤组织直接形成丛生芽,最适生根培养基为1/2 MS＋NAA 0.05 mg/L＋IBA 0.01 mg/L＋活性炭0.6 g/L.利用发根农杆菌介导法,建立Gt5GT7基因的银中杨叶片遗传转化体系,叶片GUS染色结果初步证明,Gt5GT7基因成功整合入银中杨叶片,且最适宜侵染的菌液A600值为0.45～0.6. 展开更多
关键词 银中杨 预培养 激素配比 离体再生 Gt5GT7 遗传转化
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紫花苜蓿的抗菌肽基因Rev4遗传转化
3
作者 武慧 宋明霞 +2 位作者 宁思淇 武翠玲 周晓馥 《江苏农业科学》 北大核心 2017年第7期44-46,共3页
抗菌肽是机体先天免疫的重要组成成分,是许多生物体抵抗外来致病菌侵袭的第1道屏障。Indolicidin是一个13氨基酸残基肽,从牛的嗜中性粒细胞的胞浆小颗粒分离而来,具有广谱抗菌性,Rev4是其人工设计的反向序列。利用经典叶盘法,以根癌农杆... 抗菌肽是机体先天免疫的重要组成成分,是许多生物体抵抗外来致病菌侵袭的第1道屏障。Indolicidin是一个13氨基酸残基肽,从牛的嗜中性粒细胞的胞浆小颗粒分离而来,具有广谱抗菌性,Rev4是其人工设计的反向序列。利用经典叶盘法,以根癌农杆菌A.GV3850介导紫花苜蓿遗传转化,GUS瞬时表达检测转化体系建立成功;压力筛选后叶片基因组DNA的PCR成功检测到抗菌肽基因条带,PCR产物回收测序得到13株转化紫花苜蓿。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 抗菌肽 遗传转化
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室旁核miR-9-5p通过靶向KCNN3介导T2D大鼠交感神经过度兴奋 被引量：2
4
作者 徐佳琪 安美玲 +6 位作者 袁月 郝翊帆 王秀文 张敏 未晓巍 李华 王仁俊 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期2148-2158,共11页
目的:探究下丘脑室旁核(paraventricular nucleus,PVN)内微小RNA-9-5p(microRNA-9-5p,miR-9-5p)通过靶向小电导钙激活钾通道3(small-conductance calcium-activated potassium channel 3,SK3)蛋白的编码基因KCNN3(potassium intermediat... 目的:探究下丘脑室旁核(paraventricular nucleus,PVN)内微小RNA-9-5p(microRNA-9-5p,miR-9-5p)通过靶向小电导钙激活钾通道3(small-conductance calcium-activated potassium channel 3,SK3)蛋白的编码基因KCNN3(potassium intermediate/small conductance calcium-activated channel,subfamily N,member 3)介导2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2D)大鼠交感神经过度兴奋的作用机制。方法:高脂饮食配合腹腔注射链脲佐菌素制备T2D大鼠模型;real-time PCR检测miR-9-5p和KCNN3 mRNA的水平;TargetScan软件预测miR-9-5p与KCNN3的靶向关系;PVN内过表达或敲减miR-9-5p和KCNN3基因,观察血糖及交感驱动指标的变化;免疫荧光和Western blot检测FosB和SK3的蛋白表达量;细胞转染和双萤光素酶报告基因实验验证miR-9-5p与KCNN3的靶向关系。结果:与糖尿病对照(diabetes control,DC)组相比,糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠的血糖和甘油三酯水平升高,交感神经活动增强,PVN内miR-9-5p上调,而SK3蛋白下调。PVN内微量注射miR-9-5p致大鼠交感驱动指标、血糖水平及FosB阳性神经元数量升高,SK3蛋白下调;而PVN内过表达KCNN3则产生相反的作用。与DC组相比,PVN内过表达或敲减miR-9-5p和KCNN3基因对DM大鼠的影响更显著。细胞转染和双萤光素酶报告基因实验证实miR-9-5p靶向调控KCNN3基因。结论:T2D大鼠PVN内上调的miR-9-5p可能通过靶向抑制SK3蛋白表达而介导交感神经兴奋亢进。 展开更多
关键词 2型糖尿病 交感神经兴奋 室旁核 微小RNA-9-5p 小电导钙激活钾通道
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