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吡柔比星对大鼠心肌细胞的损伤作用及其模型建立 被引量：2
1
作者 李琪 徐瑞 +2 位作者 李藤藤 江一川 李敏 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期948-954,I0002,共8页
目的:探讨吡柔比星(THP)对大鼠心肌细胞的损伤作用,阐明THP诱导心肌细胞损伤模型的建立方法。方法:常规体外培养大鼠心肌细胞H9C2,将细胞分为空白对照组和不同浓度(1×10^-6 mol·L^-1、1×10^-5 mol·L^-1、1×10^... 目的:探讨吡柔比星(THP)对大鼠心肌细胞的损伤作用,阐明THP诱导心肌细胞损伤模型的建立方法。方法:常规体外培养大鼠心肌细胞H9C2,将细胞分为空白对照组和不同浓度(1×10^-6 mol·L^-1、1×10^-5 mol·L^-1、1×10^-4 mol·L^-1、1×10^-3 mol·L^-1和1μmo·l L^-1、3μmol·L^-1、5μmol·L^-1、7μmol·L^-1、9μmol·L^-1和10μmol·L^-1)THP组,采用不同浓度THP处理细胞,并在6、12、24、36和48 h时间点采用CCK-8法检测各组细胞存活率,DCFH-DA活性氧(ROS)探针法检测细胞中ROS水平,硫代巴比妥酸比色法检测各组细胞中丙二醛(MDA)水平,黄嘌呤氧化法检测各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性,二硝基苯肼显色法检测各组细胞中乳酸脱氢酶(LDH)活性,TUNEL染色法检测各组细胞凋亡率,qRT-PCR法检测各组细胞中B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)和半胱氨酸蛋白酶9(Caspase-9)mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中Bax、Bcl-2、活化型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)和活化型Caspase-9(Cleaved Caspase-9)蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,1、5和9μmol·L^-1 THP组H9C2细胞存活率降低(P<0.05或P<0.01),细胞中ROS和MDA水平及LDH活性升高(P<0.05或P<0.01),SOD活性降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞中Bax、Caspase-3和Caspase-9 mRNA表达水平升高(P<0.05或P<0.01),Bcl-2 mRNA表达水平降低(P<0.05),Bax、Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.01)。结论:THP对大鼠心肌细胞具有损伤作用,其中5μmol·L^-1是THP诱导H9C2细胞损伤模型的最佳造模浓度。 展开更多
关键词 吡柔比星 心肌细胞 疾病模型 动物 细胞凋亡 细胞损伤
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D-半乳糖诱导衰老相关认知功能障碍小鼠模型制备方法的优化
2
作者 孙菡 孙伟伦 +3 位作者 王荟沣 马文丽 徐华丽 付雯雯 《吉林大学学报(医学版)》 2025年第6期1464-1474,共11页
目的:筛选适宜的D-半乳糖(D-gal)浓度和造模周期,建立其诱导的小鼠衰老相关认知功能障碍模型,并进行综合评价。方法:50只C57BL/6J小鼠随机分为对照组和100、200、400及800 mg·kg^(-1)D-gal组,每组10只。各浓度D-gal组小鼠每日皮下... 目的:筛选适宜的D-半乳糖(D-gal)浓度和造模周期,建立其诱导的小鼠衰老相关认知功能障碍模型,并进行综合评价。方法:50只C57BL/6J小鼠随机分为对照组和100、200、400及800 mg·kg^(-1)D-gal组,每组10只。各浓度D-gal组小鼠每日皮下注射相应浓度D-gal,每日1次,对照组小鼠注射等体积生理盐水。监测各组小鼠体质量及饮水量,采用前肢抓力值测试和爬杆运动能力实验中小鼠爬杆时间评估各组小鼠运动协调能力,通过新物体识别实验、Y迷宫实验及Morris水迷宫实验评价各组小鼠认知功能,HE染色和尼氏染色观察2组小鼠脑组织病理形态表现,免疫组织化学法检测各组小鼠脑组织中β-半乳糖苷酶(β-gal)蛋白表达情况,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组小鼠海马组织中白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-18和IL-4 mRNA表达水平,Western blotting法检测2组小鼠海马组织中β-gal、 p53和p16蛋白表达水平。结果:对照组和各浓度D-gal组小鼠的体质量增长趋势一致,差异无统计学意义(P>0.05),饮水量比较差异无统计学意义(P>0.05)。皮下注射D-gal第8周后,与对照组比较,200和400 mg·kg^(-1)D-gal组小鼠前肢抓力值均明显降低(P<0.05或P<0.01),200 mg·kg^(-1)D-gal组小鼠爬杆时间明显延长(P<0.05),200和400 mg·kg^(-1)D-gal组小鼠识别指数明显降低(P<0.01),100、200、400和800 mg·kg^(-1)D-gal组小鼠自发交替率明显降低(P<0.05或P<0.01),逃避潜伏期明显增加(P<0.05)。空间探索实验,与对照组比较,200 mg·kg^(-1)D-gal组小鼠逃避潜伏期明显增加(P<0.05)。HE染色和尼氏染色观察,与对照组比较,200 mg·kg^(-1)D-gal组小鼠海马组织神经元排列紊乱、核浓染和核固缩明显、形态结构异常,尼氏染色阳性细胞数量明显减少。免疫组织化学法检测,与对照组比较,200 mg·kg^(-1)D-gal组小鼠海马组织CA1区、CA3区和皮层(Cortex)区β-gal蛋白呈强阳性表达。RT-qPCR法检测,与对照组比较,200 mg·kg^(-1)D-gal组小鼠海马组织中IL-1β、 IL-18和TNF-α mRNA表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01),IL-4 mRNA表达水平明显降低(P<0.01)。Western blotting法检测,与对照组比较,200 mg·kg^(-1)D-gal组小鼠海马组织中β-gal、p53和p16蛋白表达水平均明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:每日给小鼠皮下注射200 mg·kg^(-1)D-gal、持续8周可制备衰老相关认知功能障碍小鼠模型。 展开更多
关键词 衰老 D-半乳糖 认知功能障碍 疾病模型 小鼠 β-半乳糖苷酶
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