N-丁基-9 H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-2-甲酰胺通过NLRP3/Caspase-1抑制巨噬细胞泡沫化及焦亡作用

1

作者 舒志云 呼延子旭 +4 位作者 张文晴 谢世顺 成鸿源 徐国兴 李相军 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1035-1041,共7页

目的设计并合成了嘧啶并吲哚类衍生物N-丁基-9 H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-2-甲酰胺(BFPI),探讨其是否通过NLRP3/Caspase-1通路抑制巨噬细胞焦亡和泡沫化作用。方法以2,4,6-三乙氧羰基-1,3,5-三嗪和2-氨基吲哚为起始原料合成BFPI,并通过1H NMR... 目的设计并合成了嘧啶并吲哚类衍生物N-丁基-9 H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-2-甲酰胺(BFPI),探讨其是否通过NLRP3/Caspase-1通路抑制巨噬细胞焦亡和泡沫化作用。方法以2,4,6-三乙氧羰基-1,3,5-三嗪和2-氨基吲哚为起始原料合成BFPI,并通过1H NMR、13 C NMR、ESI-MS对其结构进行表征。将体外培养的小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7分为空白组、模型组(PA)组和治疗组(BFPI)组,各组细胞用对应培养液处理24 h后,用MTT法检测其增殖活力,油红O染色检测细胞内脂滴形成情况,并用Western blot和RT-qPCR检测NLRP3、Caspase-1和MCP-1 mRNA和蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组细胞增殖活力明显下降,脂滴形成量明显增加,与模型组比较,治疗组细胞增殖活力明显增加,脂滴形成量明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01);与空白组比较,模型组细胞NLRP3、Caspase-1和MCP-1的mRNA和蛋白表达水平均明显增加,与模型组比较,治疗组细胞上述指标表达水平均明显下降,差异有统计学意义(P<0.01)。结论BFPI可通过抑制巨噬细胞NLRP3、Caspase-1和MCP-1的表达进而促进其增殖并抑制脂质吞噬能力,有助于延缓动脉粥化时巨噬细胞来源的泡沫细胞形成。 展开更多

关键词 N-丁基-9 H-嘧啶并[4 5-b]吲哚-2-甲酰胺 NLRP3 动脉粥样硬化 巨噬细胞 细胞泡沫化 细胞焦亡

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五味子提取物对糖尿病大鼠肾脏组织中基质金属蛋白酶表达的影响及其肾脏保护作用 被引量：22

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作者 杨江辉 孙成博 +5 位作者 耿嘉男 李秋杰 朱尧 陈兴兴 陈安天 于晓艳 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期512-517,I0001,共7页

目的:探讨五味子提取物对糖尿病大鼠肾脏组织中基质金属蛋白酶(MMPs)表达的影响,从基质降解角度阐明其肾脏保护作用。方法:采用链脲佐菌素(STZ)复制糖尿病大鼠模型,45只糖尿病模型大鼠随机分为模型组、五味子组和贝那普利组,每组15只;另... 目的:探讨五味子提取物对糖尿病大鼠肾脏组织中基质金属蛋白酶(MMPs)表达的影响,从基质降解角度阐明其肾脏保护作用。方法:采用链脲佐菌素(STZ)复制糖尿病大鼠模型,45只糖尿病模型大鼠随机分为模型组、五味子组和贝那普利组,每组15只;另取15只大鼠作为正常对照组。给药12周后检测各组大鼠常规血、尿生化指标及组织学改变;检测各组大鼠血清和肾组织匀浆中血糖(BG)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总胆固醇(T-CHO)、甘油三酯(TG)水平和尿白蛋白、尿总蛋白排泄率;免疫组织化学法检测大鼠肾组织中纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)、基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)的表达量;酶谱法检测大鼠肾组织中MMP-2活性。结果:与模型组比较,五味子组大鼠肾小球系膜聚集等现象明显减轻,尿白蛋白排泄率、LDL-C及血清丙二醛(MDA)水平均明显降低(P<0.05),肾组织中过氧化氢酶(CAT)(P<0.01)和超氧化物歧化酶(SOD)活性升高(P<0.05),MDA水平降低(P<0.05)。免疫组织化学检测,与模型组比较,五味子组大鼠肾组织中FN、ColⅣ和TIMP-2表达量明显降低。酶谱法检测,与模型组比较,五味子组和贝那普利组大鼠肾组织中MMP-2活性明显升高(P<0.05)。结论:五味子提取物对STZ导致的实验性糖尿病大鼠的肾脏有保护作用,其机制可能与抑制氧化应激、提高MMP-2活性、抑制TIMP-2表达从而改善基质降解有关。 展开更多

关键词 五味子提取物 糖尿病肾病 基质金属蛋白酶 基质金属蛋白酶抑制剂

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人皮肤成纤维细胞的体外分离、培养及鉴定 被引量：12

3

作者 赵娟 石艳 +4 位作者 孙波 李相军 罗继巡 高海成 任立群 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期899-902,F0003,共5页

目的:探索和建立一种新的、适宜于人皮肤成纤维细胞(Fbs)的体外分离、培养及鉴定方法。方法:采用冷胰蛋白酶和胶原酶联合消化法对人皮肤Fbs的进行体外培养,通过生物化学、免疫细胞化学及ELISA实验技术,对人皮肤Fbs的活力检测、生长曲线... 目的:探索和建立一种新的、适宜于人皮肤成纤维细胞(Fbs)的体外分离、培养及鉴定方法。方法:采用冷胰蛋白酶和胶原酶联合消化法对人皮肤Fbs的进行体外培养,通过生物化学、免疫细胞化学及ELISA实验技术,对人皮肤Fbs的活力检测、生长曲线、羟脯氨酸(HYP)含量及Ⅰ型胶原含量指标进行研究。结果:人皮肤Fbs原代培养时间较大鼠长。人皮肤Fbs冻存复苏后所得生长曲线与冻存前所得曲线基本相似;人皮肤Fbs培养液中,3～5d的HYP含量与1d相比有显著增加(P<0.01);2～6dⅠ型胶原含量与1d相比有显著增加(P<0.01)。结论:培养的人皮肤Fbs增殖能力强、适应性强、易培养且性状稳定,可为人类凹陷性瘢痕修复和美容除皱提供可靠的细胞来源。 展开更多

关键词 皮肤 成纤维细胞 羟脯氨酸 Ⅰ型胶原

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银杏叶提取物各组分对高糖培养下系膜细胞增殖及细胞外基质积聚的抑制作用 被引量：10

4

作者 苏青 孙成博 +3 位作者 孙波 姚云鹏 郭梦环 于晓艳 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期779-784,共6页

目的:探讨银杏叶提取物(GBE)不同组分对高糖培养下系膜细胞增殖及细胞外基质(ECM)积聚的作用,阐明其作用机制。方法:高糖培养的系膜细胞分别给予GBE、总黄酮、总内酯、总黄酮水解物、槲皮素、山奈酚、异鼠李素、银杏内脂A、银杏内脂B和... 目的:探讨银杏叶提取物(GBE)不同组分对高糖培养下系膜细胞增殖及细胞外基质(ECM)积聚的作用,阐明其作用机制。方法:高糖培养的系膜细胞分别给予GBE、总黄酮、总内酯、总黄酮水解物、槲皮素、山奈酚、异鼠李素、银杏内脂A、银杏内脂B和银杏内脂C,药物浓度分别为0(高糖对照组)、3.125、6.250、12.500、25.000和50.000mg·L-1,同时设低糖对照组,MTT法检测各组系膜细胞增殖情况。高糖培养的系膜细胞分别给予GBE、总黄酮、总内酯、银杏内脂A、银杏内脂B和银杏内脂C,药物浓度分别为0(高糖对照组)、0.05、0.50、5.00和50.00mg·L-1,同时设低糖对照组,ELISA法检测条件培养基中Ⅳ型胶原(ColⅣ)和纤维连接蛋白(FN)水平。结果:MTT检测,与高糖对照组比较,50.000mg·L-1 GBE组细胞增殖活性明显降低(P<0.01),25.000和50.000 mg·L-1总黄酮组细胞增殖活性明显降低(P<0.05或P<0.01),总黄酮水解物、槲皮素、山奈酚和异鼠李素各浓度组细胞增殖活性均明显降低(P<0.01),50.000mg·L-1内脂C组细胞增殖活性明显降低(P<0.05);其他各组细胞增殖活性与高糖对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。ELISA检测,与高糖对照组比较,5.00和50.00mg·L-1 GBE组ColⅣ和FN水平均明显降低(P<0.01),0.50mg·L-1 GBE组FN水平明显降低(P<0.05),0.50、5.00和50.00mg·L-1总黄酮组ColⅣ水平降低(P<0.05或P<0.01),50.00mg·L-1总内脂组ColⅣ和FN水平降低(P<0.05或P<0.01),50.00mg·L-1内脂C组FN水平降低(P<0.05)。结论:GBE在高浓度时(50.000mg·L-1)抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖而低浓度(自0.500mg·L-1起)时抑制系膜细胞ECM积聚;GBE中总黄酮在抑制细胞增殖和ECM积聚方面起主要作用,总内脂无明显效果;苷元抑制系膜细胞增殖的作用远远强于糖苷。 展开更多

关键词 银杏叶提取物 糖尿病肾病 银杏总黄酮 银杏内酯 苷元 糖苷

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银丹心脑通软胶囊对大鼠急性心肌梗死后心肌组织中骨桥蛋白表达的影响及其心肌保护作用机制 被引量：9

5

作者 王树东 丁丽娟 +2 位作者 耿嘉男 李特 刘全 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期564-568,I0003,共6页

目的:探讨银丹心脑通软胶囊对大鼠急性心肌梗死(AMI)后心肌组织中骨桥蛋白(OPN)表达的影响,阐明银丹心脑通软胶囊改善大鼠AMI的作用机制。方法:将90只Wistar大鼠结扎冠脉前降支建立AMI模型,术后存活动物随机分为模型组、银丹心脑通软胶... 目的:探讨银丹心脑通软胶囊对大鼠急性心肌梗死(AMI)后心肌组织中骨桥蛋白(OPN)表达的影响,阐明银丹心脑通软胶囊改善大鼠AMI的作用机制。方法:将90只Wistar大鼠结扎冠脉前降支建立AMI模型,术后存活动物随机分为模型组、银丹心脑通软胶囊小剂量组(银丹心脑通软胶囊0.8g·kg-1·d-1)、银丹心脑通软胶囊大剂量组(银丹心脑通软胶囊1.6g·kg-1·d-1)、阳性药卡托普利组(卡托普利5mg·kg-1·d-1),每组12只,同时设假手术组(只穿线不结扎)(n=10),连续给药4周。HE和Masson染色观察各组大鼠心肌组织学表现;脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)原位检测凋亡细胞的DNA碎片,计算凋亡指数(AI);RT-PCR法检测非梗死区心肌中OPN mRNA表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠AI明显升高(P<0.05);与模型组比较,各给药组大鼠AI明显降低(P<0.01);与卡托普利组比较,银丹心脑通大剂量组大鼠AI明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),银丹心脑通小剂量组大鼠AI无明显改变(P>0.05)。RT-PCR检测,与假手术组比较,模型组大鼠左心室非梗死区心肌组织中OPN mRNA表达水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠左心室非梗死区心肌组织中OPN mRNA表达水平明显降低(P<0.01);与卡托普利组比较,银丹心脑通大剂量组大鼠左心室非梗死区心肌组织中OPN mRNA表达水平明显降低(P<0.05),而银丹心脑通小剂量组OPN mRNA表达水平无明显改变(P>0.05)。结论:银丹心脑通软胶囊能够显著改善心肌梗死后大鼠心肌组织细胞凋亡,降低左心室非梗死区OPN mRNA表达水平,提示银丹心脑通软胶囊对大鼠AMI的心肌保护作用可能与降低OPN mRNA表达有关。 展开更多

关键词 银丹心脑通软胶囊 急性心肌梗死 细胞凋亡 骨桥蛋白

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蒙药乳腺-Ⅰ号对乳腺增生大鼠抗氧化能力、乳腺组织雌激素受体和孕激素受体表达的影响 被引量：11

6

作者 王忠超 李敏 +6 位作者 张彬 任立群 额都 张秋丽 秀兰 刘一飞 刘蓝涛 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1052-1057,F0002,共7页

目的:观察蒙药乳腺-Ⅰ(M-Ⅰ)号对乳腺增生大鼠体内抗氧化能力及乳腺组织雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)表达的影响,为药物的临床应用提供实验依据。方法:48只雌性未孕Wistar大鼠,随机选出8只作为正常对照组,其余动物每天肌肉注射苯甲... 目的:观察蒙药乳腺-Ⅰ(M-Ⅰ)号对乳腺增生大鼠体内抗氧化能力及乳腺组织雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)表达的影响,为药物的临床应用提供实验依据。方法:48只雌性未孕Wistar大鼠,随机选出8只作为正常对照组,其余动物每天肌肉注射苯甲酸雌二醇(0.5mg·kg-1)1次,连续25d,随后每天肌肉注射黄体酮(4mg·kg-1)1次,连续5d,复制大鼠乳腺增生模型,同时正常对照组大鼠肌肉注射生理盐水。模型复制成功后,随机分为5组,模型对照组大鼠给予生理盐水灌胃;阳性药对照组大鼠给予三苯氧胺1.8mg·kg-1灌胃;M-Ⅰ号低剂量组、中剂量组和高剂量组大鼠分别给予M-Ⅰ号0.5、1.0和3.0g·kg-1灌胃。给药结束后,检测各组大鼠乳头高度,观察大鼠乳腺组织病理学特征,检测大鼠血清及乳腺组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,Western blotting法检测各组大鼠乳腺组织ER和PR的表达水平。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠乳头高度仍显著增高(P<0.01),光镜下观察乳腺组织病理改变明显,血清SOD和GSH-Px水平均显著降低(P<0.05),MDA水平显著升高(P<0.05),乳腺组织ER、PR的蛋白表达量显著增加(P<0.01)。与模型对照组比较,M-Ⅰ号各剂量组大鼠乳头高度明显偏小(P<0.05或P<0.01);乳腺组织病理学改变明显减轻,M-Ⅰ号高剂量组大鼠乳腺组织结构接近正常对照组;血清及乳腺组织中SOD和GSH-Px水平较模型对照组均显著升高(P<0.05或P<0.01),MDA水平显著降低(P<0.01或P<0.05),乳腺组织中ER和PR的蛋白表达水平亦显著降低(P<0.01)。结论:M-Ⅰ号对乳腺增生大鼠有较好的治疗作用,其治疗机制可能与增强乳腺增生大鼠体内抗氧化能力、降低乳腺组织中ER和PR表达水平有关。 展开更多

关键词 大鼠 Wistar 蒙药乳腺-Ⅰ号 雌激素 乳腺增生 雌激素受体

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血管紧张素Ⅰ转换酶基因多态性与2型糖尿病肾病的关联性 被引量：10

7

作者 阚瑛 赵焱 +1 位作者 阚珣 李才 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期352-355,共4页

目的:探讨血管紧张素I转换酶(ACE)基因多态性与2型糖尿病肾病的关系。方法:2型糖尿病并发肾病组(DN)患者80例,单纯2型糖尿病组(DM)患者60例,60名健康人作对照(正常对照组),抽提每人外周血中白细胞基因组DNA,采用聚合酶链反应(PCR)扩增AC... 目的:探讨血管紧张素I转换酶(ACE)基因多态性与2型糖尿病肾病的关系。方法:2型糖尿病并发肾病组(DN)患者80例,单纯2型糖尿病组(DM)患者60例,60名健康人作对照(正常对照组),抽提每人外周血中白细胞基因组DNA,采用聚合酶链反应(PCR)扩增ACE基因第16内含子的一个287bp Alu的插入/缺失(I/D)基因片段,进行1.5%的琼脂糖凝胶电泳,并在紫外线灯下观察荧光带并确认每例的基因型。各组间的基因型频数分布应用Hardy-Weinberg遗传平衡定律检验和χ2检验。等位基因频数分布应用χ2检验。结果:ACE基因的3种基因型Ⅱ、ID和DD的频数分布符合Hardy-Weinberg平衡定律;各组间ACE基因的基因型频数分布比较差异无显著性(χ2=1.10,P>0.05);3组的等位基因I和D的频数分布比较差异无显著性(χ2=0.84,P>0.05)。结论:ACE基因多态性与2型糖尿病肾病的发病无关联性。 展开更多

关键词 ACE基因 基因多态性 糖尿病肾病 糖尿病 2型

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人激肽释放酶10在卵巢癌组织中的表达及其意义 被引量：6

8

作者 张晓霞 王影 +3 位作者 黄蓉 李相军 任立群 李荷莲 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期661-664,共4页

目的:研究人激肽释放酶10(hK10)在卵巢癌组织中的表达,探讨hK10基因在卵巢癌早期诊断研究中的意义。方法:①应用4097靶基因点基因芯片对5例卵巢浆液性囊腺癌及5例正常卵巢组织进行基因表达谱分析,筛查差异表达基因。②应用RT-PCR检测32... 目的:研究人激肽释放酶10(hK10)在卵巢癌组织中的表达,探讨hK10基因在卵巢癌早期诊断研究中的意义。方法:①应用4097靶基因点基因芯片对5例卵巢浆液性囊腺癌及5例正常卵巢组织进行基因表达谱分析,筛查差异表达基因。②应用RT-PCR检测32例卵巢浆液性囊腺癌组织、20例卵巢浆液性囊腺瘤组织及16例正常卵巢组织中hK10表达并对比分析。结果:①基因芯片筛查出差异表达基因58个,其中表达增高(上调趋势)基因30个,表达降低(下调趋势)基因28个,hK10基因为表达上调基因(Cy5/Cy3=3.031)。②hK10基因在正常卵巢及卵巢瘤组织中有弱表达(0.023±0015和0.023±0.045),在卵巢癌组织中表达明显增强(0.106±0.045),hK10基因在卵巢癌组的表达明显高于正常卵巢组及卵巢瘤组(P<0.01)。结论:基因芯片能够用于筛查卵巢癌差异表达基因;hK10基因在卵巢癌组织表达明显增强,有望成为卵巢癌的肿瘤标志物。 展开更多

关键词 卵巢肿瘤 人激肽释放酶10 基因芯片 逆转录聚合酶链反应

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尾加压素Ⅱ和转化生长因子β1在糖尿病大鼠肾脏的表达及其意义 被引量：4

9

作者 田琳 李才 +2 位作者 赵岩 陈素贤 苗春生 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期607-611,F0002,共6页

目的:观察尾加压素Ⅱ(UⅡ)和转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白在糖尿病大鼠肾小管上皮细胞和肾小球的动态表达规律及其在糖尿病肾病发病中的作用。方法:30只雄性Wistar大鼠随机分为对照组及糖尿病2、4、8和12周组。糖尿病大鼠模型用单次腹... 目的:观察尾加压素Ⅱ(UⅡ)和转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白在糖尿病大鼠肾小管上皮细胞和肾小球的动态表达规律及其在糖尿病肾病发病中的作用。方法:30只雄性Wistar大鼠随机分为对照组及糖尿病2、4、8和12周组。糖尿病大鼠模型用单次腹腔注射链脲菌素(55mg·kg-1)诱发。生化法测定血糖、血和尿肌酐、尿白蛋白和尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)含量。免疫组织化学法检测肾脏UⅡ、TGF-β1、纤连蛋白(FN)和Ⅳ型胶原(ColⅣ)的表达。结果:糖尿病各组大鼠的生化指标均明显高于对照组(P<0.05)。糖尿病大鼠肾小管上皮细胞和肾小球可见UⅡ和TGF-β1阳性染色颗粒,对照组未见该阳性染色颗粒。与糖尿病2周时比较,糖尿病4、8和12周组UⅡ和TGF-β1表达(阳性染色肾小管数和细胞数)随着病程进展进行性增加(P<0.05),肾小管上皮细胞UⅡ的表达水平与尿NAG含量呈正相关(r=0.895,P<0.01)。糖尿病组大鼠肾小管上皮细胞UⅡ与TGF-β1的表达水平呈正相关(r=0.769,P<0.01)。糖尿病8和12周组大鼠肾脏FN和ColⅣ表达明显高于对照组(P<0.05)。结论:糖尿病大鼠肾小管上皮细胞和肾小球UⅡ及TGF-β1蛋白表达均明显增加,提示其在糖尿病肾病的肾小管损害及细胞外基质积聚中可能起一定作用。 展开更多

关键词 尾加压素Ⅱ 转化生长因子Β 糖尿病肾病 纤连蛋白类 胶原Ⅳ型

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硒和维生素E对克山病病区粮喂饲大鼠心肌纤维化的影响 被引量：4

10

作者 贾春澍 陈爱军 +4 位作者 李敏 李相军 苗春生 李希宁 任立群 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期211-214,I0001,共5页

目的:观察适时适量补充硒(Se)和维生素E(VE)对心肌纤维化和心肌重构的影响,探讨克山病病区的低Se和低VE膳食是否在心肌损伤后的修复过程中持续发挥作用。方法:30只Wistar大鼠随机分为:正常对照组(Control,混合饲料喂养)、病区粮饲料组(... 目的:观察适时适量补充硒(Se)和维生素E(VE)对心肌纤维化和心肌重构的影响,探讨克山病病区的低Se和低VE膳食是否在心肌损伤后的修复过程中持续发挥作用。方法:30只Wistar大鼠随机分为:正常对照组(Control,混合饲料喂养)、病区粮饲料组(EG,病区粮喂养)、病区粮饲料加Se组(EG+Se)、病区粮饲料加VE组(EG+VE)和病区粮饲料加Se加VE组(EG+Se+VE)。喂养21d后,取大鼠心脏,比色法测定大鼠血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力;硫代巴比妥法测定血清丙二醛(MDA)含量;马松三色染色测定大鼠细胞外基质沉积情况;免疫组织化学法和Western blotting法测大鼠心肌组织中转化生长因子β(TGF-β)和结缔组织生长因子(CTGF)表达。结果:与正常对照组比较,EG组心肌纤维化大鼠血清中GSH-Px活力下降(P<0.01),MDA含量升高(P<0.05),心肌组织胶原蛋白大量沉积,并伴有TGF-β和CTGF表达上调(P<0.01)。与EG组比较,EG+Se组和EG+Se+VE组病区粮心肌纤维化大鼠血清中GSH-Px活力均提高(P<0.01和P<0.05),MDA含量降低(P<0.05);大鼠心肌细胞外基质沉积缓解;克山病大鼠心肌TGF-β和CTGF表达下调(P<0.01)。结论:低Se和低VE在心肌损伤后的修复过程中持续发挥作用,适时适量补充Se和VE有利于减轻和逆转过度的心肌纤维化和心肌重构。 展开更多

关键词 硒 维生素E 心肌纤维化 心肌重构 克山病

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大鼠肾小管上皮细胞的分离鉴定及其增殖活力分析 被引量：5

11

作者 刘朋飞 黄秀英 +6 位作者 董超 冯业童 吴昊昱 刘迪 吴璇 周余来 孙波 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期74-77,197,共4页

目的:建立一种大鼠肾小管上皮细胞的分离鉴定方法,分析所获得细胞的增殖活力,为肾损伤等肾脏疾病的体外分析实验提供理论基础和技术支持。方法:采用Ⅱ型胶原酶消化法分离肾小管节段,并用Percoll密度梯度离心法进一步纯化肾小管,常规条... 目的:建立一种大鼠肾小管上皮细胞的分离鉴定方法,分析所获得细胞的增殖活力,为肾损伤等肾脏疾病的体外分析实验提供理论基础和技术支持。方法:采用Ⅱ型胶原酶消化法分离肾小管节段,并用Percoll密度梯度离心法进一步纯化肾小管,常规条件下对肾小管节段进行贴壁培养,待细胞爬出后,用免疫组织化学方法检测细胞角质素-18(CK-18)的表达情况,采用流式细胞术对第0、1和2(P0、P1、P2)代细胞的CK-18表达情况进行分析,用CCK-8方法检测各代细胞的增殖活力。结果:肾小管节段培养24h后,可见细胞从节段内爬出;培养72h后,细胞呈铺路石样密集生长。随着传代进行,P0、P1和P2代细胞CK-18的表达效率分别为95.9%、91.5%和76.8%,肾小管上皮细胞逐渐死亡,P2代细胞较P1代细胞增殖活力明显减弱(P<0.05),同时培养体系中杂细胞增多。结论:该方法经济可靠、简便易行,但是所分离的肾小管上皮细胞只可在体外传代2次,不能长期培养,仅P0、P1代细胞可供体外分析实验使用。 展开更多

关键词 肾小管上皮细胞 分离 鉴定 增殖活力

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Bcl-2及Bax在异丙肾上腺素致心肌坏死模型大鼠心肌中的表达及意义 被引量：4

12

作者 李相军 杨莉 +3 位作者 任立群 石艳 孙波 苗春生 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1044-1047,I0012,共5页

目的:探讨Bcl-2及Bax在异丙肾上腺素(Isp)致心肌坏死模型大鼠心肌中的表达及意义。方法:40只大鼠随机分为4组:正常对照组及注射Isp后12h、1周和3周组。除正常对照组外,其他各组大鼠皮下注射Isp(15mg·kg-1体重),并于给药后12h、1周... 目的:探讨Bcl-2及Bax在异丙肾上腺素(Isp)致心肌坏死模型大鼠心肌中的表达及意义。方法:40只大鼠随机分为4组:正常对照组及注射Isp后12h、1周和3周组。除正常对照组外,其他各组大鼠皮下注射Isp(15mg·kg-1体重),并于给药后12h、1周和3周时取对应组大鼠心脏,用免疫组化法及RT-PCR法检测各组大鼠心肌组织中Bcl-2及Bax的表达。结果:免疫组化结果显示,注射Isp后12h及1周组大鼠心肌组织中Bax表达明显高于正常对照组(P<0.05);注射Isp后12h、1周及3周组大鼠心肌组织Bcl-2表达量均明显低于正常对照组(P<0.05);注射Isp后12h、1周、3周后,各组大鼠心肌组织Bcl-2/Bax比值均低于正常对照组(P<0.05)。RT-PCR结果显示,注射Isp后各组大鼠心肌组织Bax mRNA表达量均明显高于正常对照组(P<0.05),且在注射Isp后1周时,Bax mRNA表达量达到高峰;注射Isp后,各组大鼠心肌组织Bcl-2mRNA表达量均明显低于正常对照组大鼠(P<0.05);与正常对照组大鼠比较,在注射Isp后12h及1周,各组大鼠心肌组织Bcl-2/Bax比值明显增高(P<0.05)。结论:心肌细胞的凋亡是心肌纤维化的病理基础,而Bcl-2家族基因及蛋白表达变化在此过程中起主要调控作用。 展开更多

关键词 心肌坏死 细胞调亡 基因 BCL-2 BAX

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红参发酵产物对高糖下大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质降解的影响 被引量：8

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作者 曲萌 董佳婧 +4 位作者 姜锐 崔继春 孙坤洋 董志恒 孙立伟 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期245-249,共5页

目的:探讨红参发酵产物(FRGE)对高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)增殖和细胞外基质(ECM)降解的影响,阐明FRGE对糖尿病肾病(DN)的防治作用及可能机制。方法:将GMCs分为正常对照(NG)组、高糖(HG)组、高糖+不同浓度(3.75、7.50和15.00 m... 目的:探讨红参发酵产物(FRGE)对高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)增殖和细胞外基质(ECM)降解的影响,阐明FRGE对糖尿病肾病(DN)的防治作用及可能机制。方法:将GMCs分为正常对照(NG)组、高糖(HG)组、高糖+不同浓度(3.75、7.50和15.00 mg·L^(-1))FRGE组。四甲基偶氮唑盐(MTT)光吸收法观察各组GMCs的增殖率,酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养细胞上清中Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)的水平,蛋白免疫印迹技术(Western blotting)检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶组织抑制物2(TIMP-2)蛋白表达水平。结果:与NG组比较,HG组GMCs增殖率升高(P<0.01),ColⅣ水平升高(P<0.01),TIMP-2蛋白表达水平上调(P<0.01),MMP-2蛋白表达水平下调(P<0.01);与HG组比较,高糖+不同浓度FRGE组GMCs增殖率均降低(P<0.01),ColⅣ水平降低(P<0.01),TIMP-2蛋白表达水平下调(P<0.01),MMP-2蛋白表达水平上调(P<0.01)。结论:FRGE可通过抑制高糖诱导的大鼠GMCs增殖,促进ECM的降解,延缓DN的发生发展。 展开更多

关键词 红参发酵产物 糖尿病肾病 肾小球系膜细胞 细胞增殖 基质金属蛋白酶

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单宁酸对糖尿病大鼠肾组织炎症因子表达的抑制作用 被引量：5

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作者 魏海峰 魏雁虹 +2 位作者 李蕴潜 苗春生 李才 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期393-397,386,共5页

目的:观察单宁酸(TA)对链脲佐菌素(STZ)诱发糖尿病(DM)大鼠肾脏组织炎症因子表达的抑制作用,探讨其作用机制。方法:70只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、DM组、氨基胍(AG)组、TA低剂量组和TA高剂量组。处理10周后检测各组大鼠肾脏功能指... 目的:观察单宁酸(TA)对链脲佐菌素(STZ)诱发糖尿病(DM)大鼠肾脏组织炎症因子表达的抑制作用,探讨其作用机制。方法:70只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、DM组、氨基胍(AG)组、TA低剂量组和TA高剂量组。处理10周后检测各组大鼠肾脏功能指标[血清肌酐(Cre)、尿素氮(BUN)及24 h尿蛋白排泄量],PAS染色观察肾脏病理改变,免疫组织化学染色观察肾组织细胞间黏附分子1(ICAM-1)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达,RT-PCR方法检测肾组织ICAM-1 mRNA的表达。结果:与模型组比较,TA组大鼠血清Cre、BUN及24 h尿蛋白排泄量降低(P<0.05或P<0.01),大鼠肾小球系膜区PAS阳性物质减少,肾组织ICAM-1及TNF-α蛋白表达水平降低,肾组织ICAM-1 mRNA表达水平降低(P<0.05)。结论:TA能降低糖尿病大鼠肾组织ICAM-1及TNF-α的表达,对糖尿病大鼠肾脏有保护作用。 展开更多

关键词 单宁酸 糖尿病肾病 细胞间黏附分子1 肿瘤坏死因子Α

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urantide对实验性动脉粥样硬化大鼠胸主动脉损伤的影响 被引量：4

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作者 赵娟 王佳昕 +3 位作者 李雪燕 王博 刘全乐 任立群 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期653-656,I0001,共5页

目的:观察urantide对动脉粥样硬化(AS)大鼠胸主动脉损伤的影响,探讨其防治AS的作用机制。方法:采用高脂饲料喂养及腹腔注射维生素D3损伤动脉内膜的方法建立大鼠AS模型,随机分为正常组、AS模型组、阳性药组及urantide组。全自动生化分析... 目的:观察urantide对动脉粥样硬化(AS)大鼠胸主动脉损伤的影响,探讨其防治AS的作用机制。方法:采用高脂饲料喂养及腹腔注射维生素D3损伤动脉内膜的方法建立大鼠AS模型,随机分为正常组、AS模型组、阳性药组及urantide组。全自动生化分析仪检测大鼠血清中的甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)和Ca2+的水平;胸主动脉HE染色观察各组大鼠胸主动脉形态学变化。RT-PCR方法检测大鼠胸主动脉中尾加压素Ⅱ(UⅡ)及其受体G蛋白偶联受体14(GPR14)mRNA的表达。结果:与正常组比较,AS模型组大鼠血清中Ca2+、TG、TC、HDL及LDL水平明显升高(P<0.01);urantide组大鼠在给药后,血清中上述各项指标均随给药时间的延长呈现逐渐降低的趋势,达到或接近阳性药组大鼠的水平,与AS模型组比较差异有统计学意义(P<0.01)。与正常组比较,AS模型组大鼠胸主动脉出现典型AS病变;与AS模型组比较,urantide组大鼠AS病理改变逐渐减轻。与正常组比较,AS模型组大鼠UⅡ及GPR14mRNA的表达水平增高(P<0.01);与AS模型组比较,urantide组大鼠随给药时间的增加,UⅡ及GPR14mRNA表达水平降低(P<0.01)。结论:urantide对AS大鼠胸主动脉损伤有一定的保护作用。 展开更多

关键词 尾加压素Ⅱ URANTIDE 胸主动脉损伤 动脉粥样硬化

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罗布麻提取物对AngⅡ诱导的大鼠心肌纤维化中ERK通路的影响 被引量：6

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作者 苗春生 景海燕 +2 位作者 尹俐 李希宁 任立群 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期618-622,共5页

目的:探讨罗布麻提取物对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠心肌纤维化模型中ERK通路的影响,并初步探索罗布麻提取物抗心肌纤维化机制。方法:采用1×10-6 mol.L-1 AngⅡ诱导大鼠心肌成纤维细胞复制心肌纤维化模型,细胞分为正常对照组、... 目的:探讨罗布麻提取物对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠心肌纤维化模型中ERK通路的影响,并初步探索罗布麻提取物抗心肌纤维化机制。方法:采用1×10-6 mol.L-1 AngⅡ诱导大鼠心肌成纤维细胞复制心肌纤维化模型,细胞分为正常对照组、AngⅡ组、缬沙坦治疗组1×10-6 mg.L-1)及罗布麻提取物高剂量组(0.8mol.L-1)、中剂量组(0.4 mol.L-1)、低剂量组(0.2 mol.L-1)。通过对羟脯氨酸及Ⅰ、Ⅲ型胶原(ColⅠ、ColⅢ)的检测鉴定模型的成功复制,RT-PCR及Western blotting方法检测raf、ERK、c-fos mRNA及ERK蛋白在各组细胞中的表达量。结果:成功建立AngⅡ诱导的心肌纤维化模型。与AngⅡ组比较,不同剂量罗布麻提取物组羟脯氨酸及ColⅠ、ColⅢ的表达量均下调(P<0.05或P<0.01);RT-PCR及Western blotting检测发现,罗布麻提取物不同剂量组的raf、ERK、c-fos mRNA及ERK蛋白表达量较AngⅡ组降低(P<0.05或P<0.01)。结论:ERK信号通路在罗布麻提取物调控心肌纤维化发生和发展的过程中发挥重要作用。 展开更多

关键词 罗布麻提取物 心肌纤维化 ERK通路

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miR-181b过表达对胶质瘤U87细胞中MT1-MMP和TIMP3蛋白表达和细胞侵袭能力的影响 被引量：4

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作者 李蕴潜 赵丽艳 +4 位作者 石艳 刘辉 苗春生 许万振 杨志青 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期925-931,共7页

目的:探讨微小RNA-181b(miR-181b)过表达对人胶质瘤细胞中膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)和金属蛋白酶组织抑制剂3(TIMP3)表达的调控作用及对细胞侵袭能力的影响。方法:将培养于DMEM培养基的人胶质瘤U87细胞分为阴性对照组(不做任何处理... 目的:探讨微小RNA-181b(miR-181b)过表达对人胶质瘤细胞中膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)和金属蛋白酶组织抑制剂3(TIMP3)表达的调控作用及对细胞侵袭能力的影响。方法:将培养于DMEM培养基的人胶质瘤U87细胞分为阴性对照组(不做任何处理)、空载组(转染Lipofetamine 2000)、乱序组(转染乱序has-miR-181b寡核苷酸)和miR-181b组(转染has-miR-181b寡核苷酸)。qRT-PCR法检测各组细胞中miR-181b基因表达水平,Western blotting法检测各组细胞中MT1-MMP和TIMP3蛋白的相对表达水平,基质胶侵袭试验检测各组细胞的侵袭能力,测定各组细胞的趋化运动抑制率、迁移率和细胞黏附率;生物信息学数据库预测miR-181b的侯选靶基因。结果:miR-181b组U87细胞中miR-181b基因表达水平明显高于其他各组(P<0.01),呈过表达。miR-181b组U87细胞中MT1-MMP蛋白表达水平低于其他各组(P<0.01),miR-181b与MT1-MMP蛋白表达水平呈负相关关系(r=-0.787,P<0.05);miR-181b组U87细胞中TIMP3蛋白表达水平高于其他各组(P<0.01),miR-181b与TIMP3蛋白表达水平呈正相关关系(r=0.801,P<0.05)。基质胶侵袭试验中miR-181b组穿膜细胞数明显低于其他各组(P<0.05)。与其他3组比较,miR-181b组U87细胞的趋化运动抑制率升高、迁移率和细胞黏附率降低(P<0.05)。生物信息学数据库预测,在MT1-MMP的3′非翻译区(3′UTR)有1个与miR-181b的结合位点,在TIMP3的3′UTR有2个与miR-181b的结合位点。结论:miR-181b过表达可下调MT1-MMP和上调TIMP3蛋白的表达,从而抑制胶质瘤细胞的侵袭能力;miR-181b作为关键性调节miR,可能成为胶质瘤治疗的重要靶标。 展开更多

关键词 微小RNA-181b 膜型基质金属蛋白酶1 金属蛋白酶组织抑制剂3 胶质瘤细胞 侵袭

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尾加压素Ⅱ及其受体在大鼠肾成纤维细胞中的表达及银杏叶的干预作用 被引量：3

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作者 王丹 李才 +2 位作者 李相军 石艳 苗春生 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期935-938,共4页

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对大鼠肾间质成纤维细胞尾加压素Ⅱ(UⅡ)及其受体(GPR14)表达的影响和银杏叶(GBE)的干预作用。方法:体外培养大鼠肾成纤维细胞,以未处理细胞作为正常对照组,以AngⅡ作为刺激因素,分别加入终浓度为0、25、50... 目的:探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对大鼠肾间质成纤维细胞尾加压素Ⅱ(UⅡ)及其受体(GPR14)表达的影响和银杏叶(GBE)的干预作用。方法:体外培养大鼠肾成纤维细胞,以未处理细胞作为正常对照组,以AngⅡ作为刺激因素,分别加入终浓度为0、25、50、100和200g·L-1的GBE,RT-PCR检测各组细胞UⅡ及GPR14 mRNA表达,免疫印迹法检测各组细胞UⅡ及GPR14蛋白含量,ELISA法检测培养上清中Ⅰ型胶原(ColⅠ)含量。结果:AngⅡ组UⅡ、GPR14表达量及培养上清中ColⅠ含量明显高于正常对照组(P<0.01),与AngⅡ刺激组比较,AngⅡ+GBE组UⅡ及GPR14的mRNA表达量下降(P<0.01),蛋白含量减少(P<0.01或P<0.05),培养上清中ColⅠ含量明显降低(P<0.01或P<0.05)。结论:GBE可抑制AngⅡ诱导的肾间质成纤维细胞UⅡ及受体mRNA表达,降低其蛋白含量,减少细胞外基质ColⅠ分泌。 展开更多

关键词 尾加压素Ⅱ GPR14 血管紧张素Ⅱ 成纤维细胞

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大鼠心肌缺血性纤维化后NF-κB的表达及其意义 被引量：3

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作者 姜铁超 邹颖刚 +2 位作者 于晓艳 王洪智 杨萍 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期879-881,F0002,共4页

目的:探讨大鼠发生心肌缺血性纤维化后转录因子(NF-κB)的表达及作用,阐明其与心肌缺血性纤维化发生发展的关系。方法:20只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组、盐酸异丙肾上腺素注射液(Iso)12h组、Iso72h组和Iso1周组,每组5只。除正常... 目的:探讨大鼠发生心肌缺血性纤维化后转录因子(NF-κB)的表达及作用,阐明其与心肌缺血性纤维化发生发展的关系。方法:20只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组、盐酸异丙肾上腺素注射液(Iso)12h组、Iso72h组和Iso1周组,每组5只。除正常对照组外,其他各组大鼠皮下均注射Iso(2mg·kg-1体质量)。按对应时间点取心脏组织,采用常规染色,免疫组织化学染色方法分析NF-κB蛋白表达。结果:HE染色结果显示正常对照组心肌排列整齐,横纹清晰,胞核明显,无细胞肿胀。注射Iso12h后,心肌出现较多点状坏死。注射Iso1周后,出现界限清晰、多发散在坏死灶。Masson三色染色结果显示正常对照组胶原仅有少量表达,而注射Iso12h后,胶原量明显增加(P<0.01),直至1周达到高峰。NF-κB免疫组织化学染色结果显示正常对照组中可见呈浅黄色或综黄色阳性物质。注射Iso12h后,NF-κB阳性物质表达明显增加。注射1周后,NF-κB阳性表达达到最大值(P<0.05)。结论:NF-κB表达随Iso注射时间的延长而明显增加,提示NF-κB参与了大鼠心肌坏死后纤维化的发生及发展过程。 展开更多

关键词 心肌纤维化 转录因子 大鼠 WISTAR

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血管生成素2经PI3K/Akt途径对HCT-8细胞增殖的促进作用 被引量：2

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作者 张继红 王红 +5 位作者 任立群 李相军 王彩芹 姜晶 王倩 温春阳 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1057-1061,共5页

目的:研究外源性血管生成素2(Ang-2)蛋白对结肠癌细胞株(HCT-8)中Tie-2、1-磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、Akt基因及蛋白表达的影响,探讨其与PI3K/Akt通路的关系。方法:用不同浓度的Ang-2蛋白(0、0.2、0.4、0.8、1.2、2.0、3.0mg·L-1)... 目的:研究外源性血管生成素2(Ang-2)蛋白对结肠癌细胞株(HCT-8)中Tie-2、1-磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、Akt基因及蛋白表达的影响,探讨其与PI3K/Akt通路的关系。方法:用不同浓度的Ang-2蛋白(0、0.2、0.4、0.8、1.2、2.0、3.0mg·L-1)作用于HCT-8细胞,用MTT法检测细胞增殖活性,根据实验结果选定Ang-2蛋白的后续实验浓度。细胞分为正常对照组(C组)、无血清培养液组(SD组)、Ang-2组(SA2组)及LY294002组(SA2L组),应用RT-PCR及Western blotting技术分析Tie-2、PI3K、Akt基因及蛋白的变化。结果:加入不同浓度的外源性Ang-2蛋白,HCT-8细胞均有不同程度的增殖,当Ang-2的浓度为2mg·L-1时,细胞的增殖力最强。SA2组中Tie-2、PI3K及Akt 3种基因及蛋白的表达均较SD组增强(Tie-2:均P<0.01;PI3K:P<0.01及P>0.05;Akt:均P<0.01),而在SA2L组中3种基因及蛋白的表达均较SA2组减弱(Tie-2:P<0.05及P<0.01;PI3K:P<0.05及P<0.01;Akt:P<0.01及P<0.05)。结论:Ang-2蛋白在结肠癌细胞中有促增殖作用,且其作用机制与Ang-2/Tie-2/PI3K/Akt调节的通路有关,应用LY294002可抑制该通路,实现抗肿瘤作用。 展开更多

关键词 血管生成素2 结肠癌细胞株 增殖 受体 TIE-2 1-磷脂酰肌醇3-激酶 癌基因蛋白质v-Akt

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