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干扰素β1a基因真核表达质粒的构建和表达被引量：1: 1; 作者王妍黄志立 +2 位作者李艳晖张丽君解桂秋《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期204-208,共5页; 目的:构建干扰素β1a(IFN-β1a)的CHO表达体系,探讨人IFN-β1a在真核细胞中的表达效果。方法:采用全基因合成法获取重组人IFN-β1a基因,并通过点突变将IFN-β1a的17位半胱氨酸进行修饰,合成的基因经PCR扩增,连接入pSV2-dhfr质粒中,构建... 展开更多; 关键词干扰素β1a 真核细胞 CHO细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

人白细胞介素12两个亚基基因p35、p40拼接的新方法: 2; 作者杜珍武齐熙明 +3 位作者王茜吴晓冬杨绍娟张桂珍《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期309-313,共5页; 目的:探讨人白细胞介素12(IL-12)两个亚基基因通过连接肽基因进行拼接的新方法。为进一步研究IL-12基因的生物学功能以及应用提供实验基础。方法:采用两个牛弹性蛋白基序(10个氨基酸)的基因序列为两个亚基基因拼接的连接肽基因。根据人I... 展开更多; 关键词白细胞介素12 聚合酶链反应基因拼接; 在线阅读下载PDF 职称材料

结肠癌细胞总RNA电穿孔法体外转染成熟树突状细胞被引量：2: 3; 作者杨蕾霍锐 +3 位作者卜丽梅杜珍武邸军张桂珍《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期271-275,共5页; 目的:探讨结肠癌细胞总RNA电穿孔法转染成熟树突状细胞(mDCs)的转染效率及对树突状细胞(DCs)特征和功能的影响,为DCs核酸肿瘤疫苗的制备及其在临床应用奠定基础。方法:用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素... 展开更多; 关键词树突细胞电穿孔 RNA; 在线阅读下载PDF 职称材料

CEA mRNA转染的成熟树突状细胞体外诱导特异性抗肿瘤作用: 4; 作者杨蕾霍锐 +2 位作者赵建军杜珍武张桂珍《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期285-289,共5页; 目的:将体外转录的癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)mRNA转染入成熟树突状细胞(dendritic cell,DCs),观察其体外诱导的特异性抗肿瘤作用。方法:GM-CSF、IL-4、TNF-α体外诱导成熟DCs并用流式鉴定。构建pcDNA3.1-CEA载体,体外转录... 展开更多; 关键词树突状细胞癌胚抗原 RNA 疫苗免疫治疗; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名干扰素β1a基因真核表达质粒的构建和表达被引量：1: 1; 作者王妍黄志立李艳晖张丽君解桂秋; 机构深圳职业技术学院应用化学与生物技术学院吉林大学生命科学学院分子酶学工程教育部重点实验室吉林大学药学院基因工程教研室; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期204-208,共5页; 基金国家自然科学基金资助课题(21072075 20772046); 文摘目的:构建干扰素β1a(IFN-β1a)的CHO表达体系,探讨人IFN-β1a在真核细胞中的表达效果。方法:采用全基因合成法获取重组人IFN-β1a基因,并通过点突变将IFN-β1a的17位半胱氨酸进行修饰,合成的基因经PCR扩增,连接入pSV2-dhfr质粒中,构建重组真核表达质粒pSV2-dhfr-IFN-β1a。将质粒转染至CHO-dhfr-细胞中,经MTX加压筛选,获得稳定生长的能够持续表达IFN-β1a的单克隆细胞株;提取细胞基因组DNA,进行PCR鉴定。收集细胞培养上清液,采用Wish细胞病变抑制法检测转染细胞中IFN-β1a的抗病毒活性。结果:重组真核表达质粒pSV2-dhfr-IFN-β1a经PCR及双酶切鉴定证明构建正确;以转染细胞基因组DNA为模板,可扩增出IFN-β1a基因;转染后重组细胞表达的IFN-β1a具有抗病毒活性,达到3×105 IU.mL-1。结论:IFN-β1a基因真核表达质粒构建成功,并在CHO细胞中成功表达了具有较高生物学活性的IFN-β1a蛋白。; 关键词干扰素β1a 真核细胞 CHO细胞; Keywords interferon β1a eukaryotic cells CHO cells; 分类号 Q784 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名人白细胞介素12两个亚基基因p35、p40拼接的新方法: 2; 作者杜珍武齐熙明王茜吴晓冬杨绍娟张桂珍; 机构吉林大学中日联谊医院中心研究室吉林大学药学院基因工程教研室河北省秦皇岛市第一医院中心实验室; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期309-313,共5页; 基金吉林省科技厅科技发展计划项目资助课题(20050405-7); 文摘目的:探讨人白细胞介素12(IL-12)两个亚基基因通过连接肽基因进行拼接的新方法。为进一步研究IL-12基因的生物学功能以及应用提供实验基础。方法:采用两个牛弹性蛋白基序(10个氨基酸)的基因序列为两个亚基基因拼接的连接肽基因。根据人IL-12p35、p40两个亚基基因片段以及连接肽基因核苷酸序列设计引物,其中p40基因下游引物包括部分连接肽基因序列以及KpnⅠ酶切位点,p35基因上游引物包括部分连接肽基因序列以及KpnⅠ酶切位点。通过聚合酶链反应(PCR)方法分别获得人IL-12p35与p40基因片段。利用KpnⅠ内切酶对p35与p40基因的PCR产物进行酶切,酶切产物回收后利用T4DNA连接酶进行连接,应用p40基因上游引物与p35基因下游引物对连接产物进行PCR扩增。利用KpnⅠ内切酶对连接产物进行酶切鉴定。将扩增的连接产物克隆入T载体,挑选阳性克隆并进行酶切鉴定,酶切鉴定正确的克隆进行拼接产物的核苷酸序列测序。结果:通过PCR分别获得约1000bp大小的p40基因片段与600bp大小的p35基因片段,两个基因酶切片段连接后PCR扩增获得1600bp左右的拼接产物,采用KpnI内切酶对拼接产物进行酶切后获得约1000和600bp大小的基因片段,分别与p40和p35基因片段大小一致。拼接产物的T载体经酶切鉴定可见1600bp大小的酶切产物,拼接产物测序结果与GenBank核酸数据库上的p40基因、p35基因以及连接肽基因核苷酸序列完全一致。结论:利用该基因分子拼接技术成功地将人白介素12两个亚基基因通过连接肽基因进行拼接。建立了一种简单、方便、有效进行人白细胞介素12两个亚基基因拼接的新方法,为进一步研究IL-12的生物学功能以及基因治疗提供实验基础。; 关键词白细胞介素12 聚合酶链反应基因拼接; Keywords interleukin-12 polymerase chain reaction gene linking the paper offers; 分类号 Q75 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名结肠癌细胞总RNA电穿孔法体外转染成熟树突状细胞被引量：2: 3; 作者杨蕾霍锐卜丽梅杜珍武邸军张桂珍; 机构吉林大学中日联谊医院中心研究室吉林大学中日联谊医院镜检科吉林大学药学院基因工程教研室吉林大学第一医院干部病房吉林省人民医院病理科; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期271-275,共5页; 基金吉林省科技厅基金资助课题(20050405-7) 吉林省卫生厅基金资助课题(20020321); 文摘目的:探讨结肠癌细胞总RNA电穿孔法转染成熟树突状细胞(mDCs)的转染效率及对树突状细胞(DCs)特征和功能的影响,为DCs核酸肿瘤疫苗的制备及其在临床应用奠定基础。方法:用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素4(rhIL-4)将人外周血单核细胞(PBMC)诱导成未成熟树突状细胞(imDCs),肿瘤细胞坏死因子-α(TNF-α)作用24h刺激其成熟。实验设为imDCs组和mDCs组。Trizol法提取特异表达癌胚抗原(CEA)的结肠癌细胞SW480总RNA,电穿孔法将总RNA转染mDCs,设为RNA转染DCs组。流式细胞术检测各组细胞表面分子标志变化和转染DCs组的CEA蛋白表达情况。ELISA法检测各组细胞IL-12分泌水平。结果:rhGM-CSF、rhIL-4、TNF-α能将PBMC诱导成具有典型毛刺样突起形态学特征的DCs。imDCs组DCs表面CD1a表达呈阳性,CD80弱阳性,CD83阴性。mDCs组DCs表面CD1a、CD83、CD80表达均呈阳性。RNA转染DCs组DCs表面CD1a、CD83、CD80表达均呈阳性。总RNA转染mDCs后4h检测到CEA蛋白表达。mDCs组、RNA转染DCs组IL-12分泌量与imDCs组比较均显著升高(P<0.01),而mDCs组与RNA转染DCs组比较差异无显著性(P>0.05)。结论:结肠癌细胞总RNA可通过电穿孔法转染mDCs并表达CEA蛋白,电穿孔不改变mDCs的表面分子特征及功能。; 关键词树突细胞电穿孔 RNA; Keywords dendritic cells electroporation RNA; 分类号 R73-352 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名CEA mRNA转染的成熟树突状细胞体外诱导特异性抗肿瘤作用: 4; 作者杨蕾霍锐赵建军杜珍武张桂珍; 机构吉林大学中日联谊医院内镜中心吉林大学药学院基因工程教研室吉林大学中日联谊医院呼吸内科吉林大学中日联谊医院中心实验室; 出处《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期285-289,共5页; 基金吉林省科技厅基金资助课题(No.20050405-7)~~; 文摘目的:将体外转录的癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)mRNA转染入成熟树突状细胞(dendritic cell,DCs),观察其体外诱导的特异性抗肿瘤作用。方法:GM-CSF、IL-4、TNF-α体外诱导成熟DCs并用流式鉴定。构建pcDNA3.1-CEA载体,体外转录为CEA mRNA,电穿孔法将CEA mRNA转染入DCs。流式细胞术检测转染后DCs中CEA蛋白的表达;MTT法检测DCs刺激T细胞增殖能力;LDH法检测DCs体外诱导的CTL的特异性抗肿瘤作用;ELISA法检测诱导的CTL上清中IFN-γ的水平。结果:CEA mRNA转染后DCs细胞内CEA蛋白显著高于对照组(83.32%vs3.34%,P<0.01)。CEA mRNA转染组DCs在效靶比为1∶10时,刺激T细胞增殖作用最强,明显高于未转染组[(19.11±1.89)%vs(15.59±0.70)%,P<0.05]。CEAmRNA转染组DCs能产生CEA特异性的CTL效应,在效靶比为5∶1、10∶1、20∶1和40∶1时杀伤率分别为[(5.42±0.87)%、(14.09±1.13)%、(27.16±0.72)%、(32.49±0.84)%,P<0.01],而未转染组和对照靶细胞均无杀伤作用。转染组DCs诱导的CTL上清中IFN-γ分泌量显著高于未转染组[(141.73±28.61)vs(9.45±4.63)pg/ml,P<0.01]。结论:CEAmRNA转染的成熟DCs体外能产生特异性抗肿瘤作用,为研制CEA RNA-DCs疫苗提供了实验依据。; 关键词树突状细胞癌胚抗原 RNA 疫苗免疫治疗; Keywords dendritic cell； carcinoembryonic antigen； RNA； vaccine； immunotherapy; 分类号 R734.54 [医药卫生—肿瘤] R735.3 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	干扰素β1a基因真核表达质粒的构建和表达	王妍黄志立李艳晖张丽君解桂秋	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2013	1	在线阅读下载PDF 职称材料
2	人白细胞介素12两个亚基基因p35、p40拼接的新方法	杜珍武齐熙明王茜吴晓冬杨绍娟张桂珍	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2009	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	结肠癌细胞总RNA电穿孔法体外转染成熟树突状细胞	杨蕾霍锐卜丽梅杜珍武邸军张桂珍	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2009	2	在线阅读下载PDF 职称材料
4	CEA mRNA转染的成熟树突状细胞体外诱导特异性抗肿瘤作用	杨蕾霍锐赵建军杜珍武张桂珍	《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心	2011	0	在线阅读下载PDF 职称材料