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人胰岛素基因在幼仓鼠肾细胞中的表达及降血糖实验研究
1
作者
李华
王苹
+1 位作者
刘维全
王吉贵
《中国医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第1期18-21,共4页
目的 :构建并筛选人胰岛素基因真核高效表达载体。方法 :常规法构建重组质粒pEF1α ImINS。将重组质粒pEF1α ImINS和胰岛素其他 3个重组质粒分别转染幼仓鼠肾 (BHK )细胞 ,经G418筛选 ,阳性克隆传至 2 0代 ,分别用放射免疫和免疫组化...
目的 :构建并筛选人胰岛素基因真核高效表达载体。方法 :常规法构建重组质粒pEF1α ImINS。将重组质粒pEF1α ImINS和胰岛素其他 3个重组质粒分别转染幼仓鼠肾 (BHK )细胞 ,经G418筛选 ,阳性克隆传至 2 0代 ,分别用放射免疫和免疫组化技术分析胰岛素和 (或 )胰岛素原在BHK细胞中表达的情况。并用重组质粒pEF1α ImINS转染BHK细胞的阳性克隆 2 0代的PBS细胞悬浮液 (5× 10 7个 /只 )及其培养上清 (0 .5ml/只 )对昆明小鼠行腹腔注射 ,通过对注射前后小鼠血糖值测定 ,分析转基因产物降血糖的生物学效应。结果 :胰岛素的表达量最高为 7.984μIU/ml ,胰岛素表达水平的灰度值在BHK细胞质中为 177.5± 15.10 ,细胞核中为 150 .3±2 1.43 ;昆明小鼠注射 pEF1α ImINS转染BHK克隆细胞株的悬浮液后 6h与注射前 2 4h血糖值比较 ,差异极显著 (P <0 .0 1)。结论 :BHK细胞中重组质粒 pEF1α ImINS是胰岛素表达量最高的质粒 ;pEF1α ImINS转染的克隆细胞株在小鼠体内有胰岛素表达 。
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关键词
人胰岛素基因
幼仓鼠肾
血糖
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职称材料
第一内含子对人胰岛素基因在BHK细胞中表达的影响
被引量：
8
2
作者
李华
王吉贵
+3 位作者
刘维全
王苹
董婉维
齐顺章
《中国实验动物学杂志》
CAS
2002年第5期257-262,共6页
目的 构建人胰胰岛素基因真核表达载体 ,为胰岛素基因研究奠定基础。方法 从人基因组文库中扩增胰岛素基因的第一内含子 ,经测序证实其序列完全正确后 ,与pCMV mINS中的mINS基因融合 ,构建成带有第一内含子的胰岛素基因组基因真核表...
目的 构建人胰胰岛素基因真核表达载体 ,为胰岛素基因研究奠定基础。方法 从人基因组文库中扩增胰岛素基因的第一内含子 ,经测序证实其序列完全正确后 ,与pCMV mINS中的mINS基因融合 ,构建成带有第一内含子的胰岛素基因组基因真核表达质粒pCMV ImINS。分别用pCMV mINS和pCMV ImINS转染BHK细胞 ,经G4 18筛选 ,将阳性克隆传至 2 0代后 ,用放免方法和免疫组化法分析胰胰岛素和 或胰岛素原在BHK细胞中的表达量情况。结果 经放免测定 ,pCMV mINS和pCMV ImINS在BHK细胞中胰岛素和 或胰岛素原的表达量分别为4 0 77μIU ml和 5 0 6 8μIU ml。经免疫组化分析 ,pCMV mINS在BHK细胞质中胰岛素表达水平的灰度值为 190 0±19 5 6 ;pCMV ImINS在BHK细胞质中胰岛素表达水平的灰度值为 186 4± 10 2 4。
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关键词
内含子
胰岛素
基因
细胞系
表达
人
BHK细胞
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职称材料
启动子CMV和EF1α对人胰岛素基因在BHK细胞中表达的影响
被引量：
3
3
作者
李华
刘维全
+4 位作者
王萍
王吉贵
董婉维
王禄增
齐顺章
《中国实验动物学报》
CAS
CSCD
2003年第1期18-22,共5页
目的 构建人胰岛素基因真核高效表达载体 ,为胰岛素转基因研究奠定基础。方法 用限制性内切酶SpeⅠ和HindⅢ消化pEF1α GFP ,回收 1 2kbEF1α启动子 ,插入到pCMV mINS的NruⅠ和HindⅢ位点中 ,获得重组质粒pEF1α mINS ;将pCMV mINS和p...
目的 构建人胰岛素基因真核高效表达载体 ,为胰岛素转基因研究奠定基础。方法 用限制性内切酶SpeⅠ和HindⅢ消化pEF1α GFP ,回收 1 2kbEF1α启动子 ,插入到pCMV mINS的NruⅠ和HindⅢ位点中 ,获得重组质粒pEF1α mINS ;将pCMV mINS和pEF1α mINS分别转染BHK细胞 ,用G418筛选 ,阳性克隆传至 2 0代后 ,分别用放免方法和免疫组化法分析胰岛素和 或胰岛素原在BHK细胞中的表达情况。结果 经放免测定 ,pCMV mINS和pEF1α mINS在BHK细胞中胰岛素和 或胰岛素原的表达量分别为 4 0 77μIU ml和 6 897μIU ml。经免疫组化分析 ,pCMV mINS在BHK细胞质中胰岛素表达水平的灰度值为 190 0± 19 5 6 ;pEF1α mINS在BHK细胞质中胰岛素表达水平的灰度值为 181 4± 18 45 ,在BHK细胞核中表达水平的灰度值为 15 5 4± 11 6 6。结论 在BHK细胞中启动子EF1α启动胰岛素基因表达的活性比启动子CMV高。
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关键词
启动区
遗传学
人胰岛素基因
BHK细胞
表达
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职称材料
题名
人胰岛素基因在幼仓鼠肾细胞中的表达及降血糖实验研究
1
作者
李华
王苹
刘维全
王吉贵
机构
中国医科
大学
实验动物部
吉林大学耳鼻喉研究所
解放军军需
大学
军事兽医
研究所
中国农业
大学
生物学院
出处
《中国医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第1期18-21,共4页
基金
吉林省科委科研基金资助项目(98579)
文摘
目的 :构建并筛选人胰岛素基因真核高效表达载体。方法 :常规法构建重组质粒pEF1α ImINS。将重组质粒pEF1α ImINS和胰岛素其他 3个重组质粒分别转染幼仓鼠肾 (BHK )细胞 ,经G418筛选 ,阳性克隆传至 2 0代 ,分别用放射免疫和免疫组化技术分析胰岛素和 (或 )胰岛素原在BHK细胞中表达的情况。并用重组质粒pEF1α ImINS转染BHK细胞的阳性克隆 2 0代的PBS细胞悬浮液 (5× 10 7个 /只 )及其培养上清 (0 .5ml/只 )对昆明小鼠行腹腔注射 ,通过对注射前后小鼠血糖值测定 ,分析转基因产物降血糖的生物学效应。结果 :胰岛素的表达量最高为 7.984μIU/ml ,胰岛素表达水平的灰度值在BHK细胞质中为 177.5± 15.10 ,细胞核中为 150 .3±2 1.43 ;昆明小鼠注射 pEF1α ImINS转染BHK克隆细胞株的悬浮液后 6h与注射前 2 4h血糖值比较 ,差异极显著 (P <0 .0 1)。结论 :BHK细胞中重组质粒 pEF1α ImINS是胰岛素表达量最高的质粒 ;pEF1α ImINS转染的克隆细胞株在小鼠体内有胰岛素表达 。
关键词
人胰岛素基因
幼仓鼠肾
血糖
Keywords
human insulin gene
baby hamster kidney
b lood sugar level
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
第一内含子对人胰岛素基因在BHK细胞中表达的影响
被引量：
8
2
作者
李华
王吉贵
刘维全
王苹
董婉维
齐顺章
机构
中国医科
大学
实验动物部
中国农业
大学
生物学院
解放军军需
大学
军事兽医
研究所
吉林大学耳鼻喉研究所
出处
《中国实验动物学杂志》
CAS
2002年第5期257-262,共6页
文摘
目的 构建人胰胰岛素基因真核表达载体 ,为胰岛素基因研究奠定基础。方法 从人基因组文库中扩增胰岛素基因的第一内含子 ,经测序证实其序列完全正确后 ,与pCMV mINS中的mINS基因融合 ,构建成带有第一内含子的胰岛素基因组基因真核表达质粒pCMV ImINS。分别用pCMV mINS和pCMV ImINS转染BHK细胞 ,经G4 18筛选 ,将阳性克隆传至 2 0代后 ,用放免方法和免疫组化法分析胰胰岛素和 或胰岛素原在BHK细胞中的表达量情况。结果 经放免测定 ,pCMV mINS和pCMV ImINS在BHK细胞中胰岛素和 或胰岛素原的表达量分别为4 0 77μIU ml和 5 0 6 8μIU ml。经免疫组化分析 ,pCMV mINS在BHK细胞质中胰岛素表达水平的灰度值为 190 0±19 5 6 ;pCMV ImINS在BHK细胞质中胰岛素表达水平的灰度值为 186 4± 10 2 4。
关键词
内含子
胰岛素
基因
细胞系
表达
人
BHK细胞
Keywords
Introns
Insulin, Gene
Cell line
Gene expression
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
Q756 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
启动子CMV和EF1α对人胰岛素基因在BHK细胞中表达的影响
被引量：
3
3
作者
李华
刘维全
王萍
王吉贵
董婉维
王禄增
齐顺章
机构
中国医科
大学
实验动物部
解放军军需
大学
军事兽医
研究所
吉林大学耳鼻喉研究所
中国农业
大学
生物学院
出处
《中国实验动物学报》
CAS
CSCD
2003年第1期18-22,共5页
文摘
目的 构建人胰岛素基因真核高效表达载体 ,为胰岛素转基因研究奠定基础。方法 用限制性内切酶SpeⅠ和HindⅢ消化pEF1α GFP ,回收 1 2kbEF1α启动子 ,插入到pCMV mINS的NruⅠ和HindⅢ位点中 ,获得重组质粒pEF1α mINS ;将pCMV mINS和pEF1α mINS分别转染BHK细胞 ,用G418筛选 ,阳性克隆传至 2 0代后 ,分别用放免方法和免疫组化法分析胰岛素和 或胰岛素原在BHK细胞中的表达情况。结果 经放免测定 ,pCMV mINS和pEF1α mINS在BHK细胞中胰岛素和 或胰岛素原的表达量分别为 4 0 77μIU ml和 6 897μIU ml。经免疫组化分析 ,pCMV mINS在BHK细胞质中胰岛素表达水平的灰度值为 190 0± 19 5 6 ;pEF1α mINS在BHK细胞质中胰岛素表达水平的灰度值为 181 4± 18 45 ,在BHK细胞核中表达水平的灰度值为 15 5 4± 11 6 6。结论 在BHK细胞中启动子EF1α启动胰岛素基因表达的活性比启动子CMV高。
关键词
启动区
遗传学
人胰岛素基因
BHK细胞
表达
Keywords
Promoter Regions(Genetics)
Human Insulin Gene
BHK Cells
Expression
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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1
人胰岛素基因在幼仓鼠肾细胞中的表达及降血糖实验研究
李华
王苹
刘维全
王吉贵
《中国医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004
0
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职称材料
2
第一内含子对人胰岛素基因在BHK细胞中表达的影响
李华
王吉贵
刘维全
王苹
董婉维
齐顺章
《中国实验动物学杂志》
CAS
2002
8
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启动子CMV和EF1α对人胰岛素基因在BHK细胞中表达的影响
李华
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王萍
王吉贵
董婉维
王禄增
齐顺章
《中国实验动物学报》
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