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过表达SLC7A5基因对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及其机制
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作者 张京顺 邹颖刚 郑连文 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1526-1534,共9页
目的:探讨过表达溶质载体家族7成员5(SLC7A5)基因对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响,并阐明其相关机制。方法:4只3周龄SPF级SD雌性大鼠,提取原代大鼠卵巢颗粒细胞,分为阴性对照组(NC组)和促卵泡激素受体(FSHR)染色组(FSHR组)。免疫荧光染色... 目的:探讨过表达溶质载体家族7成员5(SLC7A5)基因对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响,并阐明其相关机制。方法:4只3周龄SPF级SD雌性大鼠,提取原代大鼠卵巢颗粒细胞,分为阴性对照组(NC组)和促卵泡激素受体(FSHR)染色组(FSHR组)。免疫荧光染色法观察大鼠卵巢颗粒细胞中FSHR蛋白表达情况,鉴定原代大鼠卵巢颗粒细胞是否成功分离。将大鼠卵巢颗粒细胞分为对照组(转染空载体质粒)和OE-SLC7A5组(转染SLC7A5过表达质粒),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法验证细胞转染效率。流式细胞术检测2组卵巢颗粒细胞凋亡率,流式细胞术检测2组不同细胞周期卵巢颗粒细胞百分率,RT-qPCR法检测2组卵巢颗粒细胞中SLC7A5、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8和肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA表达水平,Western blotting法检测2组卵巢颗粒细胞中SLC7A5、Caspase-3、cleaved Caspase-3、Caspase-8、cleaved Caspase-8和TNF-α蛋白表达水平。结果:荧光显微镜下卵巢颗粒细胞呈长梭形或者不规则形,特异性表达FSHR,NC组未见FSHR绿色荧光表达,FSHR组可见FSHR绿色荧光表达,提示大鼠原代卵巢颗粒细胞成功分离。与对照组比较,OE-SLC7A5组卵巢颗粒细胞中SLC7A5 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),提示SLC7A5过表达质粒成功转染卵巢颗粒细胞。流式细胞术检测,与对照组比较,OE-SLC7A5组细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。与对照组比较,OE-SLC7A5组S期卵巢颗粒细胞百分率明显降低(P<0.05)。RT-qPCR法检测,与对照组比较,OE-SLC7A5组卵巢颗粒细胞中TNF-α、Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平均明显升高(P<0.05)。Western blotting法检测,与对照组比较,OE-SLC7A5组卵巢颗粒细胞中TNF-α、Caspase-8、cleaved Caspase-8、Caspase-3、cleaved Caspase-3和SLC7A5蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。结论:SLC7A5蛋白表达增加能够通过上调TNF-α、Caspase-8和Caspase-3凋亡通路表达,促进颗粒细胞凋亡。 展开更多
关键词 溶质载体家族7成员5 大鼠卵巢颗粒细胞 细胞凋亡 肿瘤坏死因子α 含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶3 含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶8
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1例复杂染色体易位伴男性不育患者的家系核型分析及文献复习 被引量:4
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作者 吴桂杰 马帅 +3 位作者 郑连文 徐影 孟繁鹤 代晓微 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期729-731,共3页
染色体复杂易位是累及3条以上染色体,有3个以上断裂点的染色体结构异常,这种异常非常罕见。染色体畸变携带者一般个体表型正常,但是在减数分裂时发生平衡易位的染色体及其同源染色体发生联会交换,生成配子时发生遗传物质变化,这类配子... 染色体复杂易位是累及3条以上染色体,有3个以上断裂点的染色体结构异常,这种异常非常罕见。染色体畸变携带者一般个体表型正常,但是在减数分裂时发生平衡易位的染色体及其同源染色体发生联会交换,生成配子时发生遗传物质变化,这类配子受精后形成的胚胎遗传物质严重不平衡,往往表现出不育、不孕、流产、死胎或者胎儿畸形等不良后果的发生,本文就1例复杂染色体易位伴男性不育患者进行病例分析。 展开更多
关键词 易位 基因 不育 男性 核型分析 系谱
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青春期前双酚A暴露对雌性大鼠卵巢组织中mRNA分子表达谱的影响 被引量:3
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作者 张雪莹 郑连文 +1 位作者 邹颖刚 周振环 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期1407-1414,共8页
目的:研究双酚A(BPA)对青春期前雌性大鼠卵巢组织中mRNA分子表达谱的影响,探讨BPA对卵巢结构和功能的潜在影响。方法:32只雌性SD大鼠随机分为对照组和低、中及高剂量BPA组,每组8只。低、中和高剂量BPA组大鼠分别给予50、100和200 mg... 目的:研究双酚A(BPA)对青春期前雌性大鼠卵巢组织中mRNA分子表达谱的影响,探讨BPA对卵巢结构和功能的潜在影响。方法:32只雌性SD大鼠随机分为对照组和低、中及高剂量BPA组,每组8只。低、中和高剂量BPA组大鼠分别给予50、100和200 mg·kg^(-1)BPA,对照组大鼠给予等体积乙醇-玉米油(1∶100)。10 d后HE染色观察各组大鼠卵巢组织形态表现,RNA测序(RNA-seq)和生物信息学分析预测高剂量BPA组和对照组大鼠的差异表达基因及其生物学功能,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组大鼠卵巢组织中Hapln3、Nr4a1、Arc、Ccl2、Ccn5、Egr2和Rab33a mRNA表达水平。结果:HE染色,与对照组比较,低和中剂量BPA组大鼠卵巢组织未见明显异常,高剂量BPA组大鼠卵巢组织中原始卵泡、窦前卵泡、窦状卵泡数减少,闭锁卵泡数增加,出现囊状卵泡等改变。RNA-seq检测,对照组和高剂量BPA组大鼠卵巢组织中有14个差异表达基因。生物信息学分析预测该14个mRNA分子参与了生殖、代谢和细胞凋亡等多种生物学过程及p53、MAPK和PI3K-Akt等信号通路。RT-qPCR法,与对照组比较,高剂量BPA组大鼠卵巢组织中Hapln3、Nr4a1、Arc、Ccl2、Ccn5和Egr2 mRNA表达水平降低(P<0.05),Rab33a mRNA表达水平升高(P<0.05)。结论:BPA可引起青春期前雌性大鼠卵巢结构和卵巢组织中mRNA分子表达谱的变化,这可能会影响卵巢组织的结构和功能。 展开更多
关键词 双酚A 环境内分泌干扰物 卵巢组织 MRNA 大鼠 SD 青春期前
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1324例少精子症和无精子症患者的染色体核型分析 被引量:6
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作者 代晓微 徐影 +6 位作者 郑连文 李凌云 李丹丹 谭鑫 高飞 王艳 吴桂杰 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期774-777,共4页
目的:探索男性不育中少精子症和无精子症患者的遗传异常情况,为临床诊治和咨询奠定基础。方法:回顾性分析2015年1月至2016年5月在吉林大学第二医院生殖中心男科就诊的不育患者,排除不良育产史的患者,其中少精子症876例、无精子症448例,... 目的:探索男性不育中少精子症和无精子症患者的遗传异常情况,为临床诊治和咨询奠定基础。方法:回顾性分析2015年1月至2016年5月在吉林大学第二医院生殖中心男科就诊的不育患者,排除不良育产史的患者,其中少精子症876例、无精子症448例,计1 324例患者纳入研究。患者进行体格检查、彩超检查、精浆Zn测定、内分泌激素测定、染色体核型分析检测、Y染色体微缺失检测。结果:在876例少精子症患者中有78例存在染色体结构和数目异常,其中性染色体数目异常者22例,性染色体和常染色体结构异常者56例;在448例无精子症患者中有91例染色体结构和数目异常,其中性染色体数量异常者78例,结构异常者13例。此外,全部1 324例患者中染色体多态改变的有137例,无精子因子(azoospermia factor,AZF)基因微缺失的有43例。结论:男性不育少精子症和无精子症患者染色体核型异常的发生率较高,对其进行染色体核型分析有助于对病因的诊断以及遗传咨询。 展开更多
关键词 男性不育 无精子症 少精子症 染色体畸变 遗传咨询
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