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人DcR3融合蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备 被引量:2
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作者 吴春风 马忠森 +5 位作者 王秀丽 杨俊玲 杨洋 张越 图们乌力吉 乔俊华 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1160-1162,共3页
目的:制备DcR3融合蛋白及其多克隆抗体,并鉴定其特异性。方法:将亚克隆构建的pET28a(+)/DcR3重组表达质粒转化入大肠杆菌(E.coli)BL21菌株,IPTG诱导表达,镍柱亲和层析法纯化目的蛋白,SDS-PAGE及Western blot分析蛋白产物,将纯化的目的... 目的:制备DcR3融合蛋白及其多克隆抗体,并鉴定其特异性。方法:将亚克隆构建的pET28a(+)/DcR3重组表达质粒转化入大肠杆菌(E.coli)BL21菌株,IPTG诱导表达,镍柱亲和层析法纯化目的蛋白,SDS-PAGE及Western blot分析蛋白产物,将纯化的目的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,并对其进行纯化及鉴定。结果:pET28a(+)/DcR3重组表达质粒在E.coli中诱导表达相对分子质量(Mr)为33000的目的蛋白,表达量约占菌体蛋白总量的38%,纯化后的目的蛋白纯度达98%。Western blot显示纯化蛋白与抗DcR3单克隆抗体(mAb)具有良好的反应性。纯化后多克隆抗体效价达1.28×10-6。结论:DcR3蛋白在E.coli中得到高效表达,成功制备高纯度DcR3蛋白及高效价抗DcR3多克隆抗体,为研究DcR3在组织中的表达、分布,研制ELISA试剂盒以检测恶性肿瘤及自身免疫性疾病等患者血清DcR3表达水平提供实验基础。 展开更多
关键词 DCR3 原核表达 蛋白质纯化 多克隆抗体
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抗人DcR3单克隆抗体的研制及其鉴定 被引量:2
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作者 吴春风 马忠森 +5 位作者 王秀丽 杨俊玲 杨洋 张越 图们乌力吉 乔俊华 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期139-141,共3页
目的:制备抗人DcR3单克隆抗体(mAb),并鉴定其特异性。方法:纯化的His.DcR3融合蛋白免疫小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗人DcR3 mAb并进行纯化,纯化后的抗体经Western blot和ELISA方法鉴定其特异性、Ig亚型和效价。结果:获得... 目的:制备抗人DcR3单克隆抗体(mAb),并鉴定其特异性。方法:纯化的His.DcR3融合蛋白免疫小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗人DcR3 mAb并进行纯化,纯化后的抗体经Western blot和ELISA方法鉴定其特异性、Ig亚型和效价。结果:获得5株稳定分泌抗DcR3 mAb的杂交瘤细胞,均属IgG1亚型,其腹水抗体效价为1×10^-5~1×10^-7,Western blot显示5株细胞分泌的mAb均可识别DcR3蛋白,其中1株(181)可与SW480细胞成分反应。结论:成功建立稳定分泌抗人DcR3mAb的杂交瘤细胞株,其分泌的抗体特异性强、效价高,为研究DcR3在组织中的表达、分布及研制ELISA试剂盒奠定基础。 展开更多
关键词 DCR3 单克隆抗体 制备
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DcR3对人肺成纤维细胞合成Ⅳ型胶原的作用 被引量:2
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作者 杨洋 乔俊华 +4 位作者 安继红 张越 吴春风 郏博 马忠森 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1022-1023,1026,共3页
目的:探讨诱骗受体3(DcR3)对人肺成纤维细胞(HLF)合成Ⅳ型胶原的作用。方法:Over-PCR方法构建DcR3的真核表达载体,脂质体法转染HLF细胞,Westernblo检测HLF细胞合成Ⅳ型胶原的含量。结果:成功构建了pvax1-DcR3真核表达载体并转染HLF细胞... 目的:探讨诱骗受体3(DcR3)对人肺成纤维细胞(HLF)合成Ⅳ型胶原的作用。方法:Over-PCR方法构建DcR3的真核表达载体,脂质体法转染HLF细胞,Westernblo检测HLF细胞合成Ⅳ型胶原的含量。结果:成功构建了pvax1-DcR3真核表达载体并转染HLF细胞;转染组细胞ColⅣ表达量明显升高,从12h开始持续到72h,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);而转染+抗体组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);转染组不同时间ColⅣ表达量有统计学意义(F=34.25,P<0.05)。结论:DcR3促进HLF细胞合成Ⅳ型胶原的能力,可能是加速肺纤维形成的因素之一。 展开更多
关键词 DcR3基因 HLF Ⅳ型胶原
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