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紫薯花青素抗结肠癌作用及其诱导细胞凋亡机制 被引量：8
1
作者 陈伟莉 张晨 +2 位作者 张旭浩 刘冬影 赵玺 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期785-789,I0005,共6页
目的:探讨紫薯中原花青素(PCI)对人结肠癌细胞(HCT-116)的细胞毒性作用,阐明其诱导细胞凋亡的机制。方法:取处于对数生长期HCT-116细胞和人成纤维细胞HF-91随机分为对照组(PBS组)、阳性药组[25mg·L-1顺铂(DDP)]和PCI组(终浓度分别... 目的:探讨紫薯中原花青素(PCI)对人结肠癌细胞(HCT-116)的细胞毒性作用,阐明其诱导细胞凋亡的机制。方法:取处于对数生长期HCT-116细胞和人成纤维细胞HF-91随机分为对照组(PBS组)、阳性药组[25mg·L-1顺铂(DDP)]和PCI组(终浓度分别为25、50和100mg·L-1)。采用CCK8法检测细胞增殖抑制率,AO/EB法荧光显微镜观察细胞凋亡情况,流式细胞术检测JC-1线粒体膜电位变化,qPCR法检测p53和caspase-3mRNA表达水平。结果:与DDP组比较,100mg·L-1 PCI组HCT-116细胞增殖抑制率明显升高(P<0.05),各浓度PCI组HF-91细胞增殖抑制率明显降低(P<0.05),且呈浓度依赖性。与DDP组比较,50和100mg·L-1 PCI组HCT-116细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。与对照组比较,DDP组和不同浓度PCI组HCT-116细胞中caspase-3和p53 mRNA表达水平均明显升高(P<0.05);与DDP组比较,不同浓度PCI组HCT-116细胞中caspase-3mRNA表达水平均明显升高(P<0.05),100mg·L-1 PCI组HCT-116细胞中p53mRNA表达水平明显升高(P<0.05),且呈浓度依赖性。结论:紫薯花青素对消化系统肿瘤细胞具有较强的毒性作用,而对正常细胞毒性较小。 展开更多
关键词 紫薯 花青素 结肠肿瘤 细胞凋亡
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人源化小鼠模型构建和应用的研究进展 被引量：9
2
作者 陈冰 刘昊川 +5 位作者 李龙云 赵国庆 王震 杨永广 李凯 胡正 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期667-674,共8页
人源化小鼠是指带有功能性的人类基因、细胞或组织的小鼠模型,通常被用于人类疾病体内研究的活体替代模型,是利用转基因或同源重组的方法将人类基因"放置"在小鼠模型上所制备的模型,这类小鼠模型在模拟某些人类疾病时有效性... 人源化小鼠是指带有功能性的人类基因、细胞或组织的小鼠模型,通常被用于人类疾病体内研究的活体替代模型,是利用转基因或同源重组的方法将人类基因"放置"在小鼠模型上所制备的模型,这类小鼠模型在模拟某些人类疾病时有效性较高。人源化小鼠模型在艾滋病、癌症、传染病和血液病研究领域等均有广泛的应用。具有人造血免疫系统组成的人源化小鼠模型已经被证明在解码人类疾病奥秘中具有巨大的优势和广泛的应用前景。本文从免疫系统人源化小鼠模型演变的历史过程、具体的分类方法及模型的应用等几个方面进行综述。 展开更多
关键词 人源化小鼠 肿瘤 传染性疾病 自身免疫性疾病
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不同运动负荷对老龄大鼠认知能力及海马组织VEGF/VEGI表达的影响 被引量：3
3
作者 李静 刘忠民 +2 位作者 李海军 王永良 郑妍 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期572-578,共7页
目的:检测不同运动负荷对老龄大鼠认知能力的影响并探讨其可能的机制。方法:40只16月龄雄性Wistar大鼠随机分为4组:即对照组(不游泳)、小负荷组(游泳15 min)、中负荷组(游泳30 min)和大负荷组(游泳60 min)。各负荷组大鼠经8周无负重游... 目的:检测不同运动负荷对老龄大鼠认知能力的影响并探讨其可能的机制。方法:40只16月龄雄性Wistar大鼠随机分为4组:即对照组(不游泳)、小负荷组(游泳15 min)、中负荷组(游泳30 min)和大负荷组(游泳60 min)。各负荷组大鼠经8周无负重游泳训练后,进行八臂迷宫实验观察各组大鼠的行为学表现;运用实时定量PCR和免疫组化实验检测各组大鼠海马神经组织(VEGF)、血管内皮生长抑制因子(VEGI)的表达情况。结果:(1)与对照组相比,大负荷组大鼠的参考记忆错误次数和工作记忆错误次数均显著增多(P <0. 05,P <0.01);中负荷组大鼠各检测指标与对照组相比无统计学差异(P> 0. 05);小负荷组大鼠的工作记忆错误次数和觅食完成时间均显著降低(P <0. 05)。(2)与对照组相比,小负荷组大鼠海马组织VEGF mRNA和蛋白表达水平均显著上调(P <0. 01),VEGI mRNA和蛋白表达水平均显著下调(P <0. 05,P <0. 001);大负荷组大鼠海马组织VEGF mRNA和蛋白表达水平均显著下调(P <0. 01,P <0. 001),VEGI mRNA和蛋白表达水平均上调(P <0. 01,P <0. 001);中等负荷组大鼠海马神经组织VEGF和VEGI mRNA和蛋白的表达水平与对照组相比无统计学差异(P> 0. 05)。结论:小负荷运动有利于改善老龄大鼠的认知能力,中等负荷对此改变不大,而大负荷运动则对于老龄大鼠的认知能力具有损伤作用。其机制可能为小负荷运动能够上调老龄大鼠海马神经组织VEGF表达、下调VEGI表达,促进血管的新生,进而改善海马神经元的增殖;大负荷运动组则表现出了相反的影响趋势。 展开更多
关键词 老龄大鼠 海马组织 认知能力 运动负荷 血管内皮生长因子 血管内皮抑制因子
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新型纳米碳对行腹腔镜膀胱癌根治术患者盆腔淋巴结的示踪效果及其安全性评价 被引量：1
4
作者 马佳男 高宝山 +3 位作者 肖平 张永瑞 吴大威 安伟 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期582-586,I0004,共6页
目的:探讨新型纳米碳(卡纳琳)在腹腔镜膀胱癌根治术(RC)中对患者盆腔淋巴结的示踪效果,阐明其在精准外科治疗中应用的意义。方法:依据术前是否使用卡纳琳将44例行腹腔镜RC患者分为示踪剂组(n=22)和对照组(n=22),2组患者均行腹腔镜下RC... 目的:探讨新型纳米碳(卡纳琳)在腹腔镜膀胱癌根治术(RC)中对患者盆腔淋巴结的示踪效果,阐明其在精准外科治疗中应用的意义。方法:依据术前是否使用卡纳琳将44例行腹腔镜RC患者分为示踪剂组(n=22)和对照组(n=22),2组患者均行腹腔镜下RC联合标准盆腔淋巴结清扫术(LND)。收集并比较2组患者有效性评价指标和安全性评价指标。有效性评价指标包括示踪剂组患者术中淋巴结黑染情况、检出淋巴结总数、淋巴结黑染数、淋巴结黑染率、阳性淋巴结数和手术时间;安全性评价指标包括术中出血量和围手术期相关并发症发生率。结果:示踪剂组患者淋巴结染色效果确切,围手术期未见示踪剂相关不良反应及并发症。与对照组比较,示踪剂组患者淋巴结清除率和检出率均升高(P<0.01),各例患者淋巴结黑染率均高于50%,甚至可达85%;2组患者阳性淋巴结检出数、手术时间、出血量和围手术期相关并发症发生率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:在腹腔镜RC中,应用卡纳琳进行盆腔淋巴结示踪安全且无不良反应,卡纳琳对提高淋巴结的术中清扫率和术后病理检出率均具有重要意义。 展开更多
关键词 淋巴示踪剂 纳米碳混悬注射液 膀胱癌根治术 淋巴结清扫
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人抑癌基因p53与PTEN的CRISPR-Cas9导向RNA靶点筛选与效率验证
5
作者 许文舒 胡正 +1 位作者 杨永广 王晓丹 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期235-242,共8页
目的:探讨应用新兴基因编辑技术规律性成簇的间隔短回文重复序列-核酸酶系统(CRISPR-Cas9)对人体内2个抑癌基因p53与PTEN进行编辑的可行性,并通过体外检测研究其编辑效果,为原代细胞向肿瘤细胞转化及建立人源化小鼠肿瘤模型提供实验研... 目的:探讨应用新兴基因编辑技术规律性成簇的间隔短回文重复序列-核酸酶系统(CRISPR-Cas9)对人体内2个抑癌基因p53与PTEN进行编辑的可行性,并通过体外检测研究其编辑效果,为原代细胞向肿瘤细胞转化及建立人源化小鼠肿瘤模型提供实验研究工具。方法:序列分析确定p53及PTEN基因各亚型mRNA剪辑的共同外显子区域,针对该区域进行软件评分,设计选择针对p53及PTEN基因的CRISPR-Cas9导向RNA(sgRNA)靶点各2个,即p53-1、p53-2、PTEN-1和PTEN-2。构建共表达sgRNA与Cas9-P2A-GFP的CRISPR-Cas9质粒。选择处于对数生长期的293T细胞,将其分为对照组(未转染质粒的野生型293T细胞)和实验组(利用Lipofectamine 2000转染sgRNA-Cas9-P2A-GFP共表达质粒的293T细胞),流式细胞术分选实验组绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞(成功转染质粒的细胞),2周扩增培养后提取基因组DNA,PCR扩增基因组DNA包含突变位点的区段,将扩增产物凝胶电泳后胶回收,连接至pEASY-Blunt Zero克隆载体中,转化,挑取单克隆菌斑培养,提取质粒DNA测序,对比对照组与实验组测序结果后确定RNA介导的特异基因位点突变效率。结果:转染sgRNA-Cas9-P2A-GFP质粒的实验组流式细胞术分选后GFP阳性率高达82%,与分选前(4%)比较明显升高(P<0.05)。对分选培养后的细胞提取基因组PCR,其中包含p53突变位点的扩增片段长度均为612bp,而包含PTEN-1突变位点的扩增片段长度为667bp,包含PTEN-2突变位点的扩增片段长度为947bp。对比实验组基因测序结果与未经sgRNA-Cas9-P2A-GFP质粒转染的对照组野生型细胞测序结果,p53-1、p53-2和PTEN-2诱导的突变效率分别为54.5%、45.5%和33.3%。结论:针对人p53及PTEN基因设计的sgRNA p53-1、p53-2和PTEN-2能够在基因组水平较高效率地成功介导Cas9进行位点特异性的基因编辑。 展开更多
关键词 导向RNA 规律性成簇的间隔短回文重复序列 抑癌基因P53 抑癌基因PTEN 人类
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具有人红细胞重建的人源化小鼠模型构建和应用的研究进展
6
作者 范伟 杨永广 胡正 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期859-863,共5页
人源化小鼠是具有人类基因、细胞、组织和器官的小鼠。具有人造血免疫系统重建的人源化小鼠模型作为唯一能够活体研究人淋巴造血过程和人免疫应答的小动物模型,已经在感染、肿瘤、自身免疫病及异种/异体移植等领域的基础研究和药物开发... 人源化小鼠是具有人类基因、细胞、组织和器官的小鼠。具有人造血免疫系统重建的人源化小鼠模型作为唯一能够活体研究人淋巴造血过程和人免疫应答的小动物模型,已经在感染、肿瘤、自身免疫病及异种/异体移植等领域的基础研究和药物开发中得到广泛应用。然而,普通人源化小鼠的外周血循环中人红细胞的重建缺陷严重限制了其在人红细胞相关疾病(如遗传性贫血和疟疾感染等)研究中的应用。因此开发具有高水平人红细胞稳定重建的人源化小鼠模型是该领域的难点之一。本文作者从人源化小鼠模型的基本情况、模型中人红细胞重建缺失的主要原因和制备具有人红细胞重建的人源化小鼠模型的可行方法等方面进行综述,并对其应用进行阐述。 展开更多
关键词 人源化小鼠 红细胞 巨噬细胞 补体 疟疾 贫血
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基于piggyBac转座子系统构建长期表达人细胞因子的免疫缺陷小鼠模型
7
作者 吕亚楠 范伟 胡正 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期176-181,共6页
目的:探讨表达人白细胞介素6 (IL-6)、白细胞介素3 (IL-3)、白细胞介素15 (IL-15)、干细胞生长因子(SCF)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因的piggyBac (PB)转座子系统在免疫缺陷小鼠体内的长效表达情况,为改善人源化小鼠模型... 目的:探讨表达人白细胞介素6 (IL-6)、白细胞介素3 (IL-3)、白细胞介素15 (IL-15)、干细胞生长因子(SCF)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因的piggyBac (PB)转座子系统在免疫缺陷小鼠体内的长效表达情况,为改善人源化小鼠模型中人免疫细胞的重建提供简单长效的新方法。方法:构建含有绿色荧光蛋白(GFP)基因的PB转座子质粒(PB-GFP),构建含有人IL-6、IL-3、IL-15、SCF和GM-CSF基因的PB转座子质粒(PB-5F)。293T细胞分为阴性对照组(未转染质粒)、阳性对照组(转染pLVTHM质粒)、瞬时转染组(转染PB-GFP质粒)和稳定转染组[共同转染PB-GFP和转座酶质粒(super-PB)]。转染后每3d,采用流式细胞术检测各组细胞中GFP阳性(GFP+)细胞百分率。将NOD.Cg-Prkdcscid IL2rgtm1Wjl/SzJ (NCG)小鼠分为瞬时转染组和稳定转染组,瞬时转染组小鼠尾静脉高压注射PB-5F质粒,稳定转染组小鼠尾静脉高压注射PB-5F质粒和super-PB质粒。小鼠尾静脉高压注射后1、3、5和9d及随后每周1次采血分离血清,ELISA法检测各组NCG小鼠血清中IL-6、IL-3、IL-15、SCF和GM-CSF水平。结果:PB-GFP转染293T细胞30d后,稳定转染组GFP+细胞百分率(4.61%±0.42%)明显高于阳性对照组(0.58%±0.05%)和瞬时转染组(0.86%±0.10%)(P<0.05)。NCG小鼠尾静脉高压注射PB-5F质粒,注射后第30天,稳定转染组小鼠血清中IL-6、IL-15和GM-CSF水平均高于瞬时转染组(P=0.048,P=0.051,P=0.045);注射后第60天,稳定转染组小鼠血清中仍能检测到IL-6、IL-15和GM-CSF。结论:体外验证了PB转座子系统的长效表达,成功构建了具有人IL-6、IL-3、IL-15、SCF和GM-CSF基因的PB转座子载体的质粒,建立了长效稳定表达人IL-6、IL-15和GM-CSF的免疫缺陷小鼠模型。 展开更多
关键词 免疫系统人源化小鼠 白细胞介素6 白细胞介素3 白细胞介素15 干细胞生长因子 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 转座子
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