利用单细胞转录组揭示牛窦卵泡发育微环境异质性及动态调控网络

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作者 田甜 徐鸿 +6 位作者 贾海涛 王琛 刘莹 梁婧虹 张雨晴 袁宝 姜昊 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 北大核心 2025年第5期722-733,共12页

窦卵泡发育调控涉及多层机制,其研究受制于对卵泡真实的微环境及关键分子事件的低效捕捉。本研究利用单细胞RNA测序(single-cell RNA sequencing,scRNA-seq)技术,绘制了常用牛体外胚胎生产的3~8 mm卵泡单细胞图谱,并探讨了卵泡细胞异质... 窦卵泡发育调控涉及多层机制,其研究受制于对卵泡真实的微环境及关键分子事件的低效捕捉。本研究利用单细胞RNA测序(single-cell RNA sequencing,scRNA-seq)技术,绘制了常用牛体外胚胎生产的3~8 mm卵泡单细胞图谱,并探讨了卵泡细胞异质性、差异表达基因、细胞发育分化轨迹及细胞通信等分子特征。结果表明:颗粒细胞、基质细胞、卵泡膜细胞、平滑肌细胞、内皮细胞和免疫细胞6种细胞[细胞标志物分别为抗米勒管激素(anti-Müllerian hormone,AMH)、核心蛋白聚糖(decorin,DCN)、类固醇生成急性调节蛋白(steroidogenic acute regulatory protein,STAR)、ACTA2(actin alpha 2,smooth muscle)、血管性血友病因子(von Willebrand factor,VWF)、CD14]参与构成牛窦卵泡微环境,其中颗粒细胞是驱动窦卵泡发育的关键细胞类群。颗粒细胞的4个亚群[细胞标志物分别为细胞色素P450家族19亚家族A成员1(cytochrome P450 family 19 subfamily A member 1,CYP19A1)、POU类5同源框1(POU class 5 homeobox 1,POU5F1)、着丝粒蛋白F(centromere protein F,CENPF)、成纤维细胞生长因子10(fibroblast growth factor 10,FGF10)]高度异质,并呈现出“信号转导→转录调控→增殖分裂→功能成熟”的分化轨迹,协同抑制素/抑制素βA(inhibin/inhibin beta A,INH/INHBA)及其他免疫调节通路的激活,重塑牛卵泡发育微环境并驱动卵泡选择程序的开启。此外,在单细胞水平上提供了卵泡膜细胞内外层结构分化路径和淋巴内皮细胞存在的分子证据。本研究结果为深入解析牛窦卵泡发育调控机制及优化牛体内外胚胎生产技术体系提供了新视角。 展开更多

关键词 卵泡发育 单细胞转录组学 细胞异质性 颗粒细胞 卵泡微环境 牛

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多囊卵巢综合征胰岛素抵抗研究进展 被引量：17

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作者 谢铁男 岳瑛 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期424-428,共5页

多囊卵巢综合征(PCOS)是一种常见的异质性内分泌疾病,其病因尚不清楚,多数学者认为遗传和环境因素在其发病中起一定作用。PCOS不仅是生殖疾病,而且是一种多系统综合征,流行病学调查显示:PCOS患者发生2型糖尿病、高血压、冠心病、子宫内... 多囊卵巢综合征(PCOS)是一种常见的异质性内分泌疾病,其病因尚不清楚,多数学者认为遗传和环境因素在其发病中起一定作用。PCOS不仅是生殖疾病,而且是一种多系统综合征,流行病学调查显示:PCOS患者发生2型糖尿病、高血压、冠心病、子宫内膜癌等疾病的风险明显增加,胰岛素抵抗及其伴随的高胰岛素血症是PCOS患者重要的病理生理改变,可能在PCOS的发生发展中起关键的作用。 展开更多

关键词 多囊卵巢综合征 胰岛素抵抗 遗传 环境

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多囊卵巢综合征胰岛素抵抗患者Gly^(972) Arg多态性与子宫内膜胰岛素受体底物1表达的关系 被引量：5

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作者 谢铁男 岳瑛 扈聪 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期226-230,共5页

目的:研究多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome,PCOS)胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)患者胰岛素受体底物1(Insulin receptor substrate,IRS-1)基因Gly972Arg多态性与子宫内膜IRS-1表达的关系。方法:PCOS患者51例,用聚合酶链反... 目的:研究多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome,PCOS)胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)患者胰岛素受体底物1(Insulin receptor substrate,IRS-1)基因Gly972Arg多态性与子宫内膜IRS-1表达的关系。方法:PCOS患者51例,用聚合酶链反应(PCR)技术,检测IRS-1Gly972Arg多态性。于月经周期第1天刮取子宫内膜,合并胰岛素抵抗者28例,非胰岛素抵抗者23例,应用免疫组化技术检测子宫内膜IRS-1,计算机图像分析系统分析子宫内膜IRS-1的表达。结果:Gly972Arg多态性:51例PCOS患者中,基因型GG 49例,基因型GA 2例,IR组与无IR组各1例,两组比较无统计学意义。子宫内膜IRS-1的表达:IR组、非IR组IRS-1表达的灰度值分别为131.94±18.39、78.16±6.87,比较有统计学意义(P<0.01)。结论:IRS-1Gly972Arg的突变率较低,其多态性在PCOS IR组与无IR组比较无统计学意义(P>0.05),不影响子宫内膜IRS-1的表达。 展开更多

关键词 多囊卵巢综合征 胰岛素受体底物1基因 胰岛素受体底物1 胰岛素抵抗 多态性

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微柱凝胶免疫检测方法检测血清CA125对卵巢上皮性恶性肿瘤的诊断价值 被引量：4

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作者 潘颖 方红娟 +4 位作者 钟磊 李析蒨 蔡知天 宋波 杜博 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期139-141,共3页

目的:探讨微柱凝胶法检测卵巢恶性肿瘤标志物CA125对卵巢恶性肿瘤的诊断价值,为卵巢恶性肿瘤的诊断及组织类型的鉴别提供一种灵敏、方便的检测方法。方法:选择卵巢上皮性恶性肿瘤Ⅰ-Ⅱ期患者60例,卵巢上皮性恶性肿瘤Ⅲ-Ⅳ期患者70例,卵... 目的:探讨微柱凝胶法检测卵巢恶性肿瘤标志物CA125对卵巢恶性肿瘤的诊断价值,为卵巢恶性肿瘤的诊断及组织类型的鉴别提供一种灵敏、方便的检测方法。方法:选择卵巢上皮性恶性肿瘤Ⅰ-Ⅱ期患者60例,卵巢上皮性恶性肿瘤Ⅲ-Ⅳ期患者70例,卵巢交界性肿瘤患者30例,卵巢良性肿瘤患者25例(卵巢囊肿、黏液性囊腺瘤、浆液性囊腺瘤),无妇产科疾病正常体检妇女70例作为正常对照组,采用微柱凝胶检测法检测上述研究对象血清CA125阳性表达率。结果:正常对照组、卵巢良性肿瘤、卵巢交界性肿瘤、卵巢上皮性恶性肿瘤Ⅰ-Ⅱ期、卵巢上皮性恶性肿瘤Ⅲ-Ⅳ期的血清CA125的阳性率分别为14.3%、24%、30%,81.7%和94.3%,各组织类型卵巢上皮性肿瘤随肿瘤恶性程度的增高其血清CA125阳性表达率逐渐增高,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),卵巢上皮性恶性肿瘤Ⅰ-Ⅱ型和Ⅲ-Ⅳ阳性率与卵巢良性肿瘤的阳性率比较差异具有统计学意义(P<0.01);卵巢上皮性恶性肿瘤Ⅰ-Ⅱ型和Ⅲ-Ⅳ阳性率与卵巢交界性肿瘤阳性率比较差异具有统计学意义(P<0.01);浆液性和黏液性卵巢上皮性恶性肿瘤血清CA125的阳性率分别为76.2%和51.1%,二者比较差异有统计学意义(P<0.01)。微柱凝胶免疫检测方法检测血清CA125诊断卵巢上皮性肿瘤的灵敏度为88.5%,特异度为80%,假阴性率为11.5%,假阳性率为20%,约登指数为0.69,阳性似然比为4.425,阴性似然比为0.14。结论:卵巢恶性肿瘤患者血清CA125水平明显升高,提示微柱凝胶法检测血清CA125对卵巢恶性肿瘤具有较高的诊断价值,可作为一种简便、经济、灵敏的卵巢恶性肿瘤标志物的检测方法。 展开更多

关键词 卵巢肿瘤 肿瘤标志物 微柱凝胶 CA125

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Tip60蛋白在子宫内膜腺癌组织中的表达及其临床意义 被引量：2

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作者 文爱平 罗乐 +3 位作者 孟志伟 金景姬 周洪贵 朱继红 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期1244-1249,共6页

目的:探讨子宫内膜腺癌组织中Tip60蛋白的表达与临床病理特征及预后之间的关系,初步阐明Tip60蛋白在子宫内膜腺癌发生发展过程中的作用。方法:选取子宫内膜腺癌患者84例,采用免疫组织化学SP法检测84例子宫内膜腺癌组织和36例正常子宫内... 目的:探讨子宫内膜腺癌组织中Tip60蛋白的表达与临床病理特征及预后之间的关系,初步阐明Tip60蛋白在子宫内膜腺癌发生发展过程中的作用。方法:选取子宫内膜腺癌患者84例,采用免疫组织化学SP法检测84例子宫内膜腺癌组织和36例正常子宫内膜组织中Tip60蛋白表达水平,分析其与患者临床病理特征之间的关系;采用Kaplan-Meier曲线分析Tip60蛋白的表达与患者预后的关系;采用Western blotting法检测人子宫内膜癌细胞株ISHIKAWA和HEC-1A中Tip60蛋白表达水平。结果:免疫组织化学检测,子宫内膜腺癌组织中Tip60蛋白阳性表达率为54.76%(46/84),明显低于正常子宫组织中Tip60蛋白阳性表达率[83.33%(30/36)](χ^(2)=8.859,P=0.003)。Tip60蛋白表达与患者年龄无关(χ^(2)=1.073,P=0.300);FIGO分期(临床病理分期)中,Ⅰ期子宫内膜腺癌患者癌组织中Tip60蛋白阳性表达率明显高于Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ期患者(χ^(2)=13.481,P=0.001);高分化子宫内膜腺癌患者癌组织中Tip60蛋白阳性表达率明显高于低分化和中分化癌组织的患者(χ^(2)=8.962,P=0.013)。子宫内膜腺癌患者的中位随访时间为58个月,Kaplan-Meier生存分析及Log-rank检验,Tip60蛋白高表达的患者生存率明显高于低表达患者(χ^(2)=64.391,P=0.002)。高表达雌激素受体(ER)的ISHIKAWA细胞中Tip60蛋白表达水平明显高于低表达ER的HEC-1A细胞(P<0.05)。结论:Tip60蛋白在子宫内膜腺癌患者癌组织中和高表达ER的ISHIKAWA细胞中呈低表达,提示其参与子宫内膜腺癌的发生发展,检测组织中Tip60蛋白表达水平有助于子宫内膜腺癌的诊断及评估预后。 展开更多

关键词 Tip60蛋白 子宫内膜癌 临床病理特征 预后 免疫组织化学

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子宫内膜癌组织中hMOF蛋白和mRNA表达及其临床意义 被引量：1

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作者 文爱平 汪海娇 +3 位作者 金景姬 蔡勇 朱继红 谌伦华 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1138-1142,I0014,共6页

目的：探讨子宫内膜癌组织中hMOF蛋白和mRNA的表达,阐明其参与调控子宫内膜癌发生发展的可能机制。方法：采用RT-PCR和免疫组织化学染色方法检测38例子宫内膜腺癌组织及20例正常子宫内膜组织中hMOF蛋白和mRNA的表达,分析hMOF蛋白和mRNA... 目的：探讨子宫内膜癌组织中hMOF蛋白和mRNA的表达,阐明其参与调控子宫内膜癌发生发展的可能机制。方法：采用RT-PCR和免疫组织化学染色方法检测38例子宫内膜腺癌组织及20例正常子宫内膜组织中hMOF蛋白和mRNA的表达,分析hMOF蛋白和mRNA表达水平与子宫内膜腺癌患者的临床病理特征和预后的关系。结果：免疫组织化学染色,子宫内膜腺癌组织中hMOF蛋白阳性表达率低于正常子宫内膜组织（P=0.037）;临床病理分期为Ⅰ期的患者hMOF蛋白阳性表达率高于Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ期患者（χ^2=6.591,P=0.037）;子宫内膜癌低分化患者hMOF蛋白阳性表达率低于中分化和高分化患者（χ^2=7.351,P=0.025）。RT-PCR检测,子宫内膜癌组织中hMOF mRNA表达上调者所占比率明显低于正常子宫内膜组织（P=0.003）。结论：hMOF蛋白可能参与了子宫内膜癌的发生发展过程,有望成为判断子宫内膜癌预后的生物学指标。 展开更多

关键词 乙酰基转移酶类 子宫内膜肿瘤 腺癌 聚合酶链反应 免疫组织化学

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一对一家庭式心理干预对双侧输卵管阻塞患者实施IVF-ET妊娠率的影响 被引量：1

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作者 田甜 王颖超 +1 位作者 姜莹 李美娜 《世界中医药》 CAS 2015年第A01期605-606,共2页

目的对因双侧输卵管阻塞实施体外受精-胚胎移植（IVF-ET）的患者,进行-对-家庭式心理干预,研究其对妊娠成功率的影响.方法：将120 例患者随机分为干预组和对照组各60 例.对照组采用传统健康教育模式进行心理干预;干预组采用一对一家庭... 目的对因双侧输卵管阻塞实施体外受精-胚胎移植（IVF-ET）的患者,进行-对-家庭式心理干预,研究其对妊娠成功率的影响.方法：将120 例患者随机分为干预组和对照组各60 例.对照组采用传统健康教育模式进行心理干预;干预组采用一对一家庭式心理干预模式.结果：两组患者年龄、不孕年限、Gn 用量、Gn 天数、获卵数比较,差异无显著性意义（P〉0.05）;干预组临床妊娠率明显高于对照组（P〈0.05）.结论：一对一家庭式心理干预有利于减轻患者的心理压力;改善不良心理情绪;提高lVF-ET 的临床妊娠率;促进家庭和谐及婚姻幸福;提高患者及家属满意度. 展开更多

关键词 心理干预 双侧输卵管阻塞 体外受精-胚胎移植 妊娠成功率

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自然杀伤细胞联合他莫昔芬对乳腺癌细胞的杀伤作用及其机制 被引量：8

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作者 王迦南 冯辉 +3 位作者 王倩 何悦铭 宋艳秋 朱继红 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期281-287,共7页

目的:通过体外实验观察自然杀伤细胞(NK细胞)联合他莫昔芬(TAM)对乳腺癌细胞(BCC)的协同杀伤作用,初步探讨其作用机制。方法:选用3种受体表达程度不同的BCC,设置空白对照组及TAM各浓度/时间梯度实验组,MTT法检测各组细胞增殖抑制率,并... 目的:通过体外实验观察自然杀伤细胞(NK细胞)联合他莫昔芬(TAM)对乳腺癌细胞(BCC)的协同杀伤作用,初步探讨其作用机制。方法:选用3种受体表达程度不同的BCC,设置空白对照组及TAM各浓度/时间梯度实验组,MTT法检测各组细胞增殖抑制率,并确定最终实验浓度为5μmol·L-1。设自然释放组、最大释放组、TAM组、NK细胞组和联合实验组(BCC+NK细胞+TAM),钙黄绿素-AM释放法观察不同效靶比下两者的联合杀伤作用。设空白对照组(NK细胞)、NK细胞+TAM组、NK细胞+BCC组和联合实验组,ELISA法检测各组NK细胞中TNF-α和IFN-γ水平。设空白对照组(NK细胞)、NK细胞+TAM组、NK细胞+BCC组和联合实验组,流式分析法分别检测NK活化性受体(NKp46)、NK抑制性受体(CD158a、CD158b、CD158b2和CD158e)表达水平。设空白对照组(BCC)、BCC+TAM组、BCC+NK细胞组和联合实验组,流式细胞术检测各组细胞中活化性配体(MICA、ULBP1和ULBP2)的表达水平。结果:MTT法检测,TAM对3种BCC的增殖抑制率具有明显的时间和浓度依赖性(P<0.05)。钙黄绿素-AM释放法检测,随着效靶比的增加,与NK细胞组比较TAM组BCC杀伤率明显升高(P<0.01),且联合组杀伤率明显高于NK细胞组和TAM组(P<0.05)。ELISA法检测,与空白对照组比较,各实验组无论有无BCC存在,NK细胞中分泌TFN-α和IFN-γ水平均升高(P<0.05或P<0.01),且与TAM联合后TFN-α和IFN-γ水平明显升高(P<0.05)。流式细胞术检测,与空白对照组比较,各实验组NK细胞中NKp46表达水平均升高(P<0.05);各实验组NK细胞中CD158a、CD158b、CD158b2和CD158e表达水平均明显下降(P<0.05);各实验组BCC中MICA、ULBP1和ULBP2表达水平均明显升高(P<0.05)。结论:NK细胞与TAM联合体外杀伤BCC具有协同作用,其协同作用机制可能为TAM能够通过促进NK细胞分泌TNF-α和IFN-γ而增强其杀伤能力;通过增加NK细胞活化性受体和活化性配体表达水平、降低NK细胞抑制性受体表达水平,进而增加NK细胞的杀伤能力。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤 他莫昔芬 内分泌治疗 免疫治疗

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Ki-67和BRAF基因突变与甲状腺乳头状癌侵袭性关系的研究进展 被引量：3

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作者 徐烁 孟宪瑛 +4 位作者 逄仁柱 杨帅 韩佳滨 孙旭 朱继红 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1259-1262,共4页

甲状腺乳头状癌(PTC)是最常见的甲状腺恶性肿瘤,近年来发病率呈明显上升趋势。Ki-67是与细胞增殖相关的核抗原,鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1(BRAF)基因所表达的蛋白参与细胞的增殖分化和凋亡,Ki-67及BRAF基因突变均可影响细胞周期的... 甲状腺乳头状癌(PTC)是最常见的甲状腺恶性肿瘤,近年来发病率呈明显上升趋势。Ki-67是与细胞增殖相关的核抗原,鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1(BRAF)基因所表达的蛋白参与细胞的增殖分化和凋亡,Ki-67及BRAF基因突变均可影响细胞周期的调控及肿瘤的发生发展。本文就Ki-67和BRAF基因突变在PTC发生发展中的作用及其对肿瘤侵袭性、临床诊断及预后方面的影响进行综述。 展开更多

关键词 KI-67 鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1基因 基因突变 甲状腺 癌 乳头状 甲状腺肿瘤

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妊娠期糖尿病对新生子代大鼠膈肌功能的影响 被引量：2

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作者 张瑞丽 杨筱青 +2 位作者 张晓鸽 郭华峰 朱继红 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期133-138,共6页

目的:探讨妊娠期糖尿病(GDM)对新生子代大鼠膈肌功能和氧化应激水平的影响,阐明其可能作用机制。方法:44只怀孕的8周龄SD雌性大鼠随机分为正常对照组和GDM模型组。妊娠第1天,GDM组大鼠单次腹腔注射35 mg·kg^-1链脲佐菌素(STZ),建立... 目的:探讨妊娠期糖尿病(GDM)对新生子代大鼠膈肌功能和氧化应激水平的影响,阐明其可能作用机制。方法:44只怀孕的8周龄SD雌性大鼠随机分为正常对照组和GDM模型组。妊娠第1天,GDM组大鼠单次腹腔注射35 mg·kg^-1链脲佐菌素(STZ),建立GDM大鼠模型(建模成功18只);正常对照组大鼠单次腹腔注射相同体积的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。分娩后,体外检测2组新生子代大鼠的膈肌收缩力,免疫荧光法检测子代大鼠膈肌纤维横截面积,常规HE染色观察子代大鼠膈肌病理形态表现,透射电镜下观察子代大鼠膈肌超微结构,采用试剂盒检测子代大鼠膈肌组织中丙二醛(MDA)和羰基化蛋白水平及超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性。结果:体外膈肌收缩力检测,与正常对照组比较,GDM组子代大鼠膈肌最大紧张收缩力、最大强直收缩力和不同刺激频率下的膈肌收缩力均明显降低(P<0.05),膈肌疲劳指数明显升高(P<0.05)。免疫荧光法检测,与正常对照组比较,GDM组子代大鼠膈肌组织中Ⅰ型和Ⅱ型膈肌纤维横截面积均明显缩小(P<0.05)。HE染色,2组子代大鼠膈肌纤维结构完整,排列整齐、致密,膈肌细胞无明显肿胀,细胞核染色清晰。透射电镜下观察,正常对照组子代大鼠膈肌纤维排列整齐,明暗带及“Z”线规整且清晰可见,线粒体结构完整,嵴成隔板状,清晰可见;GDM组子代大鼠膈肌纤维明暗带及“Z”线无规则排列或消失,线粒体数量减少,更多线粒体出现凋亡呈空泡化。与正常对照组比较,GDM组子代大鼠膈肌组织中MDA和羰基化蛋白水平均明显升高(P<0.05),SOD和CAT活性明显降低(P<0.05)。结论:GDM可引起子代大鼠膈肌收缩力降低、纤维横截面积减小和超微结构改变,而氧化应激水平的升高是影响其膈肌功能的原因之一。 展开更多

关键词 妊娠期糖尿病 大鼠 新生子代 膈肌 氧化应激

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多重PCR检测唾液标本中的幽门螺杆菌16S rRNA及cagA基因 被引量：12

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作者 王鑫莹 孙丽媛 +5 位作者 杨志平 宋顺佳 李南 刘悦 田婉佳 赵云冬 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1816-1821,共6页

目的检测唾液标本幽门螺杆菌(Hp)的16S rRNA基因及cagA基因,了解消化道疾病患者口腔中Hp存在情况及致病情况。方法利用生物学信息技术,设计Hp 16S rRNA、cagA基因特异性引物,建立检测Hp 16S rRNA、cagA基因的多重PCR方法;重组克隆质粒... 目的检测唾液标本幽门螺杆菌(Hp)的16S rRNA基因及cagA基因,了解消化道疾病患者口腔中Hp存在情况及致病情况。方法利用生物学信息技术,设计Hp 16S rRNA、cagA基因特异性引物,建立检测Hp 16S rRNA、cagA基因的多重PCR方法;重组克隆质粒构建标准阳性对照品;收集156例消化道疾病患者的唾液标本,提取唾液标本中细菌DNA,应用建立的多重PCR方法,检测Hp 16S rRNA基因及cagA基因,并对结果进行分析。结果建立的检测Hp 16S rRNA基因及cagA基因的多重PCR方法特异性强,灵敏性较高,最低检测线为10^(3) copies·μL^(-1);重组质粒pGMT-16s和pGMT-cagA,可作为鉴定Hp的标准阳性对照品;检测Hp感染的消化道疾病患者的唾液标本,口腔携带Hp 16S rRNA基因的阳性率为87.2%,cagA基因阳性率为23.1%。结论Hp感染的消化道疾病患者口腔唾液标本中存在Hp,口腔中存在Hp可能是诱发消化道Hp感染及治疗后复发的一个重要原因。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 16S rRNA基因 CAGA基因 唾液

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