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提高病理生理学教学水平与能力的思考 被引量:3
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作者 李峰 李扬 +1 位作者 孙连坤 康劲松 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期2257-2257,共1页
关键词 病理生理学 教学水平 能力 医学高等教育 课堂教学模式 教育思想观念 教学方法 高素质人才
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RNAi沉默Beclin 1基因对维生素K_3损伤人肝癌细胞SMMC-7721的影响 被引量:3
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作者 杨闯 张宏宇 +2 位作者 孔晓霞 王广义 孙连坤 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期1288-1291,共4页
目的:探讨应用RNAi技术沉默Beclin1基因对维生素(vitamin K3,VitK3)引起的人肝癌SMMC-7721细胞损伤的影响。方法:应用真核细胞转染技术将Psilencer3.1-siRNA-Beclin1重组质粒转入人肝癌SMMC-7721细胞,同时分别设立转染空质粒阴性对照组... 目的:探讨应用RNAi技术沉默Beclin1基因对维生素(vitamin K3,VitK3)引起的人肝癌SMMC-7721细胞损伤的影响。方法:应用真核细胞转染技术将Psilencer3.1-siRNA-Beclin1重组质粒转入人肝癌SMMC-7721细胞,同时分别设立转染空质粒阴性对照组和转染试剂阴性对照。于48h后收集细胞,分别提取细胞总RNA及总蛋白,通过RT-PCR和Western blotting检测Beclin1基因表达。应用40μmol/LVitK3作用Beclin1-siRNA细胞株,Hoechst33342染色检测细胞凋亡率。结果:与对照组相比,siRNA重组质粒明显降低Beclin1 mRNA水平,抑制其蛋白表达。40μmol/LVitK3作用人肝癌SMMC-7721细胞Beclin1 mRNA表达明显高于对照组,细胞凋亡率增加(P<0.01);而Beclin1-siRNA细胞株,Beclin1 mRNA表达显著低于对照组,与40μmol/LVitK3作用组相比细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论:Psilencer3.1-siRNA-Beclin1转染人肝癌SMMC-7721细胞后,可有效抑制Beclin-1 mRNA和蛋白的表达,抑制VitK3引起的Beclin1依赖性细胞自噬信号通路的激活,促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 RNA干扰 基因 BECLIN 1 自吞噬作用 细胞凋亡 维生素K3 SMMC-7721细胞
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NPPB和尼弗灭酸对H_2O_2损伤C6胶质细胞谷氨酸半胱氨酸合成酶及CLIC4表达的影响 被引量:2
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作者 孔晓霞 张宏宇 +3 位作者 李扬 李洪岩 康劲松 孙连坤 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1962-1965,共4页
目的:观察氯通道阻断剂5-硝基-2-(3-苯丙胺)-苯甲酸(NPPB)、尼弗灭酸(NFA)对H2O2诱导的神经胶质瘤C6细胞损伤的影响。方法:MTT法检测NPPB、NFA、H2O2作用的C6细胞生存率;紫外分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率以及谷胱甘肽GSH水平;RT... 目的:观察氯通道阻断剂5-硝基-2-(3-苯丙胺)-苯甲酸(NPPB)、尼弗灭酸(NFA)对H2O2诱导的神经胶质瘤C6细胞损伤的影响。方法:MTT法检测NPPB、NFA、H2O2作用的C6细胞生存率;紫外分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率以及谷胱甘肽GSH水平;RT-PCR检测谷氨酸半胱氨酸合成酶(GCL)亚单位GCLC、GCLM及线粒体氯通道(CLIC4)mRNA表达;Western blotting检测CLIC4的蛋白水平。结果:与对照组相比,H2O2组C6细胞存活率和GSH含量明显降低;LDH释放率增加;GCLC、GCLM、CLIC4 mRNA表达降低;CLIC4蛋白水平明显增强。NPPB或NFA与H2O2联合作用于C6细胞组,与单独应用H2O2组相比,细胞存活率和GSH含量未见明显变化;LDH释放率降低;GCLC、GCLM mRNA表达未见明显差异;CLIC4蛋白表达下降。结论:氯通道阻断剂NPPB或NFA能够在一定程度上减轻氧化应激引起的C6细胞损伤,可能与调节细胞膜功能和下调CLIC4蛋白表达有关。 展开更多
关键词 谷氨酸-半胱氨酸连接酶 苯甲酸盐类 尼氟灭酸 线粒体氯通道 C6胶质细胞 过氧化氢
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雌激素受体2对前列腺癌细胞系PC-3M增殖的影响 被引量:2
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作者 李峰 李帅 +4 位作者 郭丽荣 邵月婷 汲坤 李扬 赵雪俭 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期656-660,共5页
目的:构建带有人雌激素受体2(ESR2)全长cDNA的重组质粒pcDNA3.1-hERβ,转染人前列腺癌PC-3M细胞株,观察ESR2对细胞增殖能力的影响。方法:RT-PCR方法从人正常卵巢组织中获取ESR2全长cDNA,利用基因重组技术与真核表达载体pcDNA3.1连接,构... 目的:构建带有人雌激素受体2(ESR2)全长cDNA的重组质粒pcDNA3.1-hERβ,转染人前列腺癌PC-3M细胞株,观察ESR2对细胞增殖能力的影响。方法:RT-PCR方法从人正常卵巢组织中获取ESR2全长cDNA,利用基因重组技术与真核表达载体pcDNA3.1连接,构建重组质粒pcDNA3.1-hERβ;瞬时转染前列腺癌PC-3M细胞株,应用细胞计数、MTT法及流式细胞术检测细胞增殖能力的改变;半定量RT-PCR法及Westernblotting法分别检测增殖相关基因cyclinD1和P21Cip1mRNA及蛋白表达。结果:DNA测序结果显示扩增的ESR2序列与GenBank(NM_001437)所公布的序列完全一致。重组质粒pcDNA3.1-hERβ瞬时转染人PC-3M细胞48 h后,与质粒对照组相比:RT-PCR法及Western blotting法显示,ESR2基因在mRNA水平和蛋白水平的表达均明显增加;细胞计数及MTT结果发现,细胞数目减少,细胞增殖活性下降(P<0.01);流式细胞实验显示,G0/G1期细胞比例增加(P<0.05),S期及G2/M期细胞比例减少(P<0.05);RT-PCR及Western blotting结果还发现cyclinD1的表达减弱,而P21Cip1的表达增强。结论:成功构建pcDNA3.1-hERβ重组质粒;带有ESR2全长基因的重组质粒转染PC-3M细胞后,细胞的增殖活性受到抑制;RSR2可能通过影响细胞增殖相关基因cyclinD1和P21Cip1的表达抑制细胞的增殖。 展开更多
关键词 受体 雌激素 PC-3M细胞 真核表达
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寰枢椎周围软组织损伤对小鼠记忆能力的影响 被引量:1
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作者 朱彤彤 韩向北 +2 位作者 郭亚雄 李德龙 赵丽娟 《中国康复理论与实践》 CSCD 2008年第10期930-931,F0003,共3页
目的观察寰枢椎周围软组织损伤对小鼠学习记忆能力的影响。方法44只小鼠随机分为模型组和对照组,各22只。模型组小鼠利用手术方法破坏寰枢椎周围软组织建立颈椎稳定性异常病理模型;采用水迷宫试验、跳台试验和洞板试验测试其学习、记忆... 目的观察寰枢椎周围软组织损伤对小鼠学习记忆能力的影响。方法44只小鼠随机分为模型组和对照组,各22只。模型组小鼠利用手术方法破坏寰枢椎周围软组织建立颈椎稳定性异常病理模型;采用水迷宫试验、跳台试验和洞板试验测试其学习、记忆能力;HE染色观察脑海马细胞数量;免疫组织化学染色观察脑海马caspase-3的表达。结果与对照组相比,模型组小鼠水迷宫试验中游全程时间和错误次数明显增加(P<0.01);跳台试验中模型组小鼠反应期明显延长,潜伏期明显缩短,错误次数明显增加(P<0.01);洞板试验中模型组小鼠潜伏期延长,探洞次数明显减少(P<0.01)。HE染色模型组小鼠脑海马可见明显散在的或连续的神经细胞变性、死亡;免疫组织化学染色显示模型组小鼠脑海马caspase-3蛋白呈阳性表达。结论寰枢椎周围软组织损伤可致颈椎稳定性异常而促进小鼠脑细胞凋亡,导致学习、记忆功能明显减退。 展开更多
关键词 软组织 学习记忆 寰枢椎关节
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钙转运蛋白基因siRNA表达载体的构建及鉴定
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作者 杨新宇 张雷 +3 位作者 郑花 康劲松 李洪岩 房学东 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期257-259,262,共4页
目的:构建针对钙转运蛋白(CaT1)特异性干扰RNA(siRNA)及其表达载体,并检测其对CaT1基因的干扰作用。方法:设计CaT1靶向的发夹状siRNA,合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pSilencer3·1-H1载体,转化扩增后进行序列测定。用脂质... 目的:构建针对钙转运蛋白(CaT1)特异性干扰RNA(siRNA)及其表达载体,并检测其对CaT1基因的干扰作用。方法:设计CaT1靶向的发夹状siRNA,合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pSilencer3·1-H1载体,转化扩增后进行序列测定。用脂质体转染法转染人类胃癌细胞BGC,通过RT-PCR检测CaT1基因表达水平的变化。结果:酶切鉴定与DNA测序分析证明CaT1基因的siRNA载体构建正确,RT-PCR结果表明CaT1基因的表达水平明显降低。结论:成功地构建了针对CaT1基因的siRNA载体,转染细胞后可抑制CaT1基因表达。 展开更多
关键词 SIRNA RNA干扰 钙转运蛋白 人胃癌细胞株BGC-823
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水通道蛋白3在人前列腺组织中的表达及意义
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作者 赵丹 朱建国 +2 位作者 王伟华 杨宝学 赵雪俭 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期2000-2003,共4页
目的:揭示水通道蛋白3(AQP3)在人前列腺移行区和外周区的表达及意义,为深入探讨AQP在人前列腺及疾病状态下的表达及生理作用奠定基础。方法:取前列腺组织标本5例,采用RT-PCR方法检测AQP3mRNA在前列腺组织的表达。同时应用Western blott... 目的:揭示水通道蛋白3(AQP3)在人前列腺移行区和外周区的表达及意义,为深入探讨AQP在人前列腺及疾病状态下的表达及生理作用奠定基础。方法:取前列腺组织标本5例,采用RT-PCR方法检测AQP3mRNA在前列腺组织的表达。同时应用Western blotting和免疫染色技术研究AQP3蛋白在前列腺组织的定位表达。结果:RT-PCR结果显示在前列腺的移行区和外周区均存在AQP3 mRNA表达。Western blotting结果显示人前列腺的移行区和外周区均特异表达AQP3蛋白,且移行区表达强于外周区。免疫组织化学和免疫荧光染色结果表明AQP3表达在前列腺移行区分泌细胞的细胞膜。结论:前列腺移行区分泌细胞表达AQP3提示,AQP3在前列腺液分泌过程中可能发挥重要的生理作用。 展开更多
关键词 前列腺 水通道蛋白3
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共表达siRNA-VEGF与p53质粒治疗前列腺癌的体内研究
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作者 刘亚男 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第A10期2013-2013,共1页
关键词 P53 siRNA-VEGF 体内研究 减毒沙门氏菌 抑瘤效果 移植瘤模型 caspase 运载体
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