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姜黄素及姜黄素衍生物A在大鼠血浆中含量的测定
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作者 杨苹 隋思博 +4 位作者 王艳芳 杨晶 张敏 李校堃 郑琳 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期598-602,共5页
目的:建立大鼠血浆中姜黄素及姜黄素衍生物A的高效液相色谱(HPLC)测定方法,研究其在大鼠体内的药物动力学,为姜黄素的临床应用提供参考。方法:将姜黄素及姜黄素衍生物A分别灌胃给药,采用HPLC测定其在大鼠血浆中的血药浓度,色谱柱为Hyper... 目的:建立大鼠血浆中姜黄素及姜黄素衍生物A的高效液相色谱(HPLC)测定方法,研究其在大鼠体内的药物动力学,为姜黄素的临床应用提供参考。方法:将姜黄素及姜黄素衍生物A分别灌胃给药,采用HPLC测定其在大鼠血浆中的血药浓度,色谱柱为Hypersil ODS2C18(5μm×4.6mm×200mm);柱温:30℃;姜黄素流动相,乙腈-水-乙酸(体积比45∶55∶1),姜黄素检测波长为420nm;姜黄素衍生物A流动相,乙腈-水-乙酸(体积比70∶30∶1);体积流量为1.0mL.min-1;姜黄素衍生物A检测波长为361nm。结果:姜黄素及姜黄素衍生物A在0.25~100.00 mg.L-1范围内与峰面积呈良好的线性关系,姜黄素回归方程为Y=105.90X-22.70,r=0.999 6;姜黄素衍生物A回归方程为Y=71.20X+24.62,r=0.999 4。两者日内、日间精密度RSD均小于4%,平均回收率均大于96%;大鼠灌胃给药后的药动学行为符合单室模型,姜黄素衍生物A的清除率比姜黄素显著降低,约是姜黄素清除率的3.57倍,曲线下面积是姜黄素的4.09倍,半衰期t1/2约为姜黄素的2.79倍。结论:HPLC测定姜黄素及姜黄素衍生物A在大鼠体内血药浓度的方法准确、简单可行、重复性好,为提高姜黄素在体内的稳定性,延长其在体内半衰期提供了依据。 展开更多
关键词 姜黄素 姜黄素衍生物 药物动力学 高效液相色谱法
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一种新型具有纤溶活性的沙蚕金属蛋白酶的分离纯化及鉴定 被引量:13
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作者 邓志会 孙贺 +3 位作者 林岩 王国忠 金莉 洪敏 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期768-774,共7页
通过硫酸铵分级盐析、DEAE-Sepharose FF阴离子交换色谱、CM-Sepharose FF阳离子交换色谱和Sephacryl S-100 HR凝胶过滤色谱,从沙蚕体内分离纯化出一种新型的具有纤溶活性的金属蛋白酶,命名为NVMP.采用SDS-PAGE和MALDI-TOF MS质谱检测,... 通过硫酸铵分级盐析、DEAE-Sepharose FF阴离子交换色谱、CM-Sepharose FF阳离子交换色谱和Sephacryl S-100 HR凝胶过滤色谱,从沙蚕体内分离纯化出一种新型的具有纤溶活性的金属蛋白酶,命名为NVMP.采用SDS-PAGE和MALDI-TOF MS质谱检测,该酶是一种分子质量为28~32 kD的单链蛋白,等电聚焦电泳显示其等电点为8.0.NVMP酶活性被EGTA完全性抑制,表明其是一种典型的金属蛋白酶,最适温度为40℃,最适pH为6,Cu2+、Co2+和Zn2+可阻断其酶活性,而Ca2+和Mg2+可增强蛋白酶活性.经肽指纹图谱分析发现,NVMP是一种未知的新蛋白.NVMP可直接水解纤维蛋白,也可通过激活纤溶酶原转变成纤溶酶的方式,间接水解纤维蛋白.因此,NVMP对预防和治疗血栓性疾病具有一定的药用价值. 展开更多
关键词 沙蚕 金属蛋白酶 纯化与鉴定 纤维蛋白水解活性
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重组截短型人角质细胞生长因子1在昆虫细胞中的表达 被引量:2
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作者 薛萍 朱小静 +4 位作者 刘孝菊 李一兰 南佳 姜潮 李校堃 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期633-639,共7页
目的:探讨重组截短型人角质细胞生长因子1(rhKGF1D23)蛋白在昆虫细胞中表达的可行性,为rhKGF1D23蛋白的生产提供新的途径。方法:PCR法扩增昆虫偏爱密码子优化截短序列kgf1d23亚克隆到pFastbac载体。在辅助质粒的作用下,pFastBac-kgf1d2... 目的:探讨重组截短型人角质细胞生长因子1(rhKGF1D23)蛋白在昆虫细胞中表达的可行性,为rhKGF1D23蛋白的生产提供新的途径。方法:PCR法扩增昆虫偏爱密码子优化截短序列kgf1d23亚克隆到pFastbac载体。在辅助质粒的作用下,pFastBac-kgf1d23载体Tn7片段转座到Bacmid中mini-attTn7位点,得到穿梭载体Bacmid-kgf1d23,并通过脂质体法转染sf-9细胞得到杆状病毒P1。继续转染细胞扩增病毒并提高病毒滴度,蛋白表达分析从P3代病毒转染细胞开始,收集细胞超声裂解后进行纯化,MTT法检测纯化后目的蛋白生物活性。结果:昆虫偏好密码子改造的kgf1d23基因构建进转移载体pFastBac-kgf1d23和穿梭载体Bacmid-kgf1d23载体中。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白在60h后开始大量表达,优化的收获蛋白时间在84~96h;利用肝素亲和层析和SP阳离子交换层析可以去除90%以上的杂蛋白。纯化的rhKGF1D23蛋白在0.3~25.0μg.L-1时,随浓度的增加HaCat细胞的促有丝分裂能力增强,在25.0μg.L-1时达到平台期。结论:重组截短型角质细胞生长因子rhKGF1D23蛋白在昆虫细胞中得到表达,保持其特有的肝素亲和特性,并具有免疫原性及细胞生物学活性。 展开更多
关键词 角质细胞生长因子1 截短突变 sf-9细胞 杆状病毒系统
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pICln蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定
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作者 李晓梅 李俐 +2 位作者 马颖哲 郗艳丽 张蒙 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期640-643,共4页
目的:制备特异性的抗pICln蛋白的单克隆抗体(McAb),为pICln的纯化及检测等提供必要的工具。方法:以pICln的合成肽为免疫原,对BALB/c小鼠注射免疫,将免疫鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞NS-1进行细胞融合,用显微镜下挑选单个克隆的克隆化方法... 目的:制备特异性的抗pICln蛋白的单克隆抗体(McAb),为pICln的纯化及检测等提供必要的工具。方法:以pICln的合成肽为免疫原,对BALB/c小鼠注射免疫,将免疫鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞NS-1进行细胞融合,用显微镜下挑选单个克隆的克隆化方法克隆化,用间接ELISA检测法进行筛选。单抗的效价、亚型及特异性用ELISA、免疫双向扩散实验和Western blot等检测。结果:获得了稳定的分泌型杂交瘤细胞株大2B7和4A3,2B7培养上清液单抗效价为1∶64,属IgG1亚型,其腹水抗体效价及纯化抗体的效价分别为1∶1.28×104、1∶6.4×103,Western blot及免疫耗竭实验呈现一条约40kD的特异性带,免疫组织化学染色显示在细胞核和细胞质中呈现阳性反应。结论:本次制备的单抗具有特异性、高效价,可应用于pICln蛋白的纯化及检测等研究。 展开更多
关键词 pICAn 合成肽 单克隆抗体 WESTERN BLOT
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