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肠出血性大肠埃希菌O157噬菌体的生物学特性 被引量:8
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作者 刘悦 李菁华 +2 位作者 史红艳 温剑平 孙延波 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期79-83,共5页
目的:分离并鉴定肠出血性大肠埃希菌O157噬菌体,对其生物学特性进行研究,为开发抗肠出血性大肠埃希菌O157的生物制剂提供实验依据。方法:以肠出血性大肠埃希菌O157为宿主菌,采用噬斑法从环境污水中分离出针对肠出血性大肠埃希菌O157的... 目的:分离并鉴定肠出血性大肠埃希菌O157噬菌体,对其生物学特性进行研究,为开发抗肠出血性大肠埃希菌O157的生物制剂提供实验依据。方法:以肠出血性大肠埃希菌O157为宿主菌,采用噬斑法从环境污水中分离出针对肠出血性大肠埃希菌O157的噬菌体。噬菌体经超滤浓缩后,电镜观察其大小和形态;将宿主菌和噬菌体以不同的比例混合,测定噬菌体的最佳感染复数并观察其一步生长曲线;利用SDS-PAGE分析噬菌体的结构蛋白和非结构蛋白;提取噬菌体基因组,进行酶切电泳分析。结果:电镜显示噬菌体的头部呈球形、直径40nm,噬菌体的尾部长约80nm。噬菌体的最佳感染复数为10-2,即当宿主菌和噬菌体之间的比例为1∶100时裂解效率最高。一步生长曲线示噬菌体在裂解宿主菌时,潜伏期约为10min,爆发期约为30min,裂解量为130。SDS-PAGE凝胶电泳呈现13种蛋白,相对分子质量为16 000~22 000。琼脂糖凝胶电泳显示噬菌体基因组大小约23 000bp。结论:成功分离并鉴定一株针对肠出血性大肠埃希菌O157的噬菌体,是一种裂解性强、特异性高的毒性噬菌体,肠出血性大肠埃希菌O157噬菌体属于有尾病毒目,管尾噬菌体科。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌O157 噬菌体 最佳感染复数
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人乳腺癌疫苗HSP65-HER2联用CpG684的抗肿瘤作用
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作者 吴秀丽 颜游游 +4 位作者 宋丹丹 付尧 华立 王丽颖 王华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期989-991,共3页
目的:检测人乳腺癌融合蛋白疫苗HSP65-HER2联用CpG684的抗肿瘤效果。方法:C57BL/6小鼠分别皮下注射PBS,CpG684,HSP65-HER2和CpG684混合物,一周一次,共三次,随后给小鼠腹腔接种7.5×104个转染了pcDNA3-GFP-HER2质粒的B16肿瘤细胞(HER... 目的:检测人乳腺癌融合蛋白疫苗HSP65-HER2联用CpG684的抗肿瘤效果。方法:C57BL/6小鼠分别皮下注射PBS,CpG684,HSP65-HER2和CpG684混合物,一周一次,共三次,随后给小鼠腹腔接种7.5×104个转染了pcDNA3-GFP-HER2质粒的B16肿瘤细胞(HER2+B16),监测各组小鼠的生存期至接种肿瘤后70天。结果:免疫了HSP65-HER2和CpG684的小鼠在接种肿瘤后70天时,仍有80%存活,而GpG684组的小鼠仅有10%存活,PBS组小鼠在接种肿瘤后36天后全部死亡。与PBS和CpG684对照组相比,免疫了HSP65-HER2和CpG684的小鼠的生存期显著延长(P<0.01)。结论:HSP65-HER2联用CpG684在体内发挥了强大的抗肿瘤活性,为进一步的临床研究和应用奠定了基础。 展开更多
关键词 热休克蛋白65 HER2 CPGODN 乳腺癌 抗肿瘤
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结核杆菌CFP-10蛋白的原核表达、纯化及抗血清制备
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作者 杨明 颜游游 +2 位作者 房明丽 王丽颖 吴秀丽 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1002-1005,共4页
目的:获得原核表达及纯化结核杆菌CFP-10蛋白及其抗血清。方法:从H37RV结核杆菌基因组中扩增得到CFP-10的编码基因,通过原核表达系统(BL21-pET28a+)表达及镍亲和层析和Q sepharose阴离子交换层析获得内毒素合格的CFP-10蛋白。将此蛋白... 目的:获得原核表达及纯化结核杆菌CFP-10蛋白及其抗血清。方法:从H37RV结核杆菌基因组中扩增得到CFP-10的编码基因,通过原核表达系统(BL21-pET28a+)表达及镍亲和层析和Q sepharose阴离子交换层析获得内毒素合格的CFP-10蛋白。将此蛋白免疫家兔,获得抗CFP-10的抗血清,并通过间接ELISA的方法检测其抗体滴度。结果:重组质粒pET28a-CFP-10构建成功,其编码的蛋白在BL21中获得了高效表达,且经纯化获得了内毒素合格的CFP-10蛋白,免疫家兔获得的抗血清效价能达到1∶256 000。结论:成功的表达及纯化了CFP-10蛋白,并制备了高滴度的CFP-10抗血清,为临床血清学检测以及新型结核疫苗研究奠定基础。 展开更多
关键词 结核病 CFP-10 T细胞抗原 抗血清
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人乳头瘤病毒16型E7基因原核表达载体的构建及表达
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作者 徐丽娟 温剑平 +1 位作者 史红艳 孙延波 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期661-664,共4页
目的:构建人乳头瘤病毒16型(HPV-16)E7基因原核表达载体,观察目的基因的蛋白表达。方法:人工合成HPV16E7基因核苷酸序列,利用特异性引物通过聚合酶链反应扩增HPV16E7基因,并克隆至pGEX-4T1原核表达载体,构建重组表达载体pGEX-4T1-HPV16... 目的:构建人乳头瘤病毒16型(HPV-16)E7基因原核表达载体,观察目的基因的蛋白表达。方法:人工合成HPV16E7基因核苷酸序列,利用特异性引物通过聚合酶链反应扩增HPV16E7基因,并克隆至pGEX-4T1原核表达载体,构建重组表达载体pGEX-4T1-HPV16-E7。将其转化到工程菌Rosetta后,经IPTG诱导表达,进行E7-GST融合蛋白的SDS-PAGE分析和Ni 2+-NTA亲和层析纯化。结果:E7基因PCR扩增产物和重组表达质粒的双酶切产物经琼脂糖凝胶电泳,均可见300bp的目的基因条带。表达的重组蛋白经SDS-PAGE电泳和纯化后,在相对分子质量约36 000处有特异性表达带,与预期相符。结论:在原核系统中含E7基因的重组质粒可有效表达E7-GST融合蛋白。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒16型 聚合酶链式反应 原核表达载体
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