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A Single-chain Antibody for One-pot Fabrication of Luminescent Gold Nanoclusters and Rabies Virus Imaging in Cells
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作者 ZHANG Chunxia XI Hualong +4 位作者 SUN Bo WU Yongge JIANG Chunlai YU Xianghui WU Yuqing 《发光学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1732-1740,共9页
The fragile antibody leads to a great challenge as a scaffold to fabricate the luminescent metal nanoclusters using one-pot method.This study presents a stable single-chain anti-body(scFv57R-ATS)for the fabrication of... The fragile antibody leads to a great challenge as a scaffold to fabricate the luminescent metal nanoclusters using one-pot method.This study presents a stable single-chain anti-body(scFv57R-ATS)for the fabrication of luminescent gold nanoclusters(AuNCs@scFv57R-ATS)and a quick,sensitive rabies virus detection in living cells.In this paper,AuNCs@scFv57R-ATS was designed to specifically recognize antigen RV in modified HeLa cells,which promoted the demonstration of metal nanocluster fluorescent probes for antigen targeting and therapy. 展开更多
关键词 gold nanoclusters scFv57R-ATS rabies virus
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Tat-GFP融合蛋白的表达纯化及其穿膜活性 被引量:6
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作者 关新刚 苏维恒 +2 位作者 于欣 佟海滨 孙新 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期725-728,I0001,共5页
目的:获得具备穿膜活性与绿色荧光蛋白(GFP)标记的Tat-GFP融合蛋白,探讨Tat-GFP在MCF-7细胞中的跨膜转运特性。方法:应用pET-24a-Tat-GFP质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,检测不同异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度(0.5和1.0mmol·L-1)... 目的:获得具备穿膜活性与绿色荧光蛋白(GFP)标记的Tat-GFP融合蛋白,探讨Tat-GFP在MCF-7细胞中的跨膜转运特性。方法:应用pET-24a-Tat-GFP质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,检测不同异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度(0.5和1.0mmol·L-1)和不同温度(22℃和37℃)诱导融合蛋白的表达情况;利用Ni-IDA树脂亲和纯化Tat-GFP蛋白,利用GFP特异性抗体采用Western blotting法分析洗脱液中的蛋白;激光共聚焦荧光显微镜下检测Tat-GFP融合蛋白的跨膜转运活性。结果:0.5和1.0mmol·L-1 IPTG诱导出的细菌总蛋白中所含的Tat-GFP蛋白量无明显差异;低温(22℃)诱导生产的Tat-GFP蛋白量较37℃更高;Western blotting分析,GFP抗体能够特异性识别PVDF膜上的蛋白,条带灰度与Tat-GFP蛋白上样量有关联;细胞穿膜实验,绿色荧光分布于MCF-7细胞的细胞质和细胞核中。结论:低温诱导时大肠杆菌BL21菌体上清液中Tat-GFP融合蛋白量更高,所生产的Tat-GFP融合蛋白既具备穿膜活性又具有易于检测的绿色荧光。 展开更多
关键词 Tat-GFP 细胞穿膜肽 融合蛋白 穿膜活性
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血管紧张素转换酶与抑制肽结合模式的分子动力学研究 被引量:1
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作者 王嵩 管珊珊 +2 位作者 万永凤 单亚明 张浩 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2017年第7期1216-1222,共7页
应用分子模拟方法研究了血管紧张素转换酶(Angiotensin-converting enzyme,ACE)C端结构域(C-domain)与两种抑制肽(RIGLF/AHEPVK)的结合机制,预测了两个体系的结合模式,提出在C-domain-RIGLF中His353,Asp377,Asp453,Phe457,His513,Tyr523... 应用分子模拟方法研究了血管紧张素转换酶(Angiotensin-converting enzyme,ACE)C端结构域(C-domain)与两种抑制肽(RIGLF/AHEPVK)的结合机制,预测了两个体系的结合模式,提出在C-domain-RIGLF中His353,Asp377,Asp453,Phe457,His513,Tyr523和Phe527为RIGLF主要结合残基,而在C-domainAHEPVK中Gln281,His353,Ser355,Glu384,Lys511,His513和Tyr523等残基起关键作用.应用结合自由能计算比较了两个体系的结合能力,结果表明,RIGLF和AHEPVK均与C-domain活性位点残基存在较强作用,且AHEPVK对C-domain的结合能力较强,与实验结果一致. 展开更多
关键词 血管紧张素转换酶 抑制肽 分子对接 分子动力学模拟 结合自由能计算
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多巴胺能神经营养因子真核表达、纯化及多克隆抗体制备 被引量:1
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作者 王立正 王子璇 +4 位作者 朱瑞 刘镇天 于彬 于湘晖 赵兴红 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1221-1224,共4页
目的:获得具有活性的脑多巴胺能神经营养因子(CDNF)蛋白并制备CDNF多克隆抗体。方法:选用VR1012作为真核表达载体,在HEK293T细胞中表达带有his标签的CDNF蛋白,镍柱亲和层析进行纯化,SDS-PAGE检测纯化情况,Western blot鉴定蛋白的正确性,... 目的:获得具有活性的脑多巴胺能神经营养因子(CDNF)蛋白并制备CDNF多克隆抗体。方法:选用VR1012作为真核表达载体,在HEK293T细胞中表达带有his标签的CDNF蛋白,镍柱亲和层析进行纯化,SDS-PAGE检测纯化情况,Western blot鉴定蛋白的正确性,MTT检测CDNF蛋白对PC12细胞的保护活性。免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。结果:构建的p VR1012-CDNF-his在HEK 293T细胞中高效分泌表达,镍柱亲和层析获得纯度90%以上的CDNF蛋白,MTT结果显示纯化获得的蛋白具有对PC12细胞的保护作用。免疫动物后,成功制备出CDNF多克隆抗体。结论:通过HEK293T细胞中表达-镍柱亲和层析获得具有纯度较高且具有生物活性的CDNF蛋白,并成功制备多克隆抗体以方便后续对于CDNF应用及相关机制的研究。 展开更多
关键词 CDNF 多克隆抗体 镍柱亲和层析 帕金森病
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