牙髓成纤维细胞传代培养与冻存复苏后生长情况比较 被引量：2

1

作者 张颖丽 郭世梁 +1 位作者 张影杰 张志民 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期713-715,共3页

目的:比较牙髓成纤维细胞在体外传代培养及冻存复苏后细胞生长情况的差异,探讨其应用价值。方法:采用组织块培养法对牙髓组织标本进行体外成纤维细胞的原代及传代培养,观察成纤维细胞形态及生物学特性,选取第4代处于对数生长期的细胞梯... 目的:比较牙髓成纤维细胞在体外传代培养及冻存复苏后细胞生长情况的差异,探讨其应用价值。方法:采用组织块培养法对牙髓组织标本进行体外成纤维细胞的原代及传代培养,观察成纤维细胞形态及生物学特性,选取第4代处于对数生长期的细胞梯度降温后置入液氮中(196℃)保存3个月,比较经传代培养细胞与复苏后成纤维细胞的生长情况,用MTT法分别绘制细胞生长曲线,比较细胞生长情况。结果:经冻存保存3个月后牙髓细胞复苏率超过80%,而细胞形态未见明显的改变。复苏后细胞生长较对照组慢,进入对数生长期的时间较对照组略长。但两者生长曲线基本一致。结论:牙髓成纤维细胞传代培养与冷冻复苏后形态及生长特性基本相同,冻存的成纤维细胞可以成功的复苏。 展开更多

关键词 成纤维细胞 细胞培养 冻存 复苏

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双向电泳分析重组人白细胞介素-1β对人牙髓细胞的影响

2

作者 郭世梁 张颖丽 +1 位作者 张影杰 柏祥娥 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1029-1031,1035,共4页

目的:观察rhIL-1β对培养的HDPCs产生蛋白质的影响,揭示rhIL-1β与牙髓炎的关系。方法:在HD-PCs的培养液中加入rhIL-1β,用2-DE分离HDPCs全蛋白,获得对照组和诱导组HDPCs蛋白质图谱,ImageMaster2DElit 5.0软件分析确认差异表达蛋白。结... 目的:观察rhIL-1β对培养的HDPCs产生蛋白质的影响,揭示rhIL-1β与牙髓炎的关系。方法:在HD-PCs的培养液中加入rhIL-1β,用2-DE分离HDPCs全蛋白,获得对照组和诱导组HDPCs蛋白质图谱,ImageMaster2DElit 5.0软件分析确认差异表达蛋白。结果:比较对照组和诱导组蛋白质图谱,发现了39个蛋白质点差异明显。其中15个蛋白质点在诱导组高表达,新增13个蛋白质点,7个蛋白质点低表达,4个蛋白质点仅在对照组中表达。结论:HDPCs对rhIL-1β的应答反应是一个非常复杂的过程,多种蛋白质分子涉及其中。 展开更多

关键词 重组人白细胞介素-1β(rhIL-1β) 双向电泳(2-DE) 蛋白质组 人牙髓细胞(HDPCs)

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CD40在人炎症牙髓组织中的表达

3

作者 李男男 王金蕊 +2 位作者 张志民 王晓云 李海鹰 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期813-815,共3页

目的:探讨在牙髓炎中CD40的表达,揭示CD40在牙髓炎发生发展中的可能作用。方法:采用免疫组织化学的方法检测人的正常及急、慢性牙髓炎牙髓中CD40的表达。结果:免疫组化染色观察正常牙髓组织中,CD40未见阳性表达,而在急慢性牙髓炎组织中C... 目的:探讨在牙髓炎中CD40的表达,揭示CD40在牙髓炎发生发展中的可能作用。方法:采用免疫组织化学的方法检测人的正常及急、慢性牙髓炎牙髓中CD40的表达。结果:免疫组化染色观察正常牙髓组织中,CD40未见阳性表达,而在急慢性牙髓炎组织中CD40在浆细胞、巨噬细胞上有不同程度的表达。慢性牙髓炎组表达明显强于急性牙髓炎组。结论:CD40在牙髓炎牙髓组织中呈阳性表达,CD40参与了牙髓的炎症反应。 展开更多

关键词 急性牙髓炎 慢性牙髓炎 CD40

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多发多病程前磨牙畸形中央尖1例 被引量：3

4

作者 刘亚楠 王丽丽 +2 位作者 胡灿 张颖丽 李祥伟 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期876-878,共3页

该文报道1例因畸形中央尖折断导致严重根尖周感染的患者,其双侧上颌第二前磨牙、下颌前磨牙共6颗牙均患畸形中央尖,而且患牙处于不同病变发展阶段,经对症处理,治疗效果良好。结合该罕见病例并回顾相关文献,总结畸形中央尖患牙的临床表... 该文报道1例因畸形中央尖折断导致严重根尖周感染的患者,其双侧上颌第二前磨牙、下颌前磨牙共6颗牙均患畸形中央尖,而且患牙处于不同病变发展阶段,经对症处理,治疗效果良好。结合该罕见病例并回顾相关文献,总结畸形中央尖患牙的临床表现、分类和相应的治疗措施,为畸形中央尖患牙的早期诊疗和其继发病变的预防提供切实可行的方案。 展开更多

关键词 多病程 多发 畸形中央尖 前磨牙

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口腔鳞状细胞癌中CADM1蛋白的表达及意义 被引量：3

5

作者 李男男 胡敏 +2 位作者 王金蕊 周晶 韩光红 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期145-148,共4页

目的:研究细胞粘附分子1(cell adhesion molecule 1,CADM1)在口腔鳞状细胞癌(Oral squamous cell car-cinoma,OSCC)中的表达,探讨其在OSCC病变中的作用及其临床意义。方法:应用免疫组织化学法S-P法检测52例OSCC及30例正常的口腔黏膜组织... 目的:研究细胞粘附分子1(cell adhesion molecule 1,CADM1)在口腔鳞状细胞癌(Oral squamous cell car-cinoma,OSCC)中的表达,探讨其在OSCC病变中的作用及其临床意义。方法:应用免疫组织化学法S-P法检测52例OSCC及30例正常的口腔黏膜组织中CADM1蛋白的表达,数据采用SPSS13.0统计软件进行χ2检验。结果:CADM1蛋白在高分化组阳性表达率为87.50%、中分化组阳性表达率为42.86%、低分化组阳性表达率为20.00%,三者之间对比有显著性差异(P<0.05),与正常对照组有显著性差异(P<0.01);在临床分期为早期(Ⅰ级+Ⅱ级)组中阳性表达率为72.22%,晚期(Ⅲ级+Ⅳ级)组中阳性表达率为35.29%,二者之间存在显著性差异(P<0.05)。结论:CADM1蛋白的表达与OSCC的病理分级、临床分期关系密切,提示CADM1蛋白缺失可能是OSCC的发生机制之一。 展开更多

关键词 鳞状细胞癌 CADM1蛋白 免疫组织化学

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散发性先天缺牙的临床特征分析 被引量：1

6

作者 李祥伟 王丽芹 +1 位作者 王晓红 孙宏晨 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2007年第2期185-187,共3页

目的:探讨散发性先天缺牙的临床特征,分析其危害。方法:临床检查散发性先天缺牙病例,影像学观察,统计分析。结果:收集到11例散发性先天缺牙患者,男5例,女6例,患者缺牙1～25颗,伴有食物嵌塞(90.9%)、邻面龋及继发病变(81.8%)、创伤(72.... 目的:探讨散发性先天缺牙的临床特征,分析其危害。方法:临床检查散发性先天缺牙病例,影像学观察,统计分析。结果:收集到11例散发性先天缺牙患者,男5例,女6例,患者缺牙1～25颗,伴有食物嵌塞(90.9%)、邻面龋及继发病变(81.8%)、创伤(72.7%)、牙周病(45.5%)、咬合异常(72.7%)。结论:散发性先天缺牙多为少数牙先天缺失,与性别无明显关系,伴有恒牙埋伏和乳牙滞留,缺牙部位具有随机性,先天缺牙影响口腔健康及咬合关系。 展开更多

关键词 先天缺牙 散发病例 临床特征

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熊果酸对成牙骨质细胞增殖及矿化功能的影响 被引量：1

7

作者 王玉琢 包幸福 +4 位作者 姜欢 高尚 刘金凤 王春晖 胡敏 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1229-1233,共5页

目的:观察熊果酸对鼠成牙骨质细胞系OCCM-30增殖、周期、凋亡及矿化功能的影响。方法:一定浓度熊果酸处理成牙骨质细胞后,cck-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,微量酶标法检测碱性磷酸酶活性,茜素红染色法定量及定性检测... 目的:观察熊果酸对鼠成牙骨质细胞系OCCM-30增殖、周期、凋亡及矿化功能的影响。方法:一定浓度熊果酸处理成牙骨质细胞后,cck-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,微量酶标法检测碱性磷酸酶活性,茜素红染色法定量及定性检测矿化结节量。结果:熊果酸组(2.5μmol/L)相比于对照组,细胞增殖率和细胞周期增殖指数升高,早期凋亡率降低,碱性磷酸酶活性和矿化结节量上调。结论:一定浓度熊果酸可促进成牙骨质细胞增殖,G1期百分比降低,抑制早期凋亡,增强碱性磷酸酶活性,促进矿化结节的形成。 展开更多

关键词 熊果酸 鼠成牙骨质细胞 OCCM-30 牙根吸收与修复

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牙釉质表面处理对离子交换树脂转移钙离子能力的影响

8

作者 张志民 高心 +3 位作者 何钟勤 高文信 罗云霄 李雨 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2003年第3期173-175,共3页

目的 :探讨牙釉质表面经喷粉抛光技术处理对离子交换树脂转移钙离子能力的影响。方法 :将新鲜离体牙釉质小块 ,经喷粉抛光技术处理表面后 (对照组不处理 ) ,分别浸泡在 45Ca离子交换树脂生理盐水溶液中 ,经 0 .5、2、12h后 ,测量放射活... 目的 :探讨牙釉质表面经喷粉抛光技术处理对离子交换树脂转移钙离子能力的影响。方法 :将新鲜离体牙釉质小块 ,经喷粉抛光技术处理表面后 (对照组不处理 ) ,分别浸泡在 45Ca离子交换树脂生理盐水溶液中 ,经 0 .5、2、12h后 ,测量放射活度计数。结果 :实验组 0 .5h前、后牙釉质中已有 45Ca离子大量转入 ,分别可达 9.3 5 0、10 .92 5个放射活度计数 /mm2 ;2h转入量达高峰 ,可达 17.199、2 3 .72 5个放射活度计数 /mm2 ;12h有所下降 ,可达 15 .675、17.83 7个放射活度计数 /mm2 。实验组和对照组经配对t检验 (P <0 .0 0 5 ) ,统计学具有显著性差异。结论 :牙釉质表面覆盖的获得性膜是阻挡离子交换树脂转移钙离子进入牙釉质的重要因素之一 。 展开更多

关键词 牙釉质 喷粉抛光技术 离子交换树脂 钙离子

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比较骨挤压器顶端不同形态对骨挤压上颌窦提升术中窦底提升的影响 被引量：10

9

作者 张茹慧 李男男 +1 位作者 周延民 高扬 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2006年第4期384-386,共3页

目的:探讨骨挤压器顶端形态对骨挤压上颌窦提升术的影响。方法:采用三维有限元方法比较骨挤压上颌窦提升术当骨挤压器顶端不同形状时,骨挤压器-骨组织界面的应力和位移情况。结果:骨挤压器顶端形态为凹形时上颌窦底位移、拉应力最大。... 目的:探讨骨挤压器顶端形态对骨挤压上颌窦提升术的影响。方法:采用三维有限元方法比较骨挤压上颌窦提升术当骨挤压器顶端不同形状时,骨挤压器-骨组织界面的应力和位移情况。结果:骨挤压器顶端形态为凹形时上颌窦底位移、拉应力最大。骨挤压器顶端形态为平形时上颌窦底位移、拉应力、压应力最小。结论:骨挤压器顶端形态为凸形,提升效率高,发生黏膜穿孔的几率较小,与骨挤压器顶端形态为平形、凹形相比是可取的。 展开更多

关键词 上颌窦 提升术 三维有限元 应力 位移

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不同时间和方式去除根管内塑化物的实验研究 被引量：6

10

作者 刘玉艳 王成坤 +1 位作者 程敏 张志民 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期793-795,共3页

目的:比较不同时间和方式去除根管内塑化物的能力和效率,探寻最佳的去除根管内塑化物的方式和方法。方法:120个塑化根管随机分成即刻去除和延迟去除2组;即刻去除组包括A即刻组:H型锉和酚克除去除根管内塑化物及A超声组:A组加超声波荡洗... 目的:比较不同时间和方式去除根管内塑化物的能力和效率,探寻最佳的去除根管内塑化物的方式和方法。方法:120个塑化根管随机分成即刻去除和延迟去除2组;即刻去除组包括A即刻组:H型锉和酚克除去除根管内塑化物及A超声组:A组加超声波荡洗;延迟去除组即根管内封入酚克除棉球4、6、8、24、48h后、H型锉和酚克除去除根管内塑化物的B4、B6、B8、B24、B48组及相应的B4超声、B6超声、B8超声、B24超声和B48超声组。通过记录达到根管工作长度的平均操作时间、液体用量和根管内残留物情况评价根管内塑化物的疏通效果。结果:各组均能使根管再通且去除塑化物的能力相似;即刻去除组的操作时间、液体用量与延迟去除组的4h相似,但多于延迟去除其他各组且均有统计学差异(P<0.05);应用超声波荡洗较不应用超声波组在去除根管内残留物方面更有效;延迟去除组中除4h外其他各组去除根管内塑化物的操作时间、液体用量相似,无统计学差异(P>0.05)。结论:酚克除封入根管后的6～8h及同时辅以超声波荡洗是去除根管内塑化物的最佳时间和方式。 展开更多

关键词 超声技术 酚克除 塑化治疗

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干酪乳杆菌中耐酸相关基因ffh的检测及克隆 被引量：3

11

作者 朱敏 张志民 +2 位作者 张家颖 武广恒 高心 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2004年第4期395-397,共3页

目的 :检测干酪乳杆菌中是否存在耐酸相关基因ffh并对其克隆测序。方法 :厌氧培养干酪乳杆菌 ,碱裂解法提取细菌基因组 ,根据耐酸相关基因ffh的同源性 ,从最保守区设计一对引物进行PCR ,利用 pGEM -T载体进行T -A克隆 ,构建重组质粒 ,... 目的 :检测干酪乳杆菌中是否存在耐酸相关基因ffh并对其克隆测序。方法 :厌氧培养干酪乳杆菌 ,碱裂解法提取细菌基因组 ,根据耐酸相关基因ffh的同源性 ,从最保守区设计一对引物进行PCR ,利用 pGEM -T载体进行T -A克隆 ,构建重组质粒 ,酶切电泳 ,并测序鉴定。结果 :PCR获得耐酸相关基因ffh部分片段 ,重组质粒含有其目的片段。结论 :干酪乳杆菌中存在耐酸相关基因ffh。 展开更多

关键词 耐酸相关基因ffh 干酪乳杆菌 PCR

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透明质酸微球的制备及细胞毒性的研究 被引量：3

12

作者 张璇 李祥伟 +4 位作者 宋文龙 倪世磊 邱滢 刘慧敏 李娜 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期954-958,共5页

目的:构建适宜牙髓再生的透明质酸(HA)微球支架,评价其作为细胞载体的可行性。方法:乳化交联法制备透明质酸微球,SEM观察其形貌特征及粒径大小,将该微球材料与人牙髓干细胞(hDPSCs)共培养,MTT实验检测hDPSCs在微球存在的微环境内的增殖... 目的:构建适宜牙髓再生的透明质酸(HA)微球支架,评价其作为细胞载体的可行性。方法:乳化交联法制备透明质酸微球,SEM观察其形貌特征及粒径大小,将该微球材料与人牙髓干细胞(hDPSCs)共培养,MTT实验检测hDPSCs在微球存在的微环境内的增殖情况。结果:乳化交联法可制备透明质酸微球,该微球规则、圆整、粒径5~10μm;透明质酸微球浓度0.05~0.8 mg/ml作用24~72 h不抑制hDPSCs增殖,细胞毒性为0级。结论:透明质酸微球可作为应用hDPSCs的载体。 展开更多

关键词 透明质酸(HA)微球 乳化交联 生物相容性 人牙髓干细胞(hDPSCs) 增殖

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不同根管终末工作直径对约诊间痛发生率的影响 被引量：2

13

作者 王成坤 张志民 +2 位作者 张娟 尹红华 田颖 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期863-865,共3页

采用冠下法对2年间在我科就诊的下颌前磨牙慢性根尖周炎行根管治疗术的300颗患牙进行研究。根据终末工作直径分3组,各100例:A组为25#,B组为30#,C组为35#。结果 A、B、C 3组的约诊间疼痛发生率分别为32%、25%和19%(A vs C,P<0.05),认... 采用冠下法对2年间在我科就诊的下颌前磨牙慢性根尖周炎行根管治疗术的300颗患牙进行研究。根据终末工作直径分3组,各100例:A组为25#,B组为30#,C组为35#。结果 A、B、C 3组的约诊间疼痛发生率分别为32%、25%和19%(A vs C,P<0.05),认为终末工作直径达标准锉35#可明显降低根尖周炎患牙约诊间痛发生率。 展开更多

关键词 根管治疗 根管成形 约诊间痛

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BrdU和EGFP标记大鼠骨髓间充质干细胞的对比研究 被引量：1

14

作者 刘超 苗雷英 +2 位作者 孙新华 孙宏晨 乔春燕 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期19-22,共4页

目的:研究5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-Bromo-21-deoxyuridine,BrdU)和腺病毒介导的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)标记骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的最佳标记时间与剂量,并进行比较。方法... 目的:研究5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-Bromo-21-deoxyuridine,BrdU)和腺病毒介导的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)标记骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的最佳标记时间与剂量,并进行比较。方法:密度梯度离心分离大鼠骨髓MSCs并体外扩增。AdCMV-EGFP分为100、200、400及800 particles/cell四组进行转染;BrdU以终浓度5、10、15μmol/L进行标记。分别于实验第1、3、5、7 d检测两种方法对MSCs的标记率。通过MTT检测两种标记方法对细胞增殖活性的影响。结果:AdCMV-EGFP以100 par-ticles/cell转染未引起MSCs凋亡,转染3d时效率最高(44.4±3.5%);BrdU以10μmol/L、标记3 d的标记率为(75.1±3.1)%。两种方法均不影响细胞增殖。结论:AdCMV-EGFP和BrdU均可高效标记MSCs,根据研究需要不同均可作为高效的MSCs标记方法。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 增强型绿色荧光蛋白 5-溴脱氧尿嘧啶核苷

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CaO/ZnO核-壳结构纳米材料抗菌性能的初步研究 被引量：1

15

作者 王丽丽 孙源卿 +4 位作者 张颖丽 孙宏晨 林权 于维先 李祥伟 《实用口腔医学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第3期331-334,共4页

目的:检测CaO/ZnO核-壳结构纳米球材料的抑菌性能。方法:采用液相沉淀法制备CaO/ZnO核-壳结构纳米球,测定该材料与丁香油酚调拌的材料钙离子释放和p H值,电子显微镜观察其形态及粒径,电感耦合等离子体(ICP)分析其离子组成;通过琼脂扩散... 目的:检测CaO/ZnO核-壳结构纳米球材料的抑菌性能。方法:采用液相沉淀法制备CaO/ZnO核-壳结构纳米球,测定该材料与丁香油酚调拌的材料钙离子释放和p H值,电子显微镜观察其形态及粒径,电感耦合等离子体(ICP)分析其离子组成;通过琼脂扩散法检测该材料对变形链球菌、粪肠球菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制情况。结果:CaO/ZnO核-壳结构纳米材料的颗粒接近球形,粒径为80~90 nm,具有核-壳结构,由CaO和ZnO组成;在PBS中CaO/ZnO核-壳结构纳米球材料p H值和钙离子累积释放量随时间增加而递增,抑菌性优于iRoot SP和氧化锌-丁香油糊剂(P﹤0.01)。结论:CaO/ZnO核-壳结构纳米球材料具有优良的抑菌性。 展开更多

关键词 CAO ZNO 纳米材料 抑菌性

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不同方法去除老年患者根管内塑化物的临床评价

16

作者 刘玉艳 王成坤 +2 位作者 赵静辉 储顺礼 张志民 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期264-265,共2页

应用乙二胺四乙酸钠(EDTA)和酚克除(Resosolv)对188个老年患者的塑化根管进行即刻和延迟再通,临床研究表明即刻组Resosolv用量和时间均多于延迟组(P﹤0.05);但2组去除塑化物的能力相似。2组中EDTA和Resosolv联用通畅根管的操作时间均快... 应用乙二胺四乙酸钠(EDTA)和酚克除(Resosolv)对188个老年患者的塑化根管进行即刻和延迟再通,临床研究表明即刻组Resosolv用量和时间均多于延迟组(P﹤0.05);但2组去除塑化物的能力相似。2组中EDTA和Resosolv联用通畅根管的操作时间均快于单纯应用Resosolv组(P﹤0.05);但Resosolv用量无明显差别。二者联用的延迟去除是老年患者塑化根管再通的较佳方法。 展开更多

关键词 乙二胺四乙酸钠 酚克除 塑化治疗

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变形链球菌耐氟菌株耐酸相关基因ropA的克隆及蛋白表达 被引量：1

17

作者 超博 张红 +2 位作者 李文月 邵思奇 张志民 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2017年第4期23-27,共5页

克隆并表达变形链球菌耐氟菌株耐酸相关基因ropA。以变形链球菌UA159的耐氟菌株全基因组为模版,PCR扩增ropA基因并与p MD-18T克隆载体连接构建重组克隆质粒,测序鉴定。Bam HⅠ、HindⅢ双酶切重组克隆质粒,回收目的基因片段并与p Pro EX ... 克隆并表达变形链球菌耐氟菌株耐酸相关基因ropA。以变形链球菌UA159的耐氟菌株全基因组为模版,PCR扩增ropA基因并与p MD-18T克隆载体连接构建重组克隆质粒,测序鉴定。Bam HⅠ、HindⅢ双酶切重组克隆质粒,回收目的基因片段并与p Pro EX HTa表达载体通过粘性末端连接构建重组表达质粒,转化入大肠埃希菌感受态细胞DH5α,IPTG诱导,SDS-PAGE检测Rop A表达量。测序结果为变形链球菌UA159的耐氟菌株ropA基因碱基序列与亲代菌株UA159完全一致。SDS-PAGE结果显示IPTG成功诱导Rop A蛋白表达,并且随诱导时间的延长蛋白表达增多。变形链球菌UA159耐氟菌株的耐酸相关基因ropA未发生突变,说明变形链球菌耐氟菌株耐酸性增强不是由ropA碱基序列的改变导致。本研究成功诱导Rop A蛋白表达,为后续研究Rop A蛋白功能奠定了基础。 展开更多

关键词 变形链球菌 耐氟菌株 耐酸相关基因ropA 克隆 蛋白表达

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基质金属蛋白酶与根尖周病 被引量：1

18

作者 陈建芳 胡晓春 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2007年第4期464-465,共2页

关键词 基质金属蛋白酶 根尖周病 炎性细胞因子 根尖周炎 蛋白水解酶 细胞外基质 炎症性疾病 微生物感染

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殊异韦荣菌苹果酸脱氢酶的基因克隆及其重组蛋白的表达和活性测定

19

作者 刘晓红 何钟勤 +3 位作者 孙晓宇 高心 薛莹 李倪娜 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2013年第11期1008-1011,1015,共5页

目的:对殊异韦荣菌(V·dispar)苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase,MDH)基因进行克隆和重组表达,并对其重组蛋白进行纯化和活性测定。方法:提取殊异韦荣菌基因组DNA,PCR扩增MDH同源区序列片段,克隆入pET-28a载体并转化至大肠杆菌DH5... 目的:对殊异韦荣菌(V·dispar)苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase,MDH)基因进行克隆和重组表达,并对其重组蛋白进行纯化和活性测定。方法:提取殊异韦荣菌基因组DNA,PCR扩增MDH同源区序列片段,克隆入pET-28a载体并转化至大肠杆菌DH5α,酶切及PCR鉴定,测序。将重组质粒转入BL21(DE3)中,选择最佳表达条件,提纯及测定活性。结果:PCR扩增产物特异,全长1139bp。测序结果包含MDH基因,并与GenBank中所报道的大肠杆菌MDH基因序列进行对比分析,其同源性为99%。MDH纯化后的蛋白活性值为0.4403U/mL。结论:成功克隆殊异韦荣菌MDH基因,并通过基因序列和氨基酸分析证明其具有完整的阅读框架。还获得了重组表达MDH蛋白的最适表达条件,并测出韦荣菌苹果酸脱氢酶的活性。 展开更多

关键词 韦荣菌 苹果酸脱氢酶 基因克隆 重组表达 活性测定

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