目的 :克隆小鼠白细胞介素 1 8( m IL- 1 8)编码区的 c DNA序列并构建其表达载体。方法 :利用逆转录多聚酶链反应 ( RT- PCR)法 ,以小鼠脾细胞 m RNA为模板 ,扩增获得全长 m IL-1 8,与 p MD1 8T连接作全自动测序 ,并利用基因重组技术构...目的 :克隆小鼠白细胞介素 1 8( m IL- 1 8)编码区的 c DNA序列并构建其表达载体。方法 :利用逆转录多聚酶链反应 ( RT- PCR)法 ,以小鼠脾细胞 m RNA为模板 ,扩增获得全长 m IL-1 8,与 p MD1 8T连接作全自动测序 ,并利用基因重组技术构建包含 m IL- 1 8和 B7.1的双基因表达质粒 p IRES- IL1 8- B7.1。结果 :经测序证实获得的 m IL- 1 8序列与文献报道完全一致 ,并成功构建了表达质粒。结论 :成功克隆了 m IL- 1 8的 c DNA,并构建了双基因表达载体 p IRES- IL1 8- B7.展开更多
目的 :克隆小鼠分泌型内皮抑素 (s Endostatin) c DNA,构建 p CMV-分泌型内皮抑素和p Egr-分泌型内皮抑素重组质粒 ,检测重组质粒在 B1 6细胞中的表达。方法 :用 RT-PCR方法从鼠肝脏中扩增出内皮抑素 c DNA,经测序证实后 ,连入信号肽 ,...目的 :克隆小鼠分泌型内皮抑素 (s Endostatin) c DNA,构建 p CMV-分泌型内皮抑素和p Egr-分泌型内皮抑素重组质粒 ,检测重组质粒在 B1 6细胞中的表达。方法 :用 RT-PCR方法从鼠肝脏中扩增出内皮抑素 c DNA,经测序证实后 ,连入信号肽 ,构建 p CMV-分泌型内皮抑素和 p Egr-分泌型内皮抑素重组质粒 ,以脂质体转染小鼠 B1 6细胞 ,用 Western blot方法检测 B1 6细胞上清中内皮抑素的表达。结果 :测序表明扩增的分泌型内皮抑素序列与报道完全一致 ,Egr-1启动子和分泌型内皮抑素 c DNA正确插入表达载体 pc DNA3 .1 ,Western blot证实转染 B1 6细胞上清中有目的蛋白表达。结论 :小鼠内皮抑素基因成功地被克隆和表达 ,为今后检测 p Egr-分泌型内皮抑素的辐射诱导表达和恶性肿瘤的基因展开更多
文摘目的 :克隆小鼠白细胞介素 1 8( m IL- 1 8)编码区的 c DNA序列并构建其表达载体。方法 :利用逆转录多聚酶链反应 ( RT- PCR)法 ,以小鼠脾细胞 m RNA为模板 ,扩增获得全长 m IL-1 8,与 p MD1 8T连接作全自动测序 ,并利用基因重组技术构建包含 m IL- 1 8和 B7.1的双基因表达质粒 p IRES- IL1 8- B7.1。结果 :经测序证实获得的 m IL- 1 8序列与文献报道完全一致 ,并成功构建了表达质粒。结论 :成功克隆了 m IL- 1 8的 c DNA,并构建了双基因表达载体 p IRES- IL1 8- B7.
文摘目的 :克隆小鼠分泌型内皮抑素 (s Endostatin) c DNA,构建 p CMV-分泌型内皮抑素和p Egr-分泌型内皮抑素重组质粒 ,检测重组质粒在 B1 6细胞中的表达。方法 :用 RT-PCR方法从鼠肝脏中扩增出内皮抑素 c DNA,经测序证实后 ,连入信号肽 ,构建 p CMV-分泌型内皮抑素和 p Egr-分泌型内皮抑素重组质粒 ,以脂质体转染小鼠 B1 6细胞 ,用 Western blot方法检测 B1 6细胞上清中内皮抑素的表达。结果 :测序表明扩增的分泌型内皮抑素序列与报道完全一致 ,Egr-1启动子和分泌型内皮抑素 c DNA正确插入表达载体 pc DNA3 .1 ,Western blot证实转染 B1 6细胞上清中有目的蛋白表达。结论 :小鼠内皮抑素基因成功地被克隆和表达 ,为今后检测 p Egr-分泌型内皮抑素的辐射诱导表达和恶性肿瘤的基因
