为建立一种快速、特异、敏感的方法检测伪狂犬病毒(PRV)gE基因缺失病毒株,本研究根据PRV野毒SA株的gD和gE基因序列设计引物,建立了SYBR Green I实时定量PCR方法,并对反应条件进行优化,建立了检测PRV gE基因缺失病毒株的SYBR Green I实...为建立一种快速、特异、敏感的方法检测伪狂犬病毒(PRV)gE基因缺失病毒株,本研究根据PRV野毒SA株的gD和gE基因序列设计引物,建立了SYBR Green I实时定量PCR方法,并对反应条件进行优化,建立了检测PRV gE基因缺失病毒株的SYBR Green I实时定量PCR方法,其灵敏度比传统PCR方法的灵敏度高100倍,前者可达17.5拷贝/μL,后者为1.75×103拷贝/μL。该方法可以检测出PRV,但PCV2、PPV、CSFV、PRRSV均为阴性,具有良好的特异性和重复性。该方法可以用于病原学监测、流行病学调查及定量研究。展开更多
文摘试验旨在研究杂交野猪猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)辽宁分离株的遗传变异情况及分子生物学特征。用Marc-145细胞从辽宁某杂交野猪场疑似猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)病猪血液中分离到1株病毒,该分离毒株经Marc-145细胞6次传代后出现稳定的细胞病变,采用RT-PCR方法对分离病毒进行ORF6和ORF7基因的扩增、克隆和测序,并与已知序列毒株的相应片段进行同源性比对。结果表明,分离毒株的ORF6、ORF7基因与国内外美洲型毒株的核苷酸同源性分别为96.0%~100.0%、94.5%~99.4%;氨基酸同源性分别为89.6%~100.0%、87.3%~98.7%;与欧洲型代表毒株LV的ORF6、ORF7基因差异较大,核苷酸同源性分别为70.4%、70.1%,氨基酸同源性分别为48.8%、49.7%。推测辽宁杂交野猪体内分离毒株在基因型上属于美洲型毒株。
文摘为建立一种快速、特异、敏感的方法检测伪狂犬病毒(PRV)gE基因缺失病毒株,本研究根据PRV野毒SA株的gD和gE基因序列设计引物,建立了SYBR Green I实时定量PCR方法,并对反应条件进行优化,建立了检测PRV gE基因缺失病毒株的SYBR Green I实时定量PCR方法,其灵敏度比传统PCR方法的灵敏度高100倍,前者可达17.5拷贝/μL,后者为1.75×103拷贝/μL。该方法可以检测出PRV,但PCV2、PPV、CSFV、PRRSV均为阴性,具有良好的特异性和重复性。该方法可以用于病原学监测、流行病学调查及定量研究。
