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微小隐孢子虫RPA-CRISPR/Cas12a可视化检测方法的建立及应用
被引量：
5
1
作者
王丽
李珊
+5 位作者
李璐
张西臣
王晓岑
李新
张楠
宫鹏涛
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第12期4793-4804,共12页
【目的】建立一种快速、准确、灵敏的微小隐孢子虫可视化检测方法。【方法】本研究将重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术与CRISPR/Cas12a系统相结合,通过荧光检测法和侧流层析试纸条读取结果。针对微小隐...
【目的】建立一种快速、准确、灵敏的微小隐孢子虫可视化检测方法。【方法】本研究将重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术与CRISPR/Cas12a系统相结合,通过荧光检测法和侧流层析试纸条读取结果。针对微小隐孢子虫的小亚基核糖体RNA(small subunit ribosome RNA,SSU rRNA)基因设计和筛选crRNA和RPA引物,利用两种不同的单链DNA报告分子以荧光数值和侧流层析试纸条呈现检测结果。通过检测微小隐孢子虫和7个其他病原体评估RPA-CRISPR/Cas12a检测方法的特异性。通过梯度稀释的重组质粒和微小隐孢子虫基因组评估RPA-CRISPR/Cas12a检测方法的敏感性,并将该方法应用于临床样本的检测。【结果】本研究建立的RPA-CRISPR/Cas12a检测方法可在90 min内完成对样本中微小隐孢子虫的检测,与大肠杆菌、十二指肠贾第虫、华支睾吸虫、弓形虫、肝片吸虫、人五毛滴虫、沙门菌均无交叉反应,可特异性检测出微小隐孢子虫;敏感性试验结果显示,该方法的最低检测限为10个卵囊/mL。利用此方法对70份牛粪便样本和50份人粪便样本进行检测,经荧光检测法和侧流层析试纸条读取结果,微小隐孢子虫的阳性率分别为15.7%(11/70)和6.0%(3/50),与套式PCR检测结果完全一致。【结论】本研究建立的微小隐孢子虫RPA-CRISPR/Cas12a可视化检测方法具有高特异性和高灵敏度,且检测结果直观,不依赖昂贵的仪器设备,在微小隐孢子虫的现场检测和风险监测方面具有广阔的应用价值。
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关键词
CRISPR/Cas12a
微小隐孢子虫
重组酶聚合酶扩增
可视化检测
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职称材料
积雪草酸联合亚胺培南对产KPC-2耐药肠杆菌的体外抗菌作用
被引量：
1
2
作者
张卫
伍国强
+3 位作者
廖远军
许竞文
邹宜诺
周永林
《中国动物检疫》
CAS
2023年第8期94-102,共9页
碳青霉烯类抗生素是目前临床上用于治疗肠杆菌严重感染的最后防线药物。然而随着肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPCs)等的出现和流行,碳青霉烯类药物治疗广泛耐药肠杆菌(carbapenem resistant Enterobacteriaceae,CRE)感染面临巨大挑战。KPCs...
碳青霉烯类抗生素是目前临床上用于治疗肠杆菌严重感染的最后防线药物。然而随着肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPCs)等的出现和流行,碳青霉烯类药物治疗广泛耐药肠杆菌(carbapenem resistant Enterobacteriaceae,CRE)感染面临巨大挑战。KPCs家族中以KPC-2为主要流行类型,其可水解几乎所有β-内酰胺类抗生素。因此针对KPC-2开展抑制剂筛选迫在眉睫。本研究通过酶活性抑制试验、抑菌试验、细菌细胞膜通透性测定和细胞毒性检测等开展了KPC-2抑制剂的筛选及其活性验证。结果显示:中药活性成分积雪草酸可显著抑制KPC-2水解β-内酰胺类抗生素的生物学活性(P <0.05,IC50=4.38μg/mL),从而可有效增强亚胺培南等碳青霉烯类抗生素的体外抑菌作用和杀菌作用。同时,积雪草酸可增强亚胺培南对细菌细胞膜的损伤作用。此外,积雪草酸(≤32μg/mL)对不同来源细胞的细胞毒性较低,这有利于进一步开发其作为碳青霉烯类抗生素佐剂并投入临床使用。综上,本研究为CRE感染治疗提供了新的可行策略和先导化合物。
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关键词
积雪草酸
KPC-2
亚胺培南
协同抗菌
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职称材料
题名
微小隐孢子虫RPA-CRISPR/Cas12a可视化检测方法的建立及应用
被引量：
5
1
作者
王丽
李珊
李璐
张西臣
王晓岑
李新
张楠
宫鹏涛
机构
吉林大学
动物
医学
学院
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第12期4793-4804,共12页
基金
长春市科技发展计划(21ZY24)
国家重点研发计划(2021YFF0702900)
国家自然科学基金(31972704)。
文摘
【目的】建立一种快速、准确、灵敏的微小隐孢子虫可视化检测方法。【方法】本研究将重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术与CRISPR/Cas12a系统相结合,通过荧光检测法和侧流层析试纸条读取结果。针对微小隐孢子虫的小亚基核糖体RNA(small subunit ribosome RNA,SSU rRNA)基因设计和筛选crRNA和RPA引物,利用两种不同的单链DNA报告分子以荧光数值和侧流层析试纸条呈现检测结果。通过检测微小隐孢子虫和7个其他病原体评估RPA-CRISPR/Cas12a检测方法的特异性。通过梯度稀释的重组质粒和微小隐孢子虫基因组评估RPA-CRISPR/Cas12a检测方法的敏感性,并将该方法应用于临床样本的检测。【结果】本研究建立的RPA-CRISPR/Cas12a检测方法可在90 min内完成对样本中微小隐孢子虫的检测,与大肠杆菌、十二指肠贾第虫、华支睾吸虫、弓形虫、肝片吸虫、人五毛滴虫、沙门菌均无交叉反应,可特异性检测出微小隐孢子虫;敏感性试验结果显示,该方法的最低检测限为10个卵囊/mL。利用此方法对70份牛粪便样本和50份人粪便样本进行检测,经荧光检测法和侧流层析试纸条读取结果,微小隐孢子虫的阳性率分别为15.7%(11/70)和6.0%(3/50),与套式PCR检测结果完全一致。【结论】本研究建立的微小隐孢子虫RPA-CRISPR/Cas12a可视化检测方法具有高特异性和高灵敏度,且检测结果直观,不依赖昂贵的仪器设备,在微小隐孢子虫的现场检测和风险监测方面具有广阔的应用价值。
关键词
CRISPR/Cas12a
微小隐孢子虫
重组酶聚合酶扩增
可视化检测
Keywords
CRISPR/Cas12a
Cryptosporidium parvum
recombinase polymerase amplification
visual diagnostic method
分类号
S852.72 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
积雪草酸联合亚胺培南对产KPC-2耐药肠杆菌的体外抗菌作用
被引量：
1
2
作者
张卫
伍国强
廖远军
许竞文
邹宜诺
周永林
机构
浏阳市农业农村局
动物
疫病预防控制中心
零陵区
畜
牧水产事务中心
吉林大学
动物
医学
学院
出处
《中国动物检疫》
CAS
2023年第8期94-102,共9页
基金
国家自然科学基金青年基金项目(32102723,32202856)
中国博士后科学基金面上项目(2023M731291)。
文摘
碳青霉烯类抗生素是目前临床上用于治疗肠杆菌严重感染的最后防线药物。然而随着肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPCs)等的出现和流行,碳青霉烯类药物治疗广泛耐药肠杆菌(carbapenem resistant Enterobacteriaceae,CRE)感染面临巨大挑战。KPCs家族中以KPC-2为主要流行类型,其可水解几乎所有β-内酰胺类抗生素。因此针对KPC-2开展抑制剂筛选迫在眉睫。本研究通过酶活性抑制试验、抑菌试验、细菌细胞膜通透性测定和细胞毒性检测等开展了KPC-2抑制剂的筛选及其活性验证。结果显示:中药活性成分积雪草酸可显著抑制KPC-2水解β-内酰胺类抗生素的生物学活性(P <0.05,IC50=4.38μg/mL),从而可有效增强亚胺培南等碳青霉烯类抗生素的体外抑菌作用和杀菌作用。同时,积雪草酸可增强亚胺培南对细菌细胞膜的损伤作用。此外,积雪草酸(≤32μg/mL)对不同来源细胞的细胞毒性较低,这有利于进一步开发其作为碳青霉烯类抗生素佐剂并投入临床使用。综上,本研究为CRE感染治疗提供了新的可行策略和先导化合物。
关键词
积雪草酸
KPC-2
亚胺培南
协同抗菌
Keywords
asiatic acid
KPC-2
imipenem
synergistic antibacterial activity
分类号
S855.1 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
微小隐孢子虫RPA-CRISPR/Cas12a可视化检测方法的建立及应用
王丽
李珊
李璐
张西臣
王晓岑
李新
张楠
宫鹏涛
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2023
5
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
积雪草酸联合亚胺培南对产KPC-2耐药肠杆菌的体外抗菌作用
张卫
伍国强
廖远军
许竞文
邹宜诺
周永林
《中国动物检疫》
CAS
2023
1
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职称材料
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