减毒沙门氏菌靶向携带共表达质粒p53／siRNA-survivin抗前列腺癌的体内研究 被引量：2

1

作者 邵月婷 徐德启 +4 位作者 刘亚男 李晓洁 邵晨 李扬 赵雪俭 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期527-529,533,共4页

目的:以人减毒沙门氏菌为基因运载体,探讨其携带p53、siRNA-survivin及其共表达质粒p53/siRNA-survivin对肿瘤的靶向性及抗人前列腺癌效应。方法:复制裸鼠前列腺癌皮下移植瘤模型,分别将已构建的重组表达质粒siRNA-scramble,p53,siRNA-s... 目的:以人减毒沙门氏菌为基因运载体,探讨其携带p53、siRNA-survivin及其共表达质粒p53/siRNA-survivin对肿瘤的靶向性及抗人前列腺癌效应。方法:复制裸鼠前列腺癌皮下移植瘤模型,分别将已构建的重组表达质粒siRNA-scramble,p53,siRNA-survivin及共表达质粒p53/siRNA-survivin转化到减毒人伤寒沙门菌Ty21a,制备成对应重组减毒沙门菌,通过灌胃及瘤内注射到前列腺癌荷瘤裸鼠体内,观察成瘤时间及瘤块大小;以携有绿色荧光蛋白siRNA-survivin的重组菌作为报告基因,流式细胞术检测其在肝、脾、肿瘤组织中靶向分布及基因呈递作用;应用RT-PCR,Western blot,及免疫组织化学染色方法检测治疗后肿瘤组织p53和Survivin基因及蛋白表达。结果:各治疗组均较对照组肿瘤生长缓慢,肿瘤体积小,共表达质粒组与单独基因治疗组比较,肿瘤体积明显缩小,抑瘤率高;荷瘤裸鼠肿瘤组织可测及Survivin mRNA表达下降,p53基因表达增强,p53相关基因GRIM-19mRNA和蛋白表达增强;FCM检测结果发现,减毒人沙门氏菌可在肝、脾及肿瘤组织中存活及表达,但以肿瘤中绿色荧光聚集明显且维持时间较长,其他脏器仅见极少的绿色荧光。结论:人减毒沙门氏菌可作为外源基因载体携带重组质粒,对前列腺癌移植瘤有明显的靶向性,其靶向介导的p53,siRNA-survivin及共表达基因p53/siRNA-survivin,对前列腺癌荷瘤裸鼠有治疗作用,共表达基因较单基因治疗效果好,具有显著的协同作用。 展开更多

关键词 P53 SURVIVIN RNAi减毒沙门氏菌 前列腺癌

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Survivin-siRNA对前列腺癌PC-3M细胞增殖的抑制作用 被引量：11

2

作者 刘艳波 赵丽娟 +4 位作者 赵丽晶 赵丹 刘喜春 高丽芳 赵雪俭 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1873-1876,共4页

目的:探讨survivin-siRNA对前列腺癌细胞株PC-3M的增殖抑制作用。方法:构建两个针对survivin siRNA表达载体,与脂质体和空质粒两个对照组一起分别转染前列腺癌PC-3M细胞后,利用半定量RT-PCR和Western blotting分别检测细胞survivin mRN... 目的:探讨survivin-siRNA对前列腺癌细胞株PC-3M的增殖抑制作用。方法:构建两个针对survivin siRNA表达载体,与脂质体和空质粒两个对照组一起分别转染前列腺癌PC-3M细胞后,利用半定量RT-PCR和Western blotting分别检测细胞survivin mRNA及蛋白表达水平,MTT法测定细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果:转染72h后,两个实验组细胞的survivin mRNA水平是脂质体组的48%±6%(n=3)和30%±5%(n=3),蛋白表达水平是脂质体组的38%±4%(n=3)和36%±4%(n=3)。MTT检测实验组细胞的生长速度分别是脂质体组的44.20%±2.08%(n=3)和39.20%±1.93%(n=3),流式细胞术发现实验组G1期细胞比例明显高于两个对照组,而G2期和S期细胞比例减少,细胞出现凋亡。结论:利用survivin-siRNA可明显抑制前列腺癌PC-3M细胞的增殖,细胞受阻于G1期,诱导细胞凋亡,为进一步进行动物体内研究奠定了基础。 展开更多

关键词 RNA干扰 前列腺肿瘤 PC-3M细胞 细胞凋亡 SURVIVIN

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人参单体皂苷Rh_2诱导小鼠前列腺癌RM-1细胞凋亡 被引量：7

3

作者 何静春 孟艳 +2 位作者 赵洪艳 赵丽娟 赵雪俭 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期655-657,777,F0002,共5页

目的：探讨人参单体皂苷Rh2抗小鼠前列腺癌细胞RM-1的作用机制。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）还原法检测不同浓度Rh2与RM-1细胞株存活率的关系;吖啶橙染色观察Rh2诱导细胞凋亡情况;流式细胞仪分析细胞凋亡周期,计算细胞平均凋亡指... 目的：探讨人参单体皂苷Rh2抗小鼠前列腺癌细胞RM-1的作用机制。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）还原法检测不同浓度Rh2与RM-1细胞株存活率的关系;吖啶橙染色观察Rh2诱导细胞凋亡情况;流式细胞仪分析细胞凋亡周期,计算细胞平均凋亡指数。结果：RM-1细胞经Rh2处理后,细胞生长明显受抑制,当Rh2浓度为5、15、25和30mg·L^-1时,其生长抑制率分别为12.0%、36.1%、51.2%和69.3%,呈明显的浓度依赖性;吖啶橙荧光染色可见经药物处理的细胞呈现明显的凋亡形态;细胞周期G1期前出现凋亡峰,Rh2浓度为15和25mg·L^-1时,细胞凋亡率分别为41.9%和48.9%。结论：5-30mg·L^-1Rh2可诱导RM-1细胞凋亡,其具有明显的抗肿瘤作用。 展开更多

关键词 细胞凋亡 人参单体皂苷Rh2 前列腺肿瘤 细胞周期

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Survivin-siRNA对前列腺癌DU145细胞的促凋亡作用 被引量：6

4

作者 刘艳波 沈维高 +3 位作者 芦丽莉 葛贺 盖晓东 赵雪俭 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1474-1478,共5页

目的:探讨survivin-siRNA对前列腺癌细胞株DU145的促凋亡作用。方法:构建针对survivin的siRNA表达载体pSi-sur,与脂质体和scramble-siRNA(pSi-scrambled)对照组分别转染前列腺癌细胞DU145后,利用半定量RT-PCR和Western blotting分别检... 目的:探讨survivin-siRNA对前列腺癌细胞株DU145的促凋亡作用。方法:构建针对survivin的siRNA表达载体pSi-sur,与脂质体和scramble-siRNA(pSi-scrambled)对照组分别转染前列腺癌细胞DU145后,利用半定量RT-PCR和Western blotting分别检测细胞survivin mRNA及蛋白表达水平;吖啶橙染色、Annexin V-FITC流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果:转染72 h后,实验组细胞的survivin mRNA水平是脂质体组的0.28±0.07(n=3),蛋白表达水平是脂质体组的0.34±0.05(n=3),与对照组比较,差异显著(P<0.05);吖啶橙染色、Annexin V-FITC和TUNEL法均观察到实验组细胞呈现明显的凋亡现象。结论:利用survivin-siRNA可明显抑制前列腺癌细胞DU145 survivin基因和蛋白表达,并诱导细胞凋亡,结果为进一步进行动物体内研究奠定了基础。 展开更多

关键词 RNA干扰 SURVIVIN 前列腺肿瘤 DU145细胞 细胞凋亡

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DIM对人激素非依赖性前列腺癌细胞PC3M的生长抑制作用 被引量：4

5

作者 潘玉琢 李扬 +3 位作者 赵燕颍 赵丹 禹彬 赵雪俭 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期1034-1036,共3页

目的:探讨3,3-二吲哚基甲烷(3,3-Diindolylmethane,DIM)对人激素非依赖性前列腺癌细胞PC3M的生长抑制作用。方法:应用MTT生长抑制实验观察不同浓度DIM对PC3M细胞增殖活性的影响,流式细胞术观察不同浓度DIM对PC3M细胞的细胞周期及细胞凋... 目的:探讨3,3-二吲哚基甲烷(3,3-Diindolylmethane,DIM)对人激素非依赖性前列腺癌细胞PC3M的生长抑制作用。方法:应用MTT生长抑制实验观察不同浓度DIM对PC3M细胞增殖活性的影响,流式细胞术观察不同浓度DIM对PC3M细胞的细胞周期及细胞凋亡的影响。结果:不同浓度的DIM对PC3M细胞有显著的增殖抑制作用(P<0.05),药物浓度为10、30、60和120μmol.L-1时,抑制率分别为35.6%、58.8%、76.6%和90.5%。当药物浓度为60μmol.L-1时,细胞周期停滞在G1期,并诱导22.6%的PC3M细胞发生凋亡。结论:DIM可抑制PC3M细胞增殖,并诱导其凋亡,为DIM用于激素非依赖性前列腺癌的治疗提供了实验依据。 展开更多

关键词 前列腺肿瘤 3 3-二吲哚基甲烷 细胞凋亡 激素非依赖性

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人前列腺癌多药耐药细胞系的建立 被引量：5

6

作者 潘玉琢 赵燕颖 +1 位作者 赵雪俭 李扬 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期651-654,F0002,共5页

目的:建立人前列腺癌多药耐药细胞系。方法:以顺铂为诱导药物,人前列腺癌细胞PC3M为诱导对象,采用大剂量冲击与逐步增加剂量相结合的方法,诱导建立人前列腺癌多药耐药细胞系PC3M/CDDP;MTT法检测药物敏感性,免疫细胞化学法检测P-糖蛋白(P... 目的:建立人前列腺癌多药耐药细胞系。方法:以顺铂为诱导药物,人前列腺癌细胞PC3M为诱导对象,采用大剂量冲击与逐步增加剂量相结合的方法,诱导建立人前列腺癌多药耐药细胞系PC3M/CDDP;MTT法检测药物敏感性,免疫细胞化学法检测P-糖蛋白(P-gP)、多药耐药相关蛋白(MRP)的表达。结果:经顺铂诱导建立的人前列腺癌细胞系PC3M/CDDP对顺铂、丝裂霉素、阿霉素、5-氟尿嘧啶、长春新碱等药物的50%抑制浓度(IC50)分别为(0.603±0.102)、(0.201±0.056)、(0.267±0.067)、(1.676±0.321)和(0.657±0.227)mg·L-1,与PC3M细胞系比较差异有显著性(P<0.05);免疫细胞化学染色结果显示,PC3M/CDDP细胞系MRP、P-gP表达强度明显大于PC3M细胞系(P<0.05);PC3M/CDDP细胞系的细胞倍增时间为40.5h,与PC3M细胞系(48.6h)比较差异无显著性(P>0.05)。结论:成功建立稳定的人前列腺癌PC3M/CDDP细胞系,该细胞系具有对多种抗癌药耐药及细胞增殖未受影响的特点,可应用于下游实验。 展开更多

关键词 人前列腺癌细胞 多药耐药相关蛋白质类 P-糖蛋白 抗肿瘤药

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尾叶香茶菜二萜类化合物B对小鼠前列腺癌细胞细胞周期的影响及其机制 被引量：4

7

作者 刘亚男 邵月婷 +4 位作者 李晓洁 汲坤 邵晨 李扬 赵雪俭 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1916-1921,共6页

目的:观察尾叶香茶菜二萜类化合物B(DB)对小鼠前列腺癌细胞株RM-1细胞周期的影响并分析其机制。方法:MTT法观察不同时间、不同剂量的DB对RM-1细胞增殖率的影响;相差显微镜观察对RM-1细胞形态影响;流式细胞术分析细胞周期变化;RT-PCR和We... 目的:观察尾叶香茶菜二萜类化合物B(DB)对小鼠前列腺癌细胞株RM-1细胞周期的影响并分析其机制。方法:MTT法观察不同时间、不同剂量的DB对RM-1细胞增殖率的影响;相差显微镜观察对RM-1细胞形态影响;流式细胞术分析细胞周期变化;RT-PCR和Western blotting分别观察DB作用后RM-1细胞p53、GRIM-19、STAT3和细胞周期相关因子CHK1、CDK2mRNA和蛋白水平的表达。结果:(1)MTT结果:DB可抑制RM-1细胞的增殖,呈时间、剂量依赖性;(2)形态学观察和流式细胞术检测:经DB处理后的RM-1细胞出现生长抑制,细胞主要阻滞在G1期;(3)RT-PCR结果:DB(2mg/L,4mg/L,8mg/L)分别作用RM-1细胞12h、24h、48h后,p53、CHK1、GRIM-19mRNA的含量明显高于对照组,CDK2、STAT3mRNA的含量明显低于对照组(P<0.05);(4)Western blotting结果:DB(2mg/L,4mg/L,8mg/L)分别作用RM-1细胞12h、24h、48h后,P53、GRIM-19蛋白表达水平高于对照组,而CDK2蛋白表达水平则低于对照组。结论:DB可抑制RM-1细胞增殖,其机制可能是与细胞周期相关基因p53的上调,CDK2表达下降有关,影响了G1期进入S期,同时GRIM-19-STAT3-CDK2途径可能也参与G1期阻滞的过程。 展开更多

关键词 二萜类 尾叶香茶菜 前列腺癌 细胞周期 P53

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聚肌胞对小鼠前列腺癌的抑制作用 被引量：3

8

作者 田原僮 潘玉琢 +3 位作者 赵燕颖 范文静 赵丽娟 赵雪俭 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期819-821,共3页

目的:观察聚肌胞对小鼠前列腺癌的抑制作用。方法:将16只C57BL6/J纯系荷瘤小鼠按瘤重采用区组随机分组方法分为对照组和聚肌胞组,每组8只,每隔2日分别瘤内注射生理盐水和聚肌胞,第7次后切除瘤灶,称瘤重,计算瘤重抑制率,绘制前列腺癌生... 目的:观察聚肌胞对小鼠前列腺癌的抑制作用。方法:将16只C57BL6/J纯系荷瘤小鼠按瘤重采用区组随机分组方法分为对照组和聚肌胞组,每组8只,每隔2日分别瘤内注射生理盐水和聚肌胞,第7次后切除瘤灶,称瘤重,计算瘤重抑制率,绘制前列腺癌生长曲线及荷瘤鼠生存曲线。前列腺癌组织HE染色观察形态学变化。结果:对照组和聚肌胞组瘤重分别为(4·14±1·56)和(1·58±0·67)g,两组瘤重比较差异具有显著性(P<0·05);聚肌胞组瘤重抑制率为67·85%;前列腺癌生长曲线显示,聚肌胞组小鼠前列腺癌生长较慢;聚肌胞组荷瘤小鼠的生存时间较对照组长(P<0·05);病理显示对照组较聚肌胞组前列腺癌细胞增殖活跃。结论:聚肌胞可以减慢小鼠前列腺癌的生长,延长荷瘤小鼠生存时间。 展开更多

关键词 前列腺肿瘤 聚肌胞苷酸 死亡率

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Survivin-siRNA真核重组质粒对前列腺癌移植瘤的抑制作用 被引量：3

9

作者 郭鹏 沈维高 +3 位作者 赵丽晶 闫喜惠 刘艳波 赵雪俭 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期2178-2181,共4页

目的:探讨survivin-siRNA真核重组质粒对前列腺癌移植瘤的抑瘤效应,并分析相关机制。方法:体外培养前列腺癌DU145细胞,将细胞注射到裸鼠背部皮下,待移植瘤直径达到8 mm时将瘤无菌取出,分成直径约2 mm的瘤块,手术植入另外的裸鼠皮下,将su... 目的:探讨survivin-siRNA真核重组质粒对前列腺癌移植瘤的抑瘤效应,并分析相关机制。方法:体外培养前列腺癌DU145细胞,将细胞注射到裸鼠背部皮下,待移植瘤直径达到8 mm时将瘤无菌取出,分成直径约2 mm的瘤块,手术植入另外的裸鼠皮下,将survivin-siRNA质粒或scrambled siRNA对照质粒电转染进行治疗,描记移植瘤生长曲线,并计算抑制率;通过HE染色、免疫组化染色及TUNEL染色观察survivin-siRNA对移植瘤影响。结果:成功构建裸鼠前列腺癌移植瘤模型。与mock和scrambled siRNA组相比,survivin-siRNA抑瘤率分别为两对照组的61.81%和62.87%;免疫组织化学染色发现:survivin-siRNA质粒明显抑制细胞内survivin表达;TUNEL染色证实治疗组肿瘤细胞凋亡明显增加。结论:重组质粒survivin-siRNA明显抑制DU145细胞移植瘤的生长,抑制内源性survivin蛋白的表达并促进细胞凋亡,针对survivin靶点的基因治疗前景广阔。 展开更多

关键词 小干扰RNA 前列腺肿瘤 存活蛋白 裸鼠

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携带pGRIM-19-si-survivin共表达质粒的减毒沙门菌对前列腺癌移植瘤的体内抑制作用 被引量：2

10

作者 赵晓晖 芦丽莉 +3 位作者 葛贺 李冰 赵雪俭 刘艳波 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期961-967,共7页

目的:探讨人减毒沙门菌携带pGRIM-19-si-survivin共表达质粒对人前列腺癌皮下移植瘤生长的抑制作用及相关机制。方法:复制裸鼠前列腺癌皮下移植瘤模型,通过腹腔注射携带共表达质粒的减毒沙门菌进行治疗,实时监测肿瘤体积;运用免疫组织... 目的:探讨人减毒沙门菌携带pGRIM-19-si-survivin共表达质粒对人前列腺癌皮下移植瘤生长的抑制作用及相关机制。方法:复制裸鼠前列腺癌皮下移植瘤模型,通过腹腔注射携带共表达质粒的减毒沙门菌进行治疗,实时监测肿瘤体积;运用免疫组织化学染色法、RT-PCR法和TUNEL法检测携带pGRIM-19-si-survivin共表达质粒的减毒沙门菌对肿瘤抑制作用的相关机制。结果:与psi-survivin或pGRIM-19单基因治疗对照组比较,携带pGRIM-19-si-survivin共表达质粒减毒沙门菌组肿瘤体积明显缩小,其缩小率分别约为2.36和3.02倍;肿瘤组织内survivin mRNA及蛋白表达明显下降(P<0.05),GRIM-19 mRNA及蛋白表达明显增高(P<0.05),凋亡相关蛋白Bcl-xL、Stat3、cyclin D1和c-Myc的mRNA表达明显降低(P<0.05),血管内皮生长因子(VEGF)mRNA及Ki67蛋白表达降低而caspase-3 mRNA表达明显上调(P<0.05),同时细胞凋亡明显。结论:携带pGRIM-19-si-survivin共表达质粒的减毒沙门菌明显抑制裸鼠前列腺癌皮下移植瘤的生长,其发生机制与促进细胞凋亡及抑制肿瘤细胞增殖有关。 展开更多

关键词 RNA干扰 存活蛋白 GRIM-19 前列腺肿瘤 减毒沙门菌

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雌激素受体2对前列腺癌细胞系PC-3M增殖的影响 被引量：2

11

作者 李峰 李帅 +4 位作者 郭丽荣 邵月婷 汲坤 李扬 赵雪俭 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期656-660,共5页

目的:构建带有人雌激素受体2(ESR2)全长cDNA的重组质粒pcDNA3.1-hERβ,转染人前列腺癌PC-3M细胞株,观察ESR2对细胞增殖能力的影响。方法:RT-PCR方法从人正常卵巢组织中获取ESR2全长cDNA,利用基因重组技术与真核表达载体pcDNA3.1连接,构... 目的:构建带有人雌激素受体2(ESR2)全长cDNA的重组质粒pcDNA3.1-hERβ,转染人前列腺癌PC-3M细胞株,观察ESR2对细胞增殖能力的影响。方法:RT-PCR方法从人正常卵巢组织中获取ESR2全长cDNA,利用基因重组技术与真核表达载体pcDNA3.1连接,构建重组质粒pcDNA3.1-hERβ;瞬时转染前列腺癌PC-3M细胞株,应用细胞计数、MTT法及流式细胞术检测细胞增殖能力的改变;半定量RT-PCR法及Westernblotting法分别检测增殖相关基因cyclinD1和P21Cip1mRNA及蛋白表达。结果:DNA测序结果显示扩增的ESR2序列与GenBank(NM_001437)所公布的序列完全一致。重组质粒pcDNA3.1-hERβ瞬时转染人PC-3M细胞48 h后,与质粒对照组相比:RT-PCR法及Western blotting法显示,ESR2基因在mRNA水平和蛋白水平的表达均明显增加;细胞计数及MTT结果发现,细胞数目减少,细胞增殖活性下降(P<0.01);流式细胞实验显示,G0/G1期细胞比例增加(P<0.05),S期及G2/M期细胞比例减少(P<0.05);RT-PCR及Western blotting结果还发现cyclinD1的表达减弱,而P21Cip1的表达增强。结论:成功构建pcDNA3.1-hERβ重组质粒;带有ESR2全长基因的重组质粒转染PC-3M细胞后,细胞的增殖活性受到抑制;RSR2可能通过影响细胞增殖相关基因cyclinD1和P21Cip1的表达抑制细胞的增殖。 展开更多

关键词 受体 雌激素 PC-3M细胞 真核表达

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前列腺组织STEAP表达与H2O2水平的关系 被引量：2

12

作者 潘玉琢 郭丽荣 +2 位作者 梁爽 李扬 赵雪俭 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期354-356,共3页

目的:探讨STEAP基因的功能。方法:应用RT-PCR、免疫印迹的方法,检测STEAP mRNA和蛋白在国人正常前列腺、前列腺癌组织中的表达水平。应用钼酸还原法检测正常前列腺内腺、外腺及前列腺癌组织H2O2水平,同时应用黄嘌呤氧化法测定3种组织中... 目的:探讨STEAP基因的功能。方法:应用RT-PCR、免疫印迹的方法,检测STEAP mRNA和蛋白在国人正常前列腺、前列腺癌组织中的表达水平。应用钼酸还原法检测正常前列腺内腺、外腺及前列腺癌组织H2O2水平,同时应用黄嘌呤氧化法测定3种组织中SOD水平,分析其与STEAP表达的相关性。结果:国人前列腺癌STEAP mRNA和蛋白高表达;前列腺癌组织中H2O2水平及总SOD水平明显高于正常前列腺。结论:STEAP的功能之一可能是诱导内源性H2O2水平增高,促进细胞快速生长。 展开更多

关键词 前列腺肿瘤 过氧化氢 前列腺6个跨膜上皮抗原

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siRNA-survivin与GRIM-19共表达质粒的构建及其对前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用 被引量：2

13

作者 沈维高 赵丽晶 +5 位作者 盖晓东 芦丽莉 葛贺 陈立松 刘艳波 赵雪俭 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1241-1246,共6页

目的:构建siRNA-survivin与GRIM-19共表达质粒pGRIM-19-si-survivin并鉴定,观察pGRIM-19-si-survivin质粒对人前列腺癌DU145细胞survivin和GRIM-19 mRNA表达水平及细胞增殖能力的影响。方法:根据前期工作,利用基因重组技术构建siRNA-sur... 目的:构建siRNA-survivin与GRIM-19共表达质粒pGRIM-19-si-survivin并鉴定,观察pGRIM-19-si-survivin质粒对人前列腺癌DU145细胞survivin和GRIM-19 mRNA表达水平及细胞增殖能力的影响。方法:根据前期工作,利用基因重组技术构建siRNA-survivin与GRIM-19共表达质粒,将成功构建的pGRIM-19-si-survivin质粒转染人前列腺癌DU145细胞株,应用半定量RT-PCR方法检测细胞内survivin和GRIM-19 mRNA表达水平,应用MTT法观察其对细胞增殖能力的影响。结果:(1)应用酶切及质粒测序法鉴定,证明成功构建siRNA-survivin与GRIM-19共表达质粒。(2)与mock组比较,psi-survivin、pGRIM-19及pGRIM-19-si-survivin组survivin mRNA表达水平分别为0.55±0.05、0.62±0.08和0.35±0.05,差异显著(P<0.01);与psi-survivin和pGRIM-19组比较,pGRIM-19-si-survivin的抑制survivin表达作用明显增强(P<0.05);psi-survivin、pGRIM-19和pGRIM-19-si-survivin组GRIM-19表达增强,分别为mock组的1.93±0.14、2.57±0.20和4.12±0.21(P<0.01),与pGRIM-19组比较,pGRIM-19-si-survivin增强GRIM-19表达作用更明显(P<0.05)。(3)转染48 h后,与mock组比较,psi-survivin、pGRIM-19和pGRIM-19-si-survivin 3组细胞增殖率分别为58.0%±7.2%、62.1%±6.1%和50.2%±4.8%,差异显著(P<0.05);转染72 h后,与mock组比较,3组细胞增殖率分别为43.4%±4.3%、51.3%±6.7%和26.8%±7.1%,差异明显(P<0.05,P<0.01);与psi-survivin和pGRIM-19组比较,pGRIM-19-si-survivin抑制作用明显增强(P<0.05)。结论:成功构建siRNA-survivin和GRIM-19共表达质粒pGRIM-19-si-survivin;该质粒抑制survivin表达并增强GRIM-19表达,对前列腺癌DU145细胞具有协同增殖抑制效应。 展开更多

关键词 前列腺肿瘤 存活蛋白 GRIM-19

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Poly I∶C对人前列腺癌细胞PC-3M的生长抑制作用 被引量：1

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作者 赵燕颖 潘玉琢 +3 位作者 李扬 刘亚男 高丽芳 赵雪俭 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期64-66,F0003,共4页

目的:观察聚肌胞(PolyI∶C)对体外培养的人前列腺癌细胞PC-3M生长的抑制作用。方法:前列腺癌PC-3M细胞经不同剂量PolyI∶C(100、200和400μg.L-1)作用后,相差显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞... 目的:观察聚肌胞(PolyI∶C)对体外培养的人前列腺癌细胞PC-3M生长的抑制作用。方法:前列腺癌PC-3M细胞经不同剂量PolyI∶C(100、200和400μg.L-1)作用后,相差显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期变化。结果:对照组细胞呈梭形贴壁生长,细胞数目多,PolyI∶C组细胞变圆贴壁不佳,细胞数目变少。PolyI∶C 400μg.L-1组的生长抑制率最高,200μg.L-1组次之,100μg.L-1组最低,三组间比较差异有显著性(P<0.05);Poly I∶C同一剂量组生长抑制率72 h最高,48 h次之,24 h时最低,三组间比较差异有显著性(P<0.05)。流式细胞检测结果显示:PolyI∶C可诱导PC-3M凋亡,凋亡率呈剂量依赖性,分别为3.9%、27.1%和42.9%,三组间比较差异有显著性(P<0.05)。PolyI∶C组细胞处于G1期的百分率(61.4%)明显高于对照组(33.9%)(P<0.05)。结论:PolyI∶C能抑制体外培养的PC-3M细胞生长,对PC-3细胞有显著的增殖抑制作用,呈剂量依赖性和时间依赖性,其机制可能与细胞周期阻滞、诱导细胞凋亡有关。 展开更多

关键词 聚肌胞 前列腺肿瘤 凋亡 细胞周期

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前列腺癌患者外周血单个核细胞PSA mRNA表达

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作者 毛建华 张灵 +7 位作者 计国义 潘玉琢 高洪文 王伟华 孔祥波 赵丹 李扬 赵雪俭 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期470-472,共3页

目的：检测前列腺癌患者及对照者外周血单个核细胞前列腺特异性抗原（PSA）mRNA表达，并探讨其临床意义。方法：选择39例前列腺癌患者，12例健康体检者作为对照，取5mL静脉血，肝素抗凝，Ficoll密度梯度离心分离外周血单个核细胞，RT-PC... 目的：检测前列腺癌患者及对照者外周血单个核细胞前列腺特异性抗原（PSA）mRNA表达，并探讨其临床意义。方法：选择39例前列腺癌患者，12例健康体检者作为对照，取5mL静脉血，肝素抗凝，Ficoll密度梯度离心分离外周血单个核细胞，RT-PCR检测PSA mRNA表达。结果：①39例前列腺癌患者外周血单个核细胞PSA mRNA表达阳性检出率66．7％（26／39），其中血清PSA〉20.0μg·L^-1者23例，PSA mRNA表达阳性检出率87．9％（20／23）；血清PSA≤20．0μg·L^-1者16例，PsA mRNA表达阳性检出率37．5％（6／16）。对照组未见阳性表达。②16例血清PSA≤20．0μg·L^-1的前列腺癌患者PSA mRNA阳性表达的Gleason评分为；1～4分0／3，5～7分1／8，8～10分5／5，6例阳性者均为中、低分化癌。结论：外周血单个核细胞PSA mRNA的检测在血清PSA〉20．0μg·L^-1的前列腺癌患者中具有较高的敏感度，是一种可靠的检测方法。血清PSA≤20．0μg·L^-1的前列腺癌患者外周血单个核细胞PSA mRNA的检测可以预示微转移的发生。 展开更多

关键词 前列腺特异性抗原 前列腺肿瘤 单个核细胞 逆转录聚合酶链反应

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锌对前列腺癌细胞PC-3M凋亡的影响 被引量：5

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作者 刘瑾 张灵 +4 位作者 李晓萌 许莉 汲坤 赵雪俭 李扬 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期808-811,共4页

目的:探讨锌对前列腺癌细胞PC-3M凋亡的影响。方法:分别选用不同浓度ZnSO4·7H2O(终浓度分别为6·25、15、25、50、100、150、200、250及300μmol·L-1)作用于PC-3M细胞24h,用MTT法筛选对PC-3M细胞增殖抑制的有效浓度,利用... 目的:探讨锌对前列腺癌细胞PC-3M凋亡的影响。方法:分别选用不同浓度ZnSO4·7H2O(终浓度分别为6·25、15、25、50、100、150、200、250及300μmol·L-1)作用于PC-3M细胞24h,用MTT法筛选对PC-3M细胞增殖抑制的有效浓度,利用吖啶橙/溴化乙锭染色、DNAladder及流式细胞术检测PC-3M细胞凋亡情况。结果:MTT显示,锌的浓度在250μmol·L-1时,PC-3M细胞存活率显著低于对照组(P<0·01)。Zn2+浓度达250μmol·L-1时,相差显微镜下细胞形态变化明显,细胞变长,并伸出较长的突起,细胞分裂相明显减少,细胞数量较对照组明显减少。吖啶橙/溴化乙锭染色显示,对照组细胞形态为规则的圆形,细胞膜光滑无皱缩和发泡,呈现均匀的绿色,偶可见橙色细胞(自然凋亡细胞);Zn2+(250μmol·L-1)作用后,相差显微镜下可观察到较多早期凋亡细胞,细胞多为圆形,但细胞膜较对照组粗糙,细胞呈绿色,细胞核中有鲜绿色的斑点;也可观察到较多的晚期凋亡细胞,细胞形状不规则,细胞膜粗糙,有较多突起,被吖啶橙染成橙色,细胞中有鲜亮的橙色斑点。DNAladder可见梯形条带出现;流式细胞术显示亚二倍体峰的出现,细胞凋亡率为13·3%。上述各项指标均显示PC-3M细胞的凋亡水平明显高于对照组(P<0·05)。结论:高Zn2+可以抑制前列腺癌细胞生长并诱导前列腺癌细胞凋亡。 展开更多

关键词 锌 PC-3M细胞 细胞凋亡

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吸烟相关剂量镉对大鼠肾脏形态和功能影响的实验研究

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作者 王波 邵晨 +1 位作者 刘亚男 李扬 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第A10期2069-2069,共1页

关键词 大鼠 肾脏功能 模型组 肾脏组织 不典型增生 肾小球系膜细胞 管细胞 阳性细胞 周和 免疫组织化学

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STAT3-siRNA对胃癌细胞株SGC-7901增殖与凋亡的影响 被引量：11

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作者 孙莹 于浩 +2 位作者 张灵 高丽芳 赵雪俭 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期393-395,共3页

目的:探讨siRNA沉默STAT3基因表达对胃癌细胞的生长抑制作用。方法:用已构建pGCsi-lencerH1/STAT3siRNA重组质粒,转染胃癌细胞SGC-7901,采用Western blotting、RT-PCR技术观察重组质粒对STAT3基因表达的影响;用MTT法观察重组质粒对胃癌... 目的:探讨siRNA沉默STAT3基因表达对胃癌细胞的生长抑制作用。方法:用已构建pGCsi-lencerH1/STAT3siRNA重组质粒,转染胃癌细胞SGC-7901,采用Western blotting、RT-PCR技术观察重组质粒对STAT3基因表达的影响;用MTT法观察重组质粒对胃癌细胞的生长抑制作用;用流式细胞术和TUNEL法检测重组质粒诱导的胃癌细胞凋亡。结果:用pGCsilencerH1/STAT3-siRNA重组质粒转染人胃癌细胞,Western blotting及RT-PCR结果证实重组质粒在蛋白及mRNA水平分别显著地抑制STAT3基因表达,STAT3-siRNA抑制率分别为85.43%及80.75%,与对照组相比,有显著差异(P<0.01)。MTT和流式细胞术结果证明上述重组质粒可显著抑制胃癌细胞的生长(抑制率为63%)并诱导胃癌细胞凋亡。结论:pGCsilencerH1/STAT3-siRNA可抑制STAT3在胃癌细胞中表达,并抑制胃癌细胞生长,促进细胞凋亡。 展开更多

关键词 胃肿瘤 RNA干扰 STAT3 细胞凋亡

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人参皂苷Rh_2诱导PC-3M细胞凋亡及其对新基因GRIM-19表达的影响 被引量：8

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作者 邵月婷 李峰 +4 位作者 高丽芳 孙连坤 胡嘉弟 李扬 赵雪俭 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期186-188,193,共4页

目的:研究人参单体皂苷Rh2对激素非依赖性人前列腺癌细胞(PC-3M细胞株)的致凋亡作用及其对新基因GRIM-19表达的影响。方法:实验分为Rh2高剂量组(40 mg.L-1)、Rh2中剂量组(30 mg.L-1)、Rh2低剂量组(15 mg.L-1)及对照组(未加药组)。分别... 目的:研究人参单体皂苷Rh2对激素非依赖性人前列腺癌细胞(PC-3M细胞株)的致凋亡作用及其对新基因GRIM-19表达的影响。方法:实验分为Rh2高剂量组(40 mg.L-1)、Rh2中剂量组(30 mg.L-1)、Rh2低剂量组(15 mg.L-1)及对照组(未加药组)。分别作用于PC-3M细胞24 h,吖啶橙染色观察其对PC-3M细胞的促凋亡作用;RT-PCR和Western blotting方法分别检测Rh2对PC-3M细胞GRIM-19 mRNA及其蛋白表达的影响。结果:Rh2高、中、低剂量组作用于PC-3M细胞24h吖啶橙染色均呈阳性结果。Rh2低剂量组出现典型“出芽”现象,细胞中出现致密鲜亮橙色斑点。对照组细胞呈均匀绿色;RT-PCR结果显示,GRIM-19 mRNA随Rh2浓度的增加表达逐渐增强,Rh2中、低剂量组与对照组比较差异具有显著性(P<0.05),Rh2高剂量组GRIM-19 mRNA表达与对照组比较差异具有高度显著性(P<0.01)。Western blotting结果与RT-PCR结果相一致,GRIM-19蛋白随Rh2浓度的增加其表达逐渐增强,Rh2中低剂量组与对照组比较差异具有显著性(P<0.05),Rh2高剂量组GRIM-19蛋白的表达与对照组比较差异具有高度显著性(P<0.01)。结论:Rh2诱导PC-3M细胞凋亡与上调GRIM-19基因和蛋白表达有关,其表达强度呈剂量依赖性。 展开更多

关键词 前列腺肿瘤 细胞凋亡 人参皂苷 GRIM-19

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细胞死亡调节因子GRIM-19蛋白在肾脏透明细胞癌组织中的表达及意义 被引量：2

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作者 汲坤 王波 +5 位作者 李馨 于浩 张灵 胡嘉弟 赵雪俭 李扬 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期146-149,F0003,共5页

目的:探讨细胞死亡调节因子(GRIM-19)蛋白在肾脏透明细胞癌组织和正常肾组织中的表达及意义,阐明GRIM-19在肾脏透明细胞癌发生发展中的抑癌作用。方法:采用免疫组织化学染色方法检测21例肾脏透明细胞癌组织和7例正常肾组织GRIM-19蛋白... 目的:探讨细胞死亡调节因子(GRIM-19)蛋白在肾脏透明细胞癌组织和正常肾组织中的表达及意义,阐明GRIM-19在肾脏透明细胞癌发生发展中的抑癌作用。方法:采用免疫组织化学染色方法检测21例肾脏透明细胞癌组织和7例正常肾组织GRIM-19蛋白的表达;RT-PCR方法检测4例正常肾组织和8例肾脏透明细胞癌组织中GRIM-19基因mRNA的表达。结果:免疫组化检测GRIM-19蛋白在肾脏透明细胞癌组织中阳性表达率为52.3%(11/21),在正常肾脏组织的阳性表达率为100%(7/7),两者比较差异有显著性(P<0.05)。病理分级Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级的肾脏透明癌组织中的表达率分别为100%(6/6)、40%(4/10)和20%(1/5),三种病理分级GRIM-19表达率比较差异有显著性(P<0.01)。RT-PCR检测GRIM-19基因在肾脏透明细胞癌组织中阳性表达率为62.5%(5/8),在正常肾脏组织的阳性表达率为100%(4/4),两者比较差异有显著性(P<0.01)。结论:GRIM-19在肾脏透明细胞癌基因和蛋白水平表达明显下降,并与其病理分级存在明显的关联性,提示GRIM-19蛋白可能在肾脏透明细胞癌发生发展中发挥抑癌作用。 展开更多

关键词 肾透明细胞肿瘤 细胞死亡调节因子 免疫组织化学 逆转录聚合酶链反应

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