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rhKD/APPvar毕赤酵母分泌表达质粒的构建及其重组蛋白的表达和纯化
1
作者
王心童
王虹蛟
+3 位作者
王强
孟威宏
颜炜群
任立群
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第3期529-533,共5页
目的:构建高效分泌表达重组人淀粉样蛋白前体Kunitz型蛋白酶抑制剂结构域变异体(rhKD/APPvar)的毕氏酵母工程菌,建立适合大规模发酵、纯化rhKD/APPvar的工艺。方法:利用已构建的rhKD/APP表达质粒,在其活性中心两侧设计2个酶切位点(ApaⅠ...
目的:构建高效分泌表达重组人淀粉样蛋白前体Kunitz型蛋白酶抑制剂结构域变异体(rhKD/APPvar)的毕氏酵母工程菌,建立适合大规模发酵、纯化rhKD/APPvar的工艺。方法:利用已构建的rhKD/APP表达质粒,在其活性中心两侧设计2个酶切位点(ApaⅠ和SacⅡ),实现人KD/APP活性中心RAM与BPTI活性中心KAR的替换,构建rhKD/APPvar表达质粒。将重组质粒转化到酵母菌X-33中,优化rhKD/APPvar表达最佳pH值,使rhKD/APPvar获得高效表达。利用阳离子交换树脂和超滤除盐对重组蛋白进行纯化。结果:酶切鉴定和测序分析显示成功构建了KD/APPvar-pPICZαC重组质粒。经电转化成功地将重组质粒转化至酵母菌X-33中。SDS-PAGE分析,甲醇诱导表达后在相对分子质量约6 700处出现蛋白条带,pH 6.0、甲醇诱导120h蛋白表达水平最高,经纯化获得纯度达95%的重组蛋白。结论:成功构建KD/APPvar-pPICZαC重组质粒,经毕赤酵母表达和纯化获得了rhKD/APPvar蛋白。
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关键词
毕赤酵母菌
重组KD
APP变异体
牛胰蛋白酶抑制剂
淀粉样蛋白前体
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职称材料
题名
rhKD/APPvar毕赤酵母分泌表达质粒的构建及其重组蛋白的表达和纯化
1
作者
王心童
王虹蛟
王强
孟威宏
颜炜群
任立群
机构
吉林大学
中日联谊医院神经内科
解放军第
沈阳军区总医院心血管内科
吉林大学再生医学科学研究所再生医学系
出处
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第3期529-533,共5页
基金
国家自然科学基金资助课题(30300153)
文摘
目的:构建高效分泌表达重组人淀粉样蛋白前体Kunitz型蛋白酶抑制剂结构域变异体(rhKD/APPvar)的毕氏酵母工程菌,建立适合大规模发酵、纯化rhKD/APPvar的工艺。方法:利用已构建的rhKD/APP表达质粒,在其活性中心两侧设计2个酶切位点(ApaⅠ和SacⅡ),实现人KD/APP活性中心RAM与BPTI活性中心KAR的替换,构建rhKD/APPvar表达质粒。将重组质粒转化到酵母菌X-33中,优化rhKD/APPvar表达最佳pH值,使rhKD/APPvar获得高效表达。利用阳离子交换树脂和超滤除盐对重组蛋白进行纯化。结果:酶切鉴定和测序分析显示成功构建了KD/APPvar-pPICZαC重组质粒。经电转化成功地将重组质粒转化至酵母菌X-33中。SDS-PAGE分析,甲醇诱导表达后在相对分子质量约6 700处出现蛋白条带,pH 6.0、甲醇诱导120h蛋白表达水平最高,经纯化获得纯度达95%的重组蛋白。结论:成功构建KD/APPvar-pPICZαC重组质粒,经毕赤酵母表达和纯化获得了rhKD/APPvar蛋白。
关键词
毕赤酵母菌
重组KD
APP变异体
牛胰蛋白酶抑制剂
淀粉样蛋白前体
Keywords
Pichia pastoris
rhKD/APPvar
bovine pancreatic trypsin inhibitor
amyloid protein precursor
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
rhKD/APPvar毕赤酵母分泌表达质粒的构建及其重组蛋白的表达和纯化
王心童
王虹蛟
王强
孟威宏
颜炜群
任立群
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2014
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