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A型流感病毒PB1-F2蛋白与蛋白激酶R相互作用研究: 1; 作者于洪敏金新 +2 位作者张茂林段铭关振宏《动物医学进展》北大核心 2017年第5期1-5,共5页; 为研究A型流感病毒的重要毒力因子PB1-F2对蛋白激酶R(PKR)的调控机制,通过纯化GST-PB1-F2融合蛋白,利用GST pull-down试验证实了PB1-F2与PKR发生相互作用;采用免疫荧光试验进一步验证了二者的相互关系;实时荧光定量PCR表明PB1-F2能负调... 展开更多; 关键词 A型流感病毒 PB1-F2 蛋白激酶R 蛋白磷酸化; 在线阅读下载PDF 职称材料

双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)的真核表达、纯化及鉴定被引量：2: 2; 作者关振宏李影 +1 位作者张茂林段铭《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第28期13521-13523,共3页; [目的]获得真核表达的Flag-PKR融合蛋白,以用于流感病毒相关的PKR信号通路调控机制研究。[方法]以RT-PCR方法扩增PKR目的基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.0-Flag中。将所构建的重组质粒pcDNA3.0-Flag-PKR转染293T细胞,利用Flag抗体... 展开更多; 关键词流感病毒双链RNA依赖的蛋白激酶真核表达纯化; 在线阅读下载PDF 职称材料

流感病毒PB1-F2蛋白通过激活ERK1/2激酶刺激AP-1转录因子的活化被引量：1: 3; 作者金新于洪敏 +3 位作者张茂林段铭李影关振宏《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期681-685,共5页; 为探索A型流感病毒PB1-F2蛋白对转录因子AP-1信号通路的调控机制,本研究通过荧光素酶报告基因试验检测PB1-F2蛋白的表达对AP-1转录活性的调控,利用荧光定量PCR和免疫印迹方法检测PB1-F2对c-Fos/AP-1的m RNA转录和ERK1/2磷酸化水平的影响... 展开更多; 关键词 A型流感病毒 PB1-F2蛋白 ERK1/2信号通路 AP-1转录因子; 在线阅读下载PDF 职称材料

旋毛虫肌幼虫p45cDNA的克隆及鉴定: 4; 作者孙树民吴秀萍 +7 位作者付宝权王学林郭恒于申业邓洪宽刘马峰 P.Boireau 刘明远《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期439-441,445,共4页; 目的本研究根据GenBank中旋毛虫45kDa抗原基因的序列设计引物,采用PCR技术从旋毛虫肌幼虫cDNA文库中扩增靶基因p45cDNA,并克隆到pMD-18T载体,转化至大肠埃希氏菌NovaBlue后测序分析。获得827bp的p45cD-NA。该序列与GenBank中的旋毛虫p4... 展开更多; 关键词旋毛虫 P45 CDNA 克隆表达抗原性; 在线阅读下载PDF 职称材料

酵母双杂交筛选人白细胞文库中与A型流感病毒PB1-F2相互作用的蛋白被引量：3: 5; 作者崔雨明侯佩莉 +3 位作者张茂林李鸿梅黄飞关振宏《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第3期1-5,共5页; 利用酵母双杂交技术筛选白细胞文库中与A型流感病毒PB1-F2相互作用的宿主蛋白,为研究PB1-F2蛋白的功能提供依据。构建pGBKT7-PB1-F2诱饵重组载体,在证实诱饵蛋白不具有自激活作用的前提下,以酵母双杂交系统筛选人白细胞文库中与PB1-F2... 展开更多; 关键词酵母双杂交 A型流感病毒 PB1-F2蛋白蛋白质相互作用; 在线阅读下载PDF 职称材料

酵母双杂交系统筛选与狂犬病病毒M蛋白相互作用的宿主蛋白被引量：1: 6; 作者张欢欢王甲慧 +2 位作者段铭张茂林关振宏《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第8期19-23,共5页; 为筛选人脑cDNA文库中与狂犬病病毒基质蛋白(M蛋白)具有相互作用的蛋白基因,并对阳性克隆进行初步的分析和鉴定。首先构建了含有M基因的诱饵质粒pGBKT7-CVS11-M,并对其进行自激活和毒性检测,然后采用酵母双杂交技术初步筛选出与M蛋白具... 展开更多; 关键词狂犬病病毒 M蛋白酵母双杂交蛋白质的相互作用; 在线阅读下载PDF 职称材料

H5N1禽流感病毒PB1-F2特异性单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2: 7; 作者徐国双刘恩华 +2 位作者张茂林段铭关振宏《动物医学进展》北大核心 2020年第7期1-6,共6页; 以重组的H5N1亚型禽流感病毒(AIV)PB1-F2的C端蛋白(cPB1-F2)为免疫原制备单克隆抗体,并鉴定其特异性。构建cPB1-F2的pGEX-6p-1原核表达载体,进行蛋白表达与纯化;采用杂交瘤技术制备筛选抗重组cPB1-F2蛋白的杂交瘤细胞株,利用间接免疫荧... 展开更多; 关键词禽流感病毒 H5N1 PB1-F2 单克隆抗体; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名A型流感病毒PB1-F2蛋白与蛋白激酶R相互作用研究: 1; 作者于洪敏金新张茂林段铭关振宏; 机构吉林大学人兽共患病教育部重点实验室人兽共患病研究所吉林农业大学动物科学技术学院; 出处《动物医学进展》北大核心 2017年第5期1-5,共5页; 基金国家重点基础研究发展计划(973计划)(2012CB518901); 文摘为研究A型流感病毒的重要毒力因子PB1-F2对蛋白激酶R(PKR)的调控机制,通过纯化GST-PB1-F2融合蛋白,利用GST pull-down试验证实了PB1-F2与PKR发生相互作用;采用免疫荧光试验进一步验证了二者的相互关系;实时荧光定量PCR表明PB1-F2能负调控PKR及IL-6的mRNA水平;采用siRNA干扰PKR基因的表达后,PB1-F2抑制IL-6的mRNA转录作用更显著。进一步运用蛋白免疫印迹方法检测了PB1-F2对PKR及其底物eIF-2α蛋白磷酸化水平的影响,显示过表达PB1-F2后,PKR及eIF-2α的磷酸化表达水平明显下调。本研究表明PB1-F2与PKR相互作用而抑制PKR磷酸化活化,并通过PKR调控IL-6的表达,为探索PB1-F2的未知生物学功能提供了重要信息。; 关键词 A型流感病毒 PB1-F2 蛋白激酶R 蛋白磷酸化; Keywords Influenza A virus PB1-F2 PKR protein phosphorylation; 分类号 S852.659.5 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)的真核表达、纯化及鉴定被引量：2: 2; 作者关振宏李影张茂林段铭; 机构吉林大学人兽共患病教育部重点实验室人兽共患病研究所吉林农业大学动物科学技术学院; 出处《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第28期13521-13523,共3页; 基金国家自然科学基金资助项目(30800824) 吉林大学农学部引进人才启动基金项目(4305050102B9); 文摘 [目的]获得真核表达的Flag-PKR融合蛋白,以用于流感病毒相关的PKR信号通路调控机制研究。[方法]以RT-PCR方法扩增PKR目的基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.0-Flag中。将所构建的重组质粒pcDNA3.0-Flag-PKR转染293T细胞,利用Flag抗体偶联的琼脂糖凝胶(anti-Flag M2-Agarose)纯化Flag-PKR融合蛋白,所得产物进行SDS-PAGE、Western blot及体外活性鉴定。[结果]重组质粒转染293T细胞,Western blot显示表达出的融合蛋白能够被抗Flag的抗体特异性识别,其相对分子量约为69 kDa,与Flag-PKR融合蛋白大小相符;体外磷酸化试验表明,Flag-PKR融合蛋白能够发生自动磷酸化。[结论]在293T细胞中表达、纯化了有活性的Flag-PKR融合蛋白,为PKR信号通路的研究奠定了基础。; 关键词流感病毒双链RNA依赖的蛋白激酶真核表达纯化; Keywords Influenza virus Double-stranded RNA-dependent protein kinase （PKR） Eukaryotic expression Purification; 分类号 S188 [农业科学—农业基础科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名流感病毒PB1-F2蛋白通过激活ERK1/2激酶刺激AP-1转录因子的活化被引量：1: 3; 作者金新于洪敏张茂林段铭李影关振宏; 机构吉林大学人兽共患病教育部重点实验室/人兽共患病研究所吉林农业大学动物科技学院; 出处《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期681-685,共5页; 基金国家重点基础研究发展计划(973计划)(2012CB518901); 文摘为探索A型流感病毒PB1-F2蛋白对转录因子AP-1信号通路的调控机制,本研究通过荧光素酶报告基因试验检测PB1-F2蛋白的表达对AP-1转录活性的调控,利用荧光定量PCR和免疫印迹方法检测PB1-F2对c-Fos/AP-1的m RNA转录和ERK1/2磷酸化水平的影响,并以ERK通路特异性抑制剂U0126抑制ERK1/2的活性后,以验证PB1-F2调控AP-1是否通过ERK1/2激酶介导。结果显示:A549和293T细胞中表达PB1-F2蛋白后,AP-1的转录活性均显著升高,并且c-Fos/AP-1的m RNA转录水平呈现显著上调;过表达PB1-F2蛋白同样能够显著上调磷酸化ERK1/2水平;以U0126抑制ERK1/2激活后,PB1-F2上调AP-1转录活性的作用显著下降。本研究表明,流感病毒PB1-F2蛋白能够通过激活ERK1/2激酶诱导AP-1转录因子的活化,为进一步研究PB1-F2蛋白参与调控炎症反应的机制提供了实验依据。; 关键词 A型流感病毒 PB1-F2蛋白 ERK1/2信号通路 AP-1转录因子; Keywords Influenza A virus PB1-F2 protein ERK1/2 signal pathway AP-1; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名旋毛虫肌幼虫p45cDNA的克隆及鉴定: 4; 作者孙树民吴秀萍付宝权王学林郭恒于申业邓洪宽刘马峰 P.Boireau 刘明远; 机构吉林大学人兽共患病教育部重点实验室人兽共患病研究所; 出处《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期439-441,445,共4页; 基金国家863计划项目(2006AA02Z451) 国家自然科学基金(30771885) 国际科学基金(B/352521); 文摘目的本研究根据GenBank中旋毛虫45kDa抗原基因的序列设计引物,采用PCR技术从旋毛虫肌幼虫cDNA文库中扩增靶基因p45cDNA,并克隆到pMD-18T载体,转化至大肠埃希氏菌NovaBlue后测序分析。获得827bp的p45cD-NA。该序列与GenBank中的旋毛虫p45基因序列相比共有1个核苷酸发生改变,二者的同源性为99%,其编码蛋白质由268个氨基酸组成,与45kDa抗原的同源性为99%。将p45cDNA克隆到原核表达载体pET28a并转化至表达菌BL21star(DE3)后,经IPTG诱导表达出约30kDa的重组蛋白。Western-blot检测表明,p45重组蛋白可以被旋毛虫感染猪血清识别,具有良好的抗原性。; 关键词旋毛虫 P45 CDNA 克隆表达抗原性; Keywords Trichinella spiralis p45 cDNA cloning expression antigenicty; 分类号 S852.7 [农业科学—基础兽医学] Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名酵母双杂交筛选人白细胞文库中与A型流感病毒PB1-F2相互作用的蛋白被引量：3: 5; 作者崔雨明侯佩莉张茂林李鸿梅黄飞关振宏; 机构吉林农业大学食品科学与工程学院吉林大学人兽共患病教育部重点实验室人兽共患病研究所; 出处《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第3期1-5,共5页; 基金国家自然科学基金项目(30800824) 吉林大学农学部基本科研业务专项基金(421060506206); 文摘利用酵母双杂交技术筛选白细胞文库中与A型流感病毒PB1-F2相互作用的宿主蛋白,为研究PB1-F2蛋白的功能提供依据。构建pGBKT7-PB1-F2诱饵重组载体,在证实诱饵蛋白不具有自激活作用的前提下,以酵母双杂交系统筛选人白细胞文库中与PB1-F2相互作用的细胞蛋白。对阳性克隆进行测序和生物信息学分析,并在酵母细胞内验证蛋白的相互作用。Western blot结果表明,酵母表达载体pGBKT7-PB1-F2在酵母中成功表达PB1-F2融合蛋白。酵母双杂交筛选并验证,获得了8个与流感病毒PB1-F2蛋白相互作用的宿主蛋白。本研究有助于在分子水平上探索PB1-F2蛋白的新功能,为揭示流感病毒的致病机理奠定基础。; 关键词酵母双杂交 A型流感病毒 PB1-F2蛋白蛋白质相互作用; Keywords yeast two-hybrid influenza A virus PB1-F2 protein protein interaction; 分类号 Q789 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名酵母双杂交系统筛选与狂犬病病毒M蛋白相互作用的宿主蛋白被引量：1: 6; 作者张欢欢王甲慧段铭张茂林关振宏; 机构吉林大学人兽共患病教育部重点实验室人兽共患病研究所吉林大学动物医学学院; 出处《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第8期19-23,共5页; 基金国家自然科学基金项目(31072147 31272579 31172337); 文摘为筛选人脑cDNA文库中与狂犬病病毒基质蛋白(M蛋白)具有相互作用的蛋白基因,并对阳性克隆进行初步的分析和鉴定。首先构建了含有M基因的诱饵质粒pGBKT7-CVS11-M,并对其进行自激活和毒性检测,然后采用酵母双杂交技术初步筛选出与M蛋白具有相互作用的12个阳性克隆,对阳性克隆进行PCR鉴定及测序分析,并通过酵母回复性试验最终获得3个无重复性克隆,编码的蛋白质分别为TAB2、P4HA2和RCN1。为研究狂犬病病毒M蛋白在致病机制中的作用提供了参考。; 关键词狂犬病病毒 M蛋白酵母双杂交蛋白质的相互作用; Keywords Rabies virus matrix protein yeast two-hybrid assay protein-protein interaction; 分类号 S852.659.1 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名H5N1禽流感病毒PB1-F2特异性单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2: 7; 作者徐国双刘恩华张茂林段铭关振宏; 机构吉林大学人兽共患病教育部重点实验室/人兽共患病研究所; 出处《动物医学进展》北大核心 2020年第7期1-6,共6页; 基金吉林省科学技术厅自然科学基金项目(20160101214JC)。; 文摘以重组的H5N1亚型禽流感病毒(AIV)PB1-F2的C端蛋白(cPB1-F2)为免疫原制备单克隆抗体,并鉴定其特异性。构建cPB1-F2的pGEX-6p-1原核表达载体,进行蛋白表达与纯化;采用杂交瘤技术制备筛选抗重组cPB1-F2蛋白的杂交瘤细胞株,利用间接免疫荧光和酶联免疫吸附试验筛选鉴定阳性细胞株,并对单克隆抗体特异性进行鉴定。结果显示,纯化的重组cPB1-F2蛋白具有良好的免疫原性,筛选获得了3株稳定分泌抗cPB1-F2单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为6F4、2C5和4D3,经鉴定抗体均为IgG1亚类,且3株单克隆抗体均能特异性识别重组PB1-F2蛋白。结果表明成功制备了cPB1-F2特异性单克隆抗体,为研制针对流感病毒的抗体药物奠定了基础。; 关键词禽流感病毒 H5N1 PB1-F2 单克隆抗体; Keywords Avian influenza virus H5N1 PB1-F2 monoclonal antibody; 分类号 S852.657 [农业科学—基础兽医学] S85.659.5 [农业科学—兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	A型流感病毒PB1-F2蛋白与蛋白激酶R相互作用研究	于洪敏金新张茂林段铭关振宏	《动物医学进展》北大核心	2017	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)的真核表达、纯化及鉴定	关振宏李影张茂林段铭	《安徽农业科学》 CAS 北大核心	2009	2	在线阅读下载PDF 职称材料
3	流感病毒PB1-F2蛋白通过激活ERK1/2激酶刺激AP-1转录因子的活化	金新于洪敏张茂林段铭李影关振宏	《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2016	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	旋毛虫肌幼虫p45cDNA的克隆及鉴定	孙树民吴秀萍付宝权王学林郭恒于申业邓洪宽刘马峰 P.Boireau 刘明远	《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心	2008	0	在线阅读下载PDF 职称材料
5	酵母双杂交筛选人白细胞文库中与A型流感病毒PB1-F2相互作用的蛋白	崔雨明侯佩莉张茂林李鸿梅黄飞关振宏	《动物医学进展》 CSCD 北大核心	2012	3	在线阅读下载PDF 职称材料
6	酵母双杂交系统筛选与狂犬病病毒M蛋白相互作用的宿主蛋白	张欢欢王甲慧段铭张茂林关振宏	《动物医学进展》 CSCD 北大核心	2014	1	在线阅读下载PDF 职称材料
7	H5N1禽流感病毒PB1-F2特异性单克隆抗体的制备与鉴定	徐国双刘恩华张茂林段铭关振宏	《动物医学进展》北大核心	2020	2	在线阅读下载PDF 职称材料