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猪肺炎支原体S株的分离与鉴定 被引量:7
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作者 魏晶晶 李聪研 +7 位作者 孙亚波 李秋菊 宋潇婷 刘富东 史文艳 宁宜宝 孙晔 沈青春 《中国兽药杂志》 北大核心 2016年第2期15-21,共7页
从典型猪肺炎支原体病变肺组织传代分离到一株支原体,经培养特性、血清学鉴定、生化鉴定、PCR检测及测序分析证明其为猪肺炎支原体,纯化后命名为S株。将S株P46基因和P97基因R1区的氨基酸序列与其他菌种的相应序列进行同源性分析,该菌株... 从典型猪肺炎支原体病变肺组织传代分离到一株支原体,经培养特性、血清学鉴定、生化鉴定、PCR检测及测序分析证明其为猪肺炎支原体,纯化后命名为S株。将S株P46基因和P97基因R1区的氨基酸序列与其他菌种的相应序列进行同源性分析,该菌株P46基因氨基酸序列与其他菌种同源高达99%以上,P97基因R1区的氨基酸重复数为11个,不同于其他菌株;免疫原性试验结果表明该菌株具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 猪肺炎支原体 分离 检测 鉴定
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貉细小病毒SD1607株的分离鉴定及VP 2基因序列分析 被引量:6
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作者 齐宇 蒋依倩 +4 位作者 扈荣良 管岩 张英海 张迎志 张国军 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第1期25-27,30,共4页
从疑似患细小病毒性肠炎的貉子肠道组织样品中分离到一株貉细小病毒(RDPV-SD1607)。为研究其分子遗传特征,对该分离株VP2基因进行克隆序列分析,结果显示,RDPV-SD1607的VP2序列与RDPV-HB3的相似性最高,为99.49%,属于CPV-2亚型;利用其核... 从疑似患细小病毒性肠炎的貉子肠道组织样品中分离到一株貉细小病毒(RDPV-SD1607)。为研究其分子遗传特征,对该分离株VP2基因进行克隆序列分析,结果显示,RDPV-SD1607的VP2序列与RDPV-HB3的相似性最高,为99.49%,属于CPV-2亚型;利用其核苷酸序列建立系统进化树发现,RDPV-SD1607处于犬细小病毒分支,且处于CPV-2亚型和CPV-2a亚型分支之间。结果表明,RDPV-SD1607株与犬细小具有共同的遗传起源,推测其可能正处于CPV-2亚型向CPV-2a亚型进化的中间状态,或是CPV适应貉而形成的新毒株。 展开更多
关键词 貉细小病毒 分离鉴定 VP2基因
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猪肺炎支原体灭活疫苗的实验室效力研究 被引量:1
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作者 李秋菊 王丹辉 +1 位作者 沈青春 高玉龙 《当代畜禽养殖业》 2021年第4期12-16,共5页
为了探究自主研制的猪肺炎支原体灭活疫苗的实验室免疫效力,为临床应用提供科学依据,试验分别用2.0 mL/头、1.0 mL/头、0.5 mL/头和0.25 mL/头4种剂量的试验疫苗两次免疫7~14日龄健康仔猪,通过测定免疫期间猪只生长情况、抗体水平变化... 为了探究自主研制的猪肺炎支原体灭活疫苗的实验室免疫效力,为临床应用提供科学依据,试验分别用2.0 mL/头、1.0 mL/头、0.5 mL/头和0.25 mL/头4种剂量的试验疫苗两次免疫7~14日龄健康仔猪,通过测定免疫期间猪只生长情况、抗体水平变化情况及肺脏病变指数等,以确定该疫苗的最小免疫剂量及其安全性。结果表明,该疫苗四种剂量的试验攻毒保护率分别为77.9%、70.5%、65.3%和49.5%,且所有仔猪均未出现不良反应。因此,该疫苗的最小免疫剂量为0.5 mL/头,推荐使用剂量定为l.0 mL/头。 展开更多
关键词 猪肺炎支原体灭活疫苗 最小免疫剂量 实验室免疫效力
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非洲猪瘟病毒核酸双重TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的构建 被引量:2
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作者 宝梅英 吴金 +2 位作者 高玉龙 郭丽萍 张中洋 《现代畜牧兽医》 2020年第11期41-45,共5页
研究在利用世界动物卫生组织(OIE)推荐的TaqMan荧光定量PCR方法基础上,增加内标物TaqMan荧光,通过优化反应体系及条件,进行Real-time PCR扩增,建立了一种快速、准确、特异性好的非洲猪瘟病毒核酸双重TaqMan探针荧光定量PCR技术,并进行... 研究在利用世界动物卫生组织(OIE)推荐的TaqMan荧光定量PCR方法基础上,增加内标物TaqMan荧光,通过优化反应体系及条件,进行Real-time PCR扩增,建立了一种快速、准确、特异性好的非洲猪瘟病毒核酸双重TaqMan探针荧光定量PCR技术,并进行敏感性、稳定性和特异性评价及比较。结果显示:荧光定量PCR标准曲线线性关系良好,R2值可达到1,敏感性最低能检测到28个拷贝数/μL,比常规PCR方法高40~80倍;通过5份标准质粒重复检测3次,每一个样品重复检测Ct值一致,稳定性良好,变异系数范围0.70%~2.51%;同时每一个样品反应体系中内标物(pUC57-actin)Ct值一致,变异系数范围0.25%~3.44%,因此双重验证了该方法的稳定性;特异性试验证明与猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)基因组无交叉反应。该方法具有提升准确率和判断监测体系内是否存在干扰物的优点,可以防止样品出现假阴性;适合于血清样品、组织样品和疫苗样品的非洲猪瘟病毒核酸检测。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 双重TaqMan荧光 PCR
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猪圆环病毒2型杆状病毒的构建及在Hi5细胞中高效表达
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作者 宝梅英 吴金 +3 位作者 高玉龙 李秋菊 姜翠翠 汪春雨 《现代畜牧兽医》 2019年第12期12-16,共5页
研究克隆PCV2 SY株ORF2基因序列,对N端细胞核定位信号(Nuclear localization signal,NLS)区域11个氨基酸进行点突变,突变后的ORF2基因先后克隆至pUC57和转移载体pBacF,经PCR及酶切鉴定正确后,转染sf9细胞获得重组杆状病毒,重组杆状病毒... 研究克隆PCV2 SY株ORF2基因序列,对N端细胞核定位信号(Nuclear localization signal,NLS)区域11个氨基酸进行点突变,突变后的ORF2基因先后克隆至pUC57和转移载体pBacF,经PCR及酶切鉴定正确后,转染sf9细胞获得重组杆状病毒,重组杆状病毒在Hi5细胞进行感染及cap蛋白表达。SDS-PAGE和Western blotting鉴定结果表明,在Hi5细胞28 kDa处有一可被PCV2阳性血清识别的外源cap蛋白高效表达;Hi5细胞中的cap蛋白产量比sf9细胞中产量高,而且比较稳定,均达到350~550μg/mL;同时经蛋白测序得出,上述蛋白序列与NCBI数据库PCV2病毒cap序列配对率达93.59%以上。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 重组杆状病毒 Hi5细胞 高效表达
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