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防风内生细菌的分离鉴定及其促生特性分析
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作者 孙孟雪 张艺潆 +3 位作者 徐鹏 孙卓 王云贺 韩忠明 《生物技术通报》 北大核心 2025年第7期299-311,共13页
【目的】从健康防风根部中分离、筛选出具有促生特性的菌株,探究其对防风植株的促生效果,挖掘内生细菌开发利用的潜力。【方法】采用稀释涂布法从健康防风根部中分离内生细菌,并通过选择培养基筛选具有固氮、溶磷、产IAA和产铁载体的促... 【目的】从健康防风根部中分离、筛选出具有促生特性的菌株,探究其对防风植株的促生效果,挖掘内生细菌开发利用的潜力。【方法】采用稀释涂布法从健康防风根部中分离内生细菌,并通过选择培养基筛选具有固氮、溶磷、产IAA和产铁载体的促生细菌;通过形态学、生理生化鉴定和16S rRNA基因测序对促生菌株进行分类归属;基于抗生素标记法和盆栽试验探究内生细菌在土壤中的定殖能力及其对防风植株生长的影响。【结果】在防风根部中共分离出202株内生细菌,26株具有固氮能力,21株具有溶磷能力,24株具有产IAA能力,27株具有产铁载体能力。其中2株内生细菌具有3种及3种以上不同的促生功能,分别为MX-56和MX-31,鉴定为密歇根克雷伯氏菌(Klebsiella michiganensis),韩国假单胞菌(Pseudomonas koreensis)。两株抗利福平标记菌株可稳定定殖于防风根围土壤中,且在盆栽试验中,与CK相比,MX-56处理下防风的株高、根长、根粗、地上鲜重、根鲜重和根干重增长最为明显,分别增加13.47%、43.04%、42.75%、31.43%、63.21%和77.12%(P<0.05),与CK相比,菌株MX-31和MX-56处理下防风植株中两种色原酮总含量分别提高了33.72%和30.23%。【结论】从健康防风根中分离筛选到2株具有较好促生效果的韩国假单胞菌MX-31和密歇根克雷伯氏菌MX-56,可以显著提高防风植株的生物量和药效成分含量。 展开更多
关键词 防风 内生细菌 密歇根克雷伯氏菌 韩国假单胞菌 促生作用
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过表达SdC2'H基因对防风毛状根香豆素含量的影响
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作者 苏文慧 齐迎春 +6 位作者 张利超 崔祎 杜瑞云 崔晶晶 王云贺 杨利民 韩忠明 《华南农业大学学报》 北大核心 2025年第5期759-766,共8页
【目的】建立过表达对香豆酰辅酶A 2'-羟化酶(p-Coumaroyl CoA 2'-hydroxylase,C2'H)基因的防风Saposhnikovia divaricata (Turcz.) Schischk.毛状根培养体系,解析SdC2'H基因对香豆素生物合成的调控作用。【方法】克隆S... 【目的】建立过表达对香豆酰辅酶A 2'-羟化酶(p-Coumaroyl CoA 2'-hydroxylase,C2'H)基因的防风Saposhnikovia divaricata (Turcz.) Schischk.毛状根培养体系,解析SdC2'H基因对香豆素生物合成的调控作用。【方法】克隆SdC2'H基因;采用基因融合法构建过表达SdC2'H基因的植物双元表达载体;通过发根农杆菌K599转化法诱导防风毛状根;利用RT-qPCR分析SdC2'H基因的表达水平;采用HPLC测定防风毛状根系中的香豆素含量。【结果】防风SdC2'H基因(GenBank登录号:PV169361)的开放阅读框长度为813 bp,编码蛋白含270个氨基酸。SdC2'H蛋白具有亲水性,属于不稳定蛋白,无信号肽,且跨膜位于膜外。系统进化树显示SdC2'H蛋白与伞形科植物紫花前胡Angelica decursiva亲缘关系最近。过表达SdC2'H基因的防风毛状根系中,SdC2'H基因的表达水平显著高于空白对照(P<0.000 1),香豆素含量显著高于空白对照(P<0.001)和空载体阴性对照(P<0.01),表明过表达SdC2'H基因可以提高防风毛状根中香豆素的含量。【结论】本研究证实了SdC2'H基因对防风中香豆素生物合成的促进作用,为解析SdC2'H基因在防风香豆素类化合物代谢过程中的作用提供了理论依据,也为探究香豆素生物合成的分子调控网络奠定了研究基础。 展开更多
关键词 防风 对香豆酰辅酶A 2'-羟化酶基因 基因过表达 毛状根 香豆素
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刺五加黑斑病生防细菌分离、筛选及室内防控效果 被引量:3
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作者 丁艳哲 杜立财 +5 位作者 孙卓 杨利民 韩忠明 王云贺 刘子君 张浩 《华南农业大学学报》 CSCD 北大核心 2024年第2期266-272,共7页
【目的】筛选对刺五加黑斑病具有生防潜力的细菌菌株。【方法】采用平板对峙法从健康刺五加根际土壤中分离筛选对刺五加黑斑病菌具有拮抗作用的菌株,基于形态学、生理生化鉴定及16S rDNA结合gyrB测序分析进行菌种分类鉴定,测定其抗菌谱... 【目的】筛选对刺五加黑斑病具有生防潜力的细菌菌株。【方法】采用平板对峙法从健康刺五加根际土壤中分离筛选对刺五加黑斑病菌具有拮抗作用的菌株,基于形态学、生理生化鉴定及16S rDNA结合gyrB测序分析进行菌种分类鉴定,测定其抗菌谱;并通过叶面定殖及盆栽防效试验进一步评价该菌的生防潜力。【结果】分离得到419株细菌,其中,菌株YZ-375鉴定为贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis。菌株YZ-375对刺五加黑斑病菌的拮抗效果较好,无菌滤液的抑制率为65.85%,且对人参立枯丝核菌Rhizoctonia solani、人参链格孢菌Alternaria panax、人参茄腐皮镰孢菌Fusarium solani、人参核盘菌Sclerotinia ginseng、人参毁灭柱孢菌Cylindrocarpon destructans、五味子尖镰孢菌Fusarium oxysporum均具有拮抗效果,抑制率为69.21%~77.44%。在鲜叶定殖35 d后,菌株YZ-375菌量仍能保持在每克鲜叶103CFU。菌株YZ-375对刺五加黑斑病防效达72.31%,与枯草芽孢杆菌、苯醚甲环唑防效无显著差异。【结论】贝莱斯芽孢杆菌YZ-375具有良好的生防潜力,具有一定的开发应用前景。 展开更多
关键词 刺五加 黑斑病 贝莱斯芽孢杆菌 分类鉴定 叶面定殖 生物防治
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防风药材质量的多指标综合评价 被引量:3
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作者 马丙如 崔静轩 +5 位作者 王雨懿 刘子君 宁凝 王云贺 杨利民 韩忠明 《浙江农林大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期715-723,共9页
【目的】建立防风Saposhnikovia divaricata药材多指标成分同时定量分析的测定方法,并以多指标成分为评价指标,结合不同成分对防风药材抗炎活性的贡献,分析不同产地的防风药材质量,为防风药材质量的综合评价提供科学依据。【方法】采用... 【目的】建立防风Saposhnikovia divaricata药材多指标成分同时定量分析的测定方法,并以多指标成分为评价指标,结合不同成分对防风药材抗炎活性的贡献,分析不同产地的防风药材质量,为防风药材质量的综合评价提供科学依据。【方法】采用高效液相色谱(HPLC)建立防风6种色原酮和4种香豆素成分同时定量的测定方法,采用聚类分析和主成分分析对防风药材质量进行综合评价;采用脂多糖诱导的RAW 264.7小鼠巨噬细胞炎症模型,分析防风10种化学成分与抗炎活性的相关关系。【结果】防风10种化学成分在各自范围内线性关系、准确度和分离度均良好。聚类分析和主成分分析把17批样品分为4类,其中以内蒙古S5和吉林S8~S11产地的2年生防风的综合质量相对较好;17批防风醇提物能不同程度地抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞分泌一氧化氮(NO)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β);其中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、升麻素、亥茅酚苷、5-O-甲基维斯阿米醇、欧前胡素与抗炎活性呈正相关;灰色关联度分析表明:防风抗炎活性是多种成分协同作用的结果,升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、升麻素、亥茅酚苷、5-O-甲基维斯阿米醇与3个细胞炎症指标(NO、IL-6和IL-1β)的关联度均大于0.8,是发挥抗炎作用的主要物质基础。【结论】本研究建立的防风多指标成分测定方法良好,可用于防风色原酮和香豆素成分的同时测定,结合抗炎活性与灰色关联度分析法建立了基于生物活性的防风药材质量综合评价模式,为建立防风药材质量综合评价的标准提供了新的方法和科学依据。 展开更多
关键词 防风 色原酮 香豆素 抗炎活性 关联度分析
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刺五加黑斑病生防细菌分离、鉴定、优选及发酵条件优化 被引量:1
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作者 丁艳哲 姚鑫鑫 +3 位作者 孙卓 杨利民 韩忠明 王云贺 《生物技术通报》 CSCD 北大核心 2024年第12期218-226,共9页
【目的】从刺五加根际土壤中筛选、分离并鉴定对刺五加黑斑病具有生防潜力的细菌,在此基础上优化其发酵条件,为刺五加黑斑病生物防治提供良好的生防菌源。【方法】采用稀释涂布法从健康刺五加根际土壤中分离细菌,平板对峙法筛选对细极... 【目的】从刺五加根际土壤中筛选、分离并鉴定对刺五加黑斑病具有生防潜力的细菌,在此基础上优化其发酵条件,为刺五加黑斑病生物防治提供良好的生防菌源。【方法】采用稀释涂布法从健康刺五加根际土壤中分离细菌,平板对峙法筛选对细极链格孢菌(Alternaria tenuissima)具有较强拮抗效果的菌株,测定其对另外5种病原真菌的抑制作用;通过形态特征、生理生化特征及16S rDNA基因测序明确该菌株的分类学地位;以单因素试验和正交试验方法进行培养基组分及发酵条件优化;此外,探讨该菌株发酵液对刺五加黑斑病的防治效果。【结果】分离获得419株细菌中菌株YZ-228对细极链格孢菌的抑制率最高,达67.38%,无菌滤液的抑制率为64.32%。菌株YZ-228对茄立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、茄腐皮镰孢菌(Fusarium solani)、链格孢菌(A.panax)、毁灭柱孢菌(Cylindrocarpon destructans)、尖镰孢菌(Fusarium oxysporum)均具有抑制效果,抑制率为62.80%-67.89%。菌株YZ-228初步鉴定为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。可溶性淀粉5 g/L和牛肉膏5 g/L是YZ-228最佳碳源和氮源,在pH 7.0、温度28℃、接种量3%、装液量50 mL/250 mL、转速200 r/min条件下,发酵1 d的菌液对细极链格孢菌拮抗效果较好,抑制率达74.19%,较牛肉膏蛋白胨酵母膏培养基发酵液(BPY)提高11.99%。此外,接种菌株YZ-228发酵液显著降低了刺五加黑斑病的病情指数,防效达59.15%。【结论】蜡样芽孢杆菌YZ-228对刺五加黑斑病有较好的防治效果,具有作为刺五加黑斑病生物防治剂的潜力。 展开更多
关键词 刺五加 细极链格孢菌 蜡样芽孢杆菌 黑斑病 生物防治
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