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NOD小鼠糖尿病早期Th1细胞与CD4^+CD25^+Treg细胞的变化 被引量:3
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作者 王弘珺 李质馨 +2 位作者 田洪艳 徐冶 刘忠平 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期888-891,共4页
目的研究Th1细胞和CD4+CD25+Treg细胞在NOD小鼠糖尿病早期的变化,并评价其作用。方法选择4周(A组)、8周(B组)和16周龄(C组)的雌性NOD小鼠,取脾、胸腺和胰腺组织,采用流式细胞术测定脾Th1和CD4+CD25+Treg细胞的比例,计算Th1/CD4+T、CD4+C... 目的研究Th1细胞和CD4+CD25+Treg细胞在NOD小鼠糖尿病早期的变化,并评价其作用。方法选择4周(A组)、8周(B组)和16周龄(C组)的雌性NOD小鼠,取脾、胸腺和胰腺组织,采用流式细胞术测定脾Th1和CD4+CD25+Treg细胞的比例,计算Th1/CD4+T、CD4+CD25+Treg/CD4+T和Th1/CD4+CD25+Treg的比值,再测定胸腺CD4–CD8–T、CD4+CD8+T、CD4–CD8+T和CD4+CD8–T细胞比例,计算CD25+Treg/CD4+CD8–T的比值。取胰腺组织,行HE染色和Foxp3免疫组化染色,观察胰腺病理学变化。结果 C组小鼠脾脏Th1细胞比例以及Th1/CD4+T和Th1/CD4+CD25+Treg比值明显高于A组和B组,但是A、B、C三组脾脏CD4+CD25+Treg细胞比例及CD4+CD25+Treg/CD4+T比值差异无统计学意义。三组间胸腺CD4–CD8–T、CD4+CD8+T、CD4–CD8+T和CD4+CD8–T细胞比例差异无统计学意义,但是B组和C组胸腺CD25+Treg/CD4+CD8–T比值明显高于A组。HE染色结果显示,B组和C组的胰岛周围可见淋巴细胞浸润,但胰岛周围淋巴细胞浸润部位免疫组化染色未见Foxp3阳性细胞。结论 NOD小鼠糖尿病早期外周Th1细胞呈进行性增加,但CD4+CD25+Treg细胞相对缺乏,考虑与NOD小鼠糖尿病进展有关。 展开更多
关键词 小鼠 近交NOD TH1细胞 CD4+CD25+调节性T细胞 糖尿病 1型
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衣霉素对顺铂诱导人宫颈癌细胞凋亡的影响 被引量:6
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作者 徐冶 李质馨 +3 位作者 曹慧玲 于洋 刘师兵 王晓军 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期283-287,共5页
目的探讨内质网应激在顺铂诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡中的作用。方法取人宫颈癌HeLa细胞作为研究对象,实验分为衣霉素(5mg/L)组、顺铂(6mg/L)组、衣霉素(5mg/L)与顺铂(6mg/L)联合给药组、阴性对照组,处理12h后采用MTT法观察细胞生长情况,... 目的探讨内质网应激在顺铂诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡中的作用。方法取人宫颈癌HeLa细胞作为研究对象,实验分为衣霉素(5mg/L)组、顺铂(6mg/L)组、衣霉素(5mg/L)与顺铂(6mg/L)联合给药组、阴性对照组,处理12h后采用MTT法观察细胞生长情况,Hoechst荧光染色检测细胞核形态的变化,免疫印迹法检测凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-4活化情况,间接免疫荧光法检测蛋白质二硫键异构酶(PDI)、磷酸化H2AX组蛋白(γ-H2AX)的表达变化。结果 MTT法检测显示衣霉素组、顺铂组、联合给药组和阴性对照组的细胞增殖抑制率分别为2.65%±2.71%、19.60%±4.34%、44.69%±7.07%、0,除衣霉素组与对照组外其余各组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。Hoechst染色显示,阴性对照组荧光较弱且均匀,顺铂组和联合给药组部分HeLa细胞核明显变小并呈现致密强荧光,部分细胞核呈碎块状,联合给药组核碎裂细胞比例(44.5%±5.1%)显著高于顺铂组(22.7%±3.9%,P<0.05)。免疫印迹法检测显示,顺铂组裂解Caspase-3、Caspase-4蛋白表达明显高于对照组和衣霉素组,但显著低于联合给药组(P<0.05)。间接免疫荧光法检测显示:顺铂组胞质内无PDI表达,荧光较弱;衣霉素组、顺铂组PDI蛋白均呈颗粒状,分布于核周,荧光较强;联合给药组大部分细胞内PDI呈现明显强荧光,荧光强度明显高于衣霉素组和顺铂组。阴性对照组和衣霉素组细胞核内未见γ-H2AX表达,而顺铂组与联合给药组均可见部分细胞核内出现明显绿色荧光,但两组无明显差异。结论衣霉素可增加内质网应激水平,促进顺铂诱导HeLa细胞发生凋亡。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 衣霉素 顺铂 内质网应激 细胞凋亡
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HIP1基因沉默对人前列腺癌PC-3细胞增殖的影响
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作者 徐冶 李质馨 +4 位作者 曹慧玲 王弘珺 田洪艳 于洋 刘师兵 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期117-120,共4页
目的研究HIP1基因沉默对人前列腺癌PC-3细胞增殖的影响。方法构建靶向HIP1的shRNA表达载体pSilence-shHIP1,应用脂质体转染到PC-3细胞,RT-PCR检测HIP1基因沉默效果,Western blotting确认有效作用靶点。通过细胞划痕实验和细胞生长曲线研... 目的研究HIP1基因沉默对人前列腺癌PC-3细胞增殖的影响。方法构建靶向HIP1的shRNA表达载体pSilence-shHIP1,应用脂质体转染到PC-3细胞,RT-PCR检测HIP1基因沉默效果,Western blotting确认有效作用靶点。通过细胞划痕实验和细胞生长曲线研究HIP1基因对PC-3细胞增殖的影响。结果转染PC-3细胞后,沉默HIP1基因效率达83%(P<0.01);Western blotting证实该基因片段为抑制HIP1的有效作用靶点。细胞划痕实验和生长曲线显示HIP1基因沉默可抑制PC-3细胞的增殖。结论 pSilence-shHIP1表达载体可特异性地抑制HIP1基因的表达,沉默HIP1基因可抑制PC-3细胞增殖和迁移。 展开更多
关键词 HIP1蛋白 RNA干扰 PC-3细胞 细胞增殖
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环孢霉素A对OVA免疫TCR转基因DO11.10小鼠CD4^+CD25^+T细胞的影响
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作者 王弘珺 马海霞 +1 位作者 李质馨 赵勇 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期588-590,共3页
目的:研究免疫抑制剂CsA对处于免疫应答状态的小鼠脾脏调节性CD4+CD25+T细胞影响。方法:采用流式细胞术检测卵白蛋白(OVA)免疫的DO11.10小鼠脾脏CD4+CD25+T细胞及其中Foxp3+T细胞的变化。结果:OVA免疫后脾脏CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞... 目的:研究免疫抑制剂CsA对处于免疫应答状态的小鼠脾脏调节性CD4+CD25+T细胞影响。方法:采用流式细胞术检测卵白蛋白(OVA)免疫的DO11.10小鼠脾脏CD4+CD25+T细胞及其中Foxp3+T细胞的变化。结果:OVA免疫后脾脏CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞百分数及Foxp3+T细胞占CD4+CD25+T细胞百分数均增加,显示CsA可明显减少正常及免疫应答状态下小鼠脾脏CD4+CD25+T细胞及CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分数。结论:CsA在抑制免疫应答的同时也可能抑制了免疫耐受的诱导。 展开更多
关键词 CD4^+CD25^+T细胞 CSA OVA
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人ZP3 186S突变蛋白在毕赤酵母X33细胞中的表达
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作者 王弘駂 李质馨 +4 位作者 田洪艳 徐冶朱 辛为 林冬静 窦肇华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期910-912,918,共4页
目的:利用毕赤酵母表达人ZP3186S蛋白(23~348氨基酸),为临床相关疾病的诊断提供实验材料。方法:经PCR获得编码人ZP3(23~348氨基酸)的基因,构建表达载体pPICZα-hZP3。将ZP3186位点精氨酸突变为丝氨酸构建pPICZα-hZP3186S质粒。转染... 目的:利用毕赤酵母表达人ZP3186S蛋白(23~348氨基酸),为临床相关疾病的诊断提供实验材料。方法:经PCR获得编码人ZP3(23~348氨基酸)的基因,构建表达载体pPICZα-hZP3。将ZP3186位点精氨酸突变为丝氨酸构建pPICZα-hZP3186S质粒。转染毕赤酵母X33细胞,用高浓度Zeocin筛选转染细胞,甲醇诱导目的蛋白分泌,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定人ZP3186S蛋白。结果:pPICZα-hZP3186S表达质粒经测序正确,并在毕赤酵母X33中能够高效表达。结论:毕赤酵母能够分泌性表达重组人ZP3186S蛋白(23~348氨基酸),进一步研究其生物学活性为研制不孕症诊断试剂和免疫避孕疫苗提供实验材料。 展开更多
关键词 透明带 人ZP3蛋白 毕赤酵母 基因表达
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