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人COX1蛋白真核表达载体的构建及其生物信息学分析被引量：1: 1; 作者董媛李建华 +5 位作者贾俊臻冯文卓孟晨阳贺佳美唐一鑫王会岩《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期745-750,I0003,共7页; 目的:构建表达重组环氧合酶1(COX1)真核表达载体,验证其体外能够催化底物合成前列腺素E1(PGE1),以寻找高效获得PGE1的方法。方法:提取人微血管内皮细胞(HMECs)总RNA,逆转录成cDNA,以cDNA为模板,PCR扩增人COX1基因,经双酶切后与真核表达... 展开更多; 关键词前列腺素E1 环氧合酶1 真核表达重组载体催化活性; 在线阅读下载PDF 职称材料

融合表达载体pET22b-SUMO-FGFR4的构建及其在大肠杆菌中表达条件的优化被引量：5: 2; 作者刘微姚杨 +4 位作者马萧萧邓裕宣梅迪刘磊王会岩《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期642-647,共6页; 目的:设计合成小泛素修饰物-成纤维细胞生长因子受体4(SUMO-FGFR4)基因,构建pET22bSUMO-FGFR4表达载体,并对其表达条件进行优化。方法:采用Overlap PCR方法制备SUMO-FGFR4融合基因,并连接到原核表达载体pET22b中,获得pET22b-SUMO-FGFR4... 展开更多; 关键词小泛素相关修饰物成纤维细胞生长因子受体4 重组融合蛋白类; 在线阅读下载PDF 职称材料

HSV-2糖蛋白D在昆虫-杆状病毒表达系统中的表达及免疫原性分析被引量：2: 3; 作者刘微罗晓华 +7 位作者陈文婧董媛朱洁郭健姜勇张磊孟桂先王会岩《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期720-724,共5页; 目的:在昆虫细胞中表达2型单纯疱疹病毒(HSV-2)糖蛋白D(gD2)胞外区基因,检测其免疫原性。方法:以HSV-2病毒基因组为模板,PCR扩增得到gD2片段,构建至杆状病毒质粒Bacmind中,转染sf9细胞,包装重组杆状病毒,收集后连续感染sf9细胞,收获第4... 展开更多; 关键词生殖器疱疹疱疹病毒2型人糖蛋白D 昆虫-杆状病毒表达系统; 在线阅读下载PDF 职称材料

不同理化因素对重组人成纤维细胞生长因子21蛋白纯度的影响: 4; 作者王长文刘敏 +4 位作者刘磊姜勇张磊李艳王会岩《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期506-509,共4页; 目的：研究重组人成纤维细胞生长因子21（rhFGF21）在不同保存条件下的稳定性,阐明温度、pH值、缓冲溶液和反复冻融因素对rhFGF21稳定性的影响,进一步完善纯化rhFGF21的工艺。方法：rhFGF21在不同温度（-20℃、4℃和25℃）、不同pH值缓... 展开更多; 关键词重组人成纤维细胞生长因子21 纯度稳定性理化因素; 在线阅读下载PDF 职称材料

T-2毒素对人肝癌HepG2细胞的增殖抑制作用及促凋亡作用被引量：2: 5; 作者朱文赫柳玉 +5 位作者张家琦李艳刘微董媛刘磊王会岩《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期1087-1091,共5页; 目的:探讨T-2毒素对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用和促凋亡作用。方法:选取对数生长期的人肝癌HepG2细胞,分为对照组(未给予T-2毒素)和实验组(给予0.25、2.50、25.00、250.00和2 500.00μg·L^(-1)T-2毒素)。24h后倒置显微镜下观... 展开更多; 关键词 T-2毒素肝肿瘤细胞凋亡 CASPASE-3; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名人COX1蛋白真核表达载体的构建及其生物信息学分析被引量：1: 1; 作者董媛李建华贾俊臻冯文卓孟晨阳贺佳美唐一鑫王会岩; 机构吉林医药学院检验学院生物技术教研室; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期745-750,I0003,共7页; 基金吉林省教育厅科研项目资助课题(JJKH20180822KJ) 吉林省科技厅科研项目资助课题(20180623045TC) +1 种基金吉林省大学生创新创业训练项目资助课题(201813743007)。; 文摘目的:构建表达重组环氧合酶1(COX1)真核表达载体,验证其体外能够催化底物合成前列腺素E1(PGE1),以寻找高效获得PGE1的方法。方法:提取人微血管内皮细胞(HMECs)总RNA,逆转录成cDNA,以cDNA为模板,PCR扩增人COX1基因,经双酶切后与真核表达载体pCMV6连接,构建重组pCMV6-COX1真核表达质粒。通过生物信息学在线工具分析COX1蛋白的疏水性、跨膜区域、信号肽、二级结构和三级结构。采用脂质体将重组质粒转染至HEK-293F细胞中,将细胞随机分为对照组(未转染重组质粒的HEK-293F细胞)、转染重组质粒2 d组和转染重组质粒5 d组,分别收集细胞和细胞培养上清,Western blotting法检测COX1蛋白表达水平。比较真核表达的COX1蛋白与羊精囊提取法制备的粗酶混合物催化底物二高-γ-亚麻酸合成PGE1的酶活性。结果:经PCR、双酶切和测序鉴定,成功构建pCMV6-COX1重组载体,目的基因长度约为1800 bp。生物信息学分析,COX1蛋白为水溶性蛋白,1~53位氨基酸为信号肽,34~53位氨基酸处于跨膜区域,有36个丝氨酸磷酸化位点、14个苏氨酸磷酸化位点和9个酪氨酸磷酸化位点。二级结构预测,不规则卷曲所占比例为46.20%,其次为α螺旋占41.03%。延伸链和β-转角分别占10.18%和2.58%。Western blotting法检测,重组质粒成功转染至HEK-293F细胞中,与转染重组质粒2 d组比较,转染重组质粒5 d组细胞培养上清中COX1蛋白表达水平明显升高(P<0.05),蛋白相对分子质量为70000。当底物浓度为1%时,COX1蛋白催化底物合成PGE1的含量为(50.01±1.37)ng·L-1,其活性相当于5个羊精囊制备的粗酶活性的(90.30±0.06)%。结论:通过基因工程技术构建和表达的COX1蛋白能够催化底物合成PGE1并满足临床要求。; 关键词前列腺素E1 环氧合酶1 真核表达重组载体催化活性; Keywords prostaglandin E1 cycxygenase 1 eukaryotic expression recombinant vector catalytic activity; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名融合表达载体pET22b-SUMO-FGFR4的构建及其在大肠杆菌中表达条件的优化被引量：5: 2; 作者刘微姚杨马萧萧邓裕宣梅迪刘磊王会岩; 机构吉林医药学院检验学院生物技术教研室; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期642-647,共6页; 基金国家自然科学基金资助课题(81273421) 吉林省卫计委青年项目资助课题(2015Q042) +1 种基金吉林省教育厅大学生创新创业训练项目资助课题(2015032); 文摘目的:设计合成小泛素修饰物-成纤维细胞生长因子受体4(SUMO-FGFR4)基因,构建pET22bSUMO-FGFR4表达载体,并对其表达条件进行优化。方法:采用Overlap PCR方法制备SUMO-FGFR4融合基因,并连接到原核表达载体pET22b中,获得pET22b-SUMO-FGFR4重组表达载体。以乳糖为诱导剂,观察乳糖浓度、诱导时机、诱导温度、诱导时间和乳糖的添加方式等因素对SUMO-FGFR4蛋白表达量的影响,确定最佳诱导条件,并进行重组蛋白的可溶性分析。结果:pET22b-SUMO-FGFR4表达的融合蛋白在相对分子质量40 000处显示目标条带,并与FGFR4抗体特异性结合。融合蛋白在乳糖终浓度为1.0g·L-1、诱导时间为3h、诱导时机A(600)值为0.8、诱导温度为37℃时表达量最高,乳糖的添加方式对SUMO-FGFR4融合蛋白的表达量无明显影响。乳糖作为诱导剂比传统诱导剂IPTG诱导SUMO-FGFR4融合蛋白的表达量高7.5%,融合蛋白以包涵体形式为主。结论:以乳糖作为诱导剂,成功表达了SUMO-FGFR4融合蛋白,确定了融合蛋白的最佳表达条件。; 关键词小泛素相关修饰物成纤维细胞生长因子受体4 重组融合蛋白类; Keywords small ubiquitin-like modifier fibroblast growth factor receptor 4 recombinant fusion proteins; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学] R73-3 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名HSV-2糖蛋白D在昆虫-杆状病毒表达系统中的表达及免疫原性分析被引量：2: 3; 作者刘微罗晓华陈文婧董媛朱洁郭健姜勇张磊孟桂先王会岩; 机构吉林医药学院检验学院生物技术教研室; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期720-724,共5页; 基金吉林省卫计委青年项目资助课题(2015Q042) 吉林省教育厅大学生创新创业训练计划项目资助课题(2016B326); 文摘目的:在昆虫细胞中表达2型单纯疱疹病毒(HSV-2)糖蛋白D(gD2)胞外区基因,检测其免疫原性。方法:以HSV-2病毒基因组为模板,PCR扩增得到gD2片段,构建至杆状病毒质粒Bacmind中,转染sf9细胞,包装重组杆状病毒,收集后连续感染sf9细胞,收获第4代重组杆状病毒(P4),通过Western blotting法鉴定蛋白表达情况,采用空斑实验检测重组病毒滴度,将P4代重组病毒作为种子大量感染sf9细胞,上清经镍柱亲和层析进行纯化,将纯化后的蛋白在第0、2和4周免疫BALB/c小鼠(gD2组),以PBS作为阴性对照(PBS组),ELISA检测小鼠血清中gD2特异性IgG滴度。结果:PCR鉴定和DNA测序,重组表达质粒gD2-Bacmind构建正确,空斑实验检测重组病毒滴度为2.0×109 pfu·mL-1,纯化的gD2重组蛋白在相对分子质量37 000处出现目标条带,纯度达90%以上。第6周gD2组小鼠免疫血清中gD2特异性IgG抗体滴度Log10平均值达到4.34,与PBS组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:利用昆虫-杆状病毒表达系统表达的gD2胞外区蛋白具有良好的免疫原性,可作为HSV-2疫苗的候选。; 关键词生殖器疱疹疱疹病毒2型人糖蛋白D 昆虫-杆状病毒表达系统; Keywords genital herpes herpes virus 2, humam glycoprotein D baculovirus expression vector system; 分类号 R373.9 [医药卫生—病原生物学] Q939.47 [生物学—微生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名不同理化因素对重组人成纤维细胞生长因子21蛋白纯度的影响: 4; 作者王长文刘敏刘磊姜勇张磊李艳王会岩; 机构吉林医药学院公共卫生学院营养与食品卫生学教研室吉林医药学院检验学院生物技术教研室; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期506-509,共4页; 基金国家自然科学基金资助课题(81273421) 吉林省科技厅科技发展计划项目资助课题(20116044) 吉林省教育厅科研基金资助课题(361号); 文摘目的：研究重组人成纤维细胞生长因子21（rhFGF21）在不同保存条件下的稳定性,阐明温度、pH值、缓冲溶液和反复冻融因素对rhFGF21稳定性的影响,进一步完善纯化rhFGF21的工艺。方法：rhFGF21在不同温度（-20℃、4℃和25℃）、不同pH值缓冲液（醋酸-醋酸钠缓冲液pH 4.0和pH 5.0、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液pH 5.0和pH 6.0、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液pH 6.0、pH 6.5和pH 7.0,TrisHCl缓冲液pH 7.5和pH 8.0）中及反复冻融条件下分别保存,采用高效液相色谱法（HPLC）检测rhFGF21纯度,同时观察外观性状。结果：于-20℃和4℃分别保存时,rhFGF21的各项性质在观察期内均无明显变化;25℃时,rhFGF21存放14d纯度由0d时（100.00±0.00）%下降至（15.20±0.14）%（P〈0.01）;在pH 4.0和pH 5.0缓冲液中25℃条件下保存7d,溶液出现浑浊;在pH 5.0和pH 6.0缓冲液中25℃条件下保存7d,溶液出现浑浊;在pH 6.5和pH 8.0磷酸盐和Tris-HCl缓冲液中,溶液澄清透明;rhFGF21原液反复冻融后其纯度变化差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：rhFGF21在低温和pH 6.5－8.0磷酸盐和Tris-HCl缓冲液中溶液较稳定,反复冻融处理对rhFGF21稳定性也有明显影响。; 关键词重组人成纤维细胞生长因子21 纯度稳定性理化因素; Keywords recombinant human fibroblast growth factor 21 purity stability physical and chemical factors; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名T-2毒素对人肝癌HepG2细胞的增殖抑制作用及促凋亡作用被引量：2: 5; 作者朱文赫柳玉张家琦李艳刘微董媛刘磊王会岩; 机构吉林医药学院基础医学院生物化学教研室吉林医药学院检验学院生物技术教研室; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期1087-1091,共5页; 基金国家科技部科技重大专项资助课题(2012ZX09103-301-003) 吉林省教育厅科研型项目资助课题(吉教科合字[2015]第397号); 文摘目的:探讨T-2毒素对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用和促凋亡作用。方法:选取对数生长期的人肝癌HepG2细胞,分为对照组(未给予T-2毒素)和实验组(给予0.25、2.50、25.00、250.00和2 500.00μg·L^(-1)T-2毒素)。24h后倒置显微镜下观察细胞形态变化,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率,Hoechest 33258染色法观察HepG2细胞凋亡形态表现,检测各组HepG2细胞中caspase-3的活性。结果:T-2毒素作用HepG2细胞24h后,倒置显微镜下观察,与对照组比较,实验组细胞数量明显减少,细胞皱缩变形。MTT法检测,与对照组比较,实验组细胞增殖抑制率升高(P<0.01)。流式细胞术检测,与对照组比较,实验组SubG1期细胞比例明显升高,细胞凋亡率明显升高。Hoechest 33258染色法检测,实验组细胞出现染色质固缩,细胞核呈致密浓染色的凋亡形态。实验组细胞中caspase-3活性明显高于对照组(P<0.01)。结论:T-2毒素对人肝癌HepG2细胞增殖具有明显的抑制作用,并能促进细胞凋亡。; 关键词 T-2毒素肝肿瘤细胞凋亡 CASPASE-3; Keywords T-2 toxin liver neoplasms apoptosis caspase-3; 分类号 R735.7 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	人COX1蛋白真核表达载体的构建及其生物信息学分析	董媛李建华贾俊臻冯文卓孟晨阳贺佳美唐一鑫王会岩	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2020	1	在线阅读下载PDF 职称材料
2	融合表达载体pET22b-SUMO-FGFR4的构建及其在大肠杆菌中表达条件的优化	刘微姚杨马萧萧邓裕宣梅迪刘磊王会岩	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2016	5	在线阅读下载PDF 职称材料
3	HSV-2糖蛋白D在昆虫-杆状病毒表达系统中的表达及免疫原性分析	刘微罗晓华陈文婧董媛朱洁郭健姜勇张磊孟桂先王会岩	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2017	2	在线阅读下载PDF 职称材料
4	不同理化因素对重组人成纤维细胞生长因子21蛋白纯度的影响	王长文刘敏刘磊姜勇张磊李艳王会岩	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2015	0	在线阅读下载PDF 职称材料
5	T-2毒素对人肝癌HepG2细胞的增殖抑制作用及促凋亡作用	朱文赫柳玉张家琦李艳刘微董媛刘磊王会岩	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2017	2	在线阅读下载PDF 职称材料