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反义技术及其在植物基因工程中的应用
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作者 关淑艳 王丕武 +3 位作者 刘广娜 刘慧婧 赵丽娜 郭树成 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第26期12411-12413,12417,共4页
概述了反义技术的作用机制及其在现代植物研究中的应用。反义技术在调控植物淀粉的合成与果实成熟、改良作物品质、改变植物花色、增强植物抗病性和研究未知基因的功能等方面具有重要作用,并对反义基因技术的应用进行了展望。
关键词 反义基因 作用原理 基因调控 应用研究
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植物RNA干扰的研究进展 被引量:15
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作者 马建 刘艺苓 王丕武 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期252-259,共8页
RNA干扰(RNA interference,RNAi)是利用双链RNA(dsRNA)特异性地降解相应序列的mRNA,从而特异性地阻断相应基因的表达。在过去10年中,RNA干扰及相关沉默反应的机制研究取得了重大进展,RNAi也发展成为一种强有力的实验工具,用来控制目的... RNA干扰(RNA interference,RNAi)是利用双链RNA(dsRNA)特异性地降解相应序列的mRNA,从而特异性地阻断相应基因的表达。在过去10年中,RNA干扰及相关沉默反应的机制研究取得了重大进展,RNAi也发展成为一种强有力的实验工具,用来控制目的基因的表达以获取预期的生物表型。详细综述了近年来RNA干扰机制方面的研究进展及RNA干扰在植物中的应用进展。 展开更多
关键词 植物 转录后基因沉默 RNA干扰
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植物RNA干扰表达载体构建方法的研究 被引量:11
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作者 马建 魏益凡 +1 位作者 厉志 王丕武 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第18期8364-8366,共3页
从传统酶切—连接、同源重组、PCR技术为基础结合酶切—连接等方法,对近年来植物RNA干扰表达载体的最新构建方法进行综述。
关键词 RNA干扰 表达载体 植物
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乳酸乳球菌食品级表达载体的改造 被引量:4
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作者 马超 王丕武 +2 位作者 付永平 张卓 刘宏禹 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第19期10247-10250,共4页
[目的]改造乳酸乳球菌食品级表达载体,拓宽原系统的应用范围。[方法]以pNZ8149为基础,在pNZ8149的启动子PnisA下游插入乳酸乳球菌MG1363未知分泌蛋白(Usp45)的胞外分泌信号肽基因序列SPusp45,利用特异性引物通过PCR方法删除启动子序列... [目的]改造乳酸乳球菌食品级表达载体,拓宽原系统的应用范围。[方法]以pNZ8149为基础,在pNZ8149的启动子PnisA下游插入乳酸乳球菌MG1363未知分泌蛋白(Usp45)的胞外分泌信号肽基因序列SPusp45,利用特异性引物通过PCR方法删除启动子序列和信号肽基因序列间的酶切位点,确保SD序列和起始密码子间的距离相对最佳,构建分泌表达载体pNZS。将报告基因gus重组到pNZS的多克隆位点中,构建pNZS-gus,电击转化L.lactisNZ3900。以10ng/ml的nisin诱导培养,取培养液进行GUS染色试验。[结果]新构建的L.lactisN3900/pNZS-gus系统可以正确表达有活性的GUS蛋白,并可以将GUS蛋白分泌到细胞外。[结论]该系统的构建成功,为目的蛋白的分泌性表达研究和口服级疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 乳酸乳球菌 SPusp45 食品级载体 分泌性表达 GUS
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大豆查尔酮异构酶基因的克隆及乳酸菌表达载体的构建 被引量:4
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作者 刘洪禹 王丕武 +2 位作者 付永平 张卓 马超 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第19期9995-9997,共3页
[目的]将特异存在于豆科植物的II型查尔酮异构酶基因CHI1A构建到目前最有效的食品级乳酸乳球菌NICE诱导表达系统中。[方法]利用RT-PCR技术从大豆总RNA中克隆CHI1A基因,连入pMD18-T克隆载体中并进行测序,然后重组到乳酸乳球菌表达载体PNZ... [目的]将特异存在于豆科植物的II型查尔酮异构酶基因CHI1A构建到目前最有效的食品级乳酸乳球菌NICE诱导表达系统中。[方法]利用RT-PCR技术从大豆总RNA中克隆CHI1A基因,连入pMD18-T克隆载体中并进行测序,然后重组到乳酸乳球菌表达载体PNZ8149-CHI1A,利用电穿孔方法转入乳酸乳球菌NZ3900中。[结果]克隆得到CHI1A完整开放阅读框670bp,与已报导序列(GenBankAY595413)的同源性达到99%;通过PCR和酶切鉴定,成功地将CHI1A导入到NICE表达系统中。[结论]含有CHI1A基因的乳酸乳球菌高效诱导表达载体的构建为利用微生物发酵产生类黄酮奠定基础。 展开更多
关键词 大豆 查尔酮异构酶基因 乳酸乳球菌 NICE系统
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农杆菌介导紫花苜蓿子叶遗传转化的影响因素研究 被引量:2
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作者 曲静 王丕武 杨金慧 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第22期10421-10423,共3页
以5-7d的紫花苜蓿无菌苗为材料进行卡那霉素抗性筛选,用RG-2质粒(合VP7基因和卡那霉素抗性基因)和农杆菌(EHA101、EHA105)构建重组质粒,对无菌苗和重组质粒进行共培养,研究菌株类型、菌液浓度对转化效率的影响。结果表明,菌株EH... 以5-7d的紫花苜蓿无菌苗为材料进行卡那霉素抗性筛选,用RG-2质粒(合VP7基因和卡那霉素抗性基因)和农杆菌(EHA101、EHA105)构建重组质粒,对无菌苗和重组质粒进行共培养,研究菌株类型、菌液浓度对转化效率的影响。结果表明,菌株EHA105对紫花苜蓿的转化率达4%,重悬菌液的0D60。以0.3~0.5为宜,农杆菌侵染时间以10~12min较好;PCR检测结果表明,37株卡那霉素抗性植株中30株为阳性,说明VP7外源基因已整合到受体植物基因组中。 展开更多
关键词 农杆菌 紫花苜蓿 遗传转化
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紫花苜蓿下胚轴再生条件的优化
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作者 曲静 杨金慧 王丕武 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第19期8852-8853,8856,共3页
[目的]优化紫花苜蓿下胚轴的再生条件。[方法]选用不同的培养基和激素,对公农1号、公农2号、美国苜蓿王、草原1号4个苜蓿品种的下胚轴进行愈伤组织的诱导和分化。[结果]经筛选,获得了诱导愈伤组织的基本培养基为改良SH+MS有机+MS微量及... [目的]优化紫花苜蓿下胚轴的再生条件。[方法]选用不同的培养基和激素,对公农1号、公农2号、美国苜蓿王、草原1号4个苜蓿品种的下胚轴进行愈伤组织的诱导和分化。[结果]经筛选,获得了诱导愈伤组织的基本培养基为改良SH+MS有机+MS微量及铁盐+2,4-D 2.0 mg/L+KT 0.05 mg/L+蔗糖30 g/L,诱导再生植株分化的培养基为MS+NAA 1.0 mg/L+KT 0.1 mg/L+水解酪蛋白25 mg/L+蔗糖20 g/L。[结论]得到公农1号、公农2号、草原1号3个易于诱导和分化的基因型。 展开更多
关键词 苜蓿 下胚轴 愈伤组织 再生植株
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hrpZ_(Psta)在转基因大豆中定量表达与疫霉根腐病和灰斑病抗性相关研究 被引量:14
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作者 谷晓娜 刘振库 +8 位作者 王丕武 张卓 马建 曲静 张君 付永平 卢实 郑成忠 刘婷婷 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期35-40,共6页
以T5转hrpZPsta基因大豆JN29-705-15和JL30-187为材料,利用实时荧光定量PCR技术(Quantitative Real Time PCR,qRT-PCR)检测了目标基因在转基因大豆不同组织中的表达量,分别利用下胚轴侵染法和叶面喷施法鉴定疫霉根腐病抗性和灰斑病抗性... 以T5转hrpZPsta基因大豆JN29-705-15和JL30-187为材料,利用实时荧光定量PCR技术(Quantitative Real Time PCR,qRT-PCR)检测了目标基因在转基因大豆不同组织中的表达量,分别利用下胚轴侵染法和叶面喷施法鉴定疫霉根腐病抗性和灰斑病抗性,并分析目的基因表达量与疫霉根腐病和灰斑病抗性的相关性。结果表明:hrpZPsta基因在大豆的叶、茎、根、籽粒中均有表达,二个株系平均相对表达量分别为8.2/6.1、0.9/0.7、6.5/4.6和0.8/0.7;T5转hrpZPsta基因大豆抗疫霉根腐病和灰斑病能力与野生型相比均有所提高,JN29-705-15对疫霉根腐病抗性从感病提高到中抗,而JL30-187从中抗提高到抗病;hrpZPsta基因在叶中的表达量也与抗灰斑病能力呈正相关,与病情级别呈极显著负相关。试验结果初步证明了外源基因hrp ZPsta在大豆植株中的表达量与受体植株对疫霉根腐病和灰斑病抗性存在一定的相关性。 展开更多
关键词 大豆 hrpZPsta基因 疫霉根腐病 灰斑病 抗性 相对定量表达
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糙皮侧耳漆酶基因的克隆及在粟酒裂殖酵母中的表达
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作者 石振飞 代力强 +5 位作者 付永平 王丕武 张卓 魏洪波 刘强 马建 《食用菌学报》 北大核心 2013年第1期13-17,共5页
利用RT-PCR技术,从糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)总RNA中克隆漆酶基因(Lac),再通过NheⅠ酶切位点与粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)表达载体pESP-2连接,构建酵母真核表达载体,利用电转化方法转化粟酒裂殖酵母SP-Q01细胞,并在S... 利用RT-PCR技术,从糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)总RNA中克隆漆酶基因(Lac),再通过NheⅠ酶切位点与粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)表达载体pESP-2连接,构建酵母真核表达载体,利用电转化方法转化粟酒裂殖酵母SP-Q01细胞,并在SP-Q01中进行表达分析,最后用愈创木酚法测定表达产物的酶学活性。漆酶基因在构建的表达载体重组SP-Q01细胞中得到表达,酶学活性达到89.37 U/L。 展开更多
关键词 糙皮侧耳 漆酶 粟酒裂殖酵母 酶学活性
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