应用重组PCR技术构建大豆脂肪氧化酶基因RNA干扰表达载体 被引量：10

1

作者 马建 厉志 +1 位作者 刘艺苓 王丕武 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期564-568,共5页

RNA干扰是近年来生物技术领域新兴的研究热点之一。在作物的研究中,RNA干扰被认为在作物品质改良中具有重要的应用价值,并已在水稻、小麦、玉米等作物中得到成功应用,但在大豆的研究中尚鲜有报道。在研究植物RNA干扰的实验中,构建相应的... RNA干扰是近年来生物技术领域新兴的研究热点之一。在作物的研究中,RNA干扰被认为在作物品质改良中具有重要的应用价值,并已在水稻、小麦、玉米等作物中得到成功应用,但在大豆的研究中尚鲜有报道。在研究植物RNA干扰的实验中,构建相应的RNA干扰表达载体是常用手段,但传统构建方法较费时费力。重组PCR是一种利用重叠延伸的方法进行高效和快速的体外基因片段拼接的PCR技术。研究将重组PCR技术应用于构建大豆脂肪氧化酶基因ihpRNA干扰表达载体,一方面探索一条更简便、快捷、适应范围更广泛的大豆基因RNA干扰表达载体构建方法,另一方面所构建的载体为进一步研究RNA干扰在大豆脂肪氧化酶改良中的应用奠定了基础。结果显示应用重组PCR技术构建大豆脂肪氧化酶基因RNA干扰表达载体是可行的,相比与常规方法此方法更简便、快捷、效率更高。 展开更多

关键词 重组PCR RNA干扰 脂肪氧化酶 表达载体

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反义技术及其在植物基因工程中的应用

2

作者 关淑艳 王丕武 +3 位作者 刘广娜 刘慧婧 赵丽娜 郭树成 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第26期12411-12413,12417,共4页

概述了反义技术的作用机制及其在现代植物研究中的应用。反义技术在调控植物淀粉的合成与果实成熟、改良作物品质、改变植物花色、增强植物抗病性和研究未知基因的功能等方面具有重要作用,并对反义基因技术的应用进行了展望。

关键词 反义基因 作用原理 基因调控 应用研究

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利用RNA干扰技术提高大豆脂肪含量 被引量：1

3

作者 陈子奇 李夏 +4 位作者 王丕武 付永平 李鲁华 马建 曲静 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期529-533,共5页

利用冻融法将大豆11S球蛋白GY1基因RNA干扰表达载体转入农杆菌EH105中,以大豆"吉农28"为受体,通过农杆菌介导的大豆子叶节转化法导入大豆,获得T1代转基因苗12株,并对得到的转基因植株进行分子生物学鉴定。PCR和Southern杂交... 利用冻融法将大豆11S球蛋白GY1基因RNA干扰表达载体转入农杆菌EH105中,以大豆"吉农28"为受体,通过农杆菌介导的大豆子叶节转化法导入大豆,获得T1代转基因苗12株,并对得到的转基因植株进行分子生物学鉴定。PCR和Southern杂交检测表明,RNAi植物表达载体p3301-Gy1已成功插入到转基因大豆植株的基因组DNA中;RT-PCR和SDS-PAGE检测结果表明RNA干扰在转录后水平发挥了作用,11S球蛋白表达含量降低;利用BUCHI N-500型近红外谷物分析仪对转化的大豆蛋白质和脂肪含量进行检测,结果转化植株的籽粒蛋白质含量(36.07%)平均降低1.43个百分点,脂肪含量(21.28%)平均提高0.76个百分点。因此,利用RNA干扰技术提高大豆脂肪含量是可行的。 展开更多

关键词 大豆 GY1基因 RNA干扰 遗传转化

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脯氨酸、硝酸银对农杆菌转化大豆的影响 被引量：14

4

作者 刘金华 王丕武 +4 位作者 武丽敏 于彦春 张君 郝文媛 姚丹 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期36-39,共4页

农杆菌介导的遗传转化技术是植物遗传转化中广泛采用的一种技术。如何提高转化率是植物遗传转化中的一个关键问题。已发现有许多物质能够促进农杆菌介导的遗传转化 ,如乙酰丁香酮 (AS)等许多酚类化合物都有助于农杆菌T -DNA的转移从而... 农杆菌介导的遗传转化技术是植物遗传转化中广泛采用的一种技术。如何提高转化率是植物遗传转化中的一个关键问题。已发现有许多物质能够促进农杆菌介导的遗传转化 ,如乙酰丁香酮 (AS)等许多酚类化合物都有助于农杆菌T -DNA的转移从而提高转化率。本实验在农杆菌转化大豆的过程中辅加化合物脯氨酸、硝酸银 ,通过对GUS基因表达的分析 ,结果表明这两种化合物均能明显地提高大豆的转化率 ,其中 2mg L浓度的脯氨酸及 2mg L的AgNO3 具有最佳效果 。 展开更多

关键词 脯氨酸 硝酸银 农杆菌 大豆 遗传转化

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玉米根部特异性启动子的克隆及功能分析 被引量：6

5

作者 关淑艳 赵丽娜 +3 位作者 王丕武 楚海娇 刘强 颜雪芬 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2011年第5期147-153,共7页

【目的】从玉米幼根基因组DNA中克隆β-葡萄糖苷酶基因根部特异性启动子序列ZmGLU1P,并对其功能进行分析。【方法】利用PCR技术从玉米品种P138幼根基因组DNA中克隆玉米根部特异性启动子片段ZmGLU1P,将其与GUS基因融合,构建植物表达载体p... 【目的】从玉米幼根基因组DNA中克隆β-葡萄糖苷酶基因根部特异性启动子序列ZmGLU1P,并对其功能进行分析。【方法】利用PCR技术从玉米品种P138幼根基因组DNA中克隆玉米根部特异性启动子片段ZmGLU1P,将其与GUS基因融合,构建植物表达载体pCAMBIA121-ZmGLU1P,转化到EHA105根癌农杆菌中,通过根癌农杆菌介导法转化烟草NC89,对转化烟草植株进行PCR和Southern杂交检测。采集PCR和Southern杂交检测为阳性的转基因烟草的根、茎、叶,进行GUS活性的组织染色检测。【结果】克隆获得了ZmGLU1P片段,其长度为1 846 bp,与已报道的序列同源性达99%以上。转基因烟草植株的PCR和Southern杂交结果显示,成功地获得了转基因阳性植株;GUS活性检测表明,根中GUS活性最强,而在茎和叶等组织中GUS活性甚微,表明ZmGLU1P片段具有根部特异性启动子功能。【结论】玉米β-葡萄糖苷酶基因上游1 846 bp的片段ZmGLU1P具有根部特异性启动子功能,为根部特异性启动子。 展开更多

关键词 玉米 根部特异性启动子 功能分析 GUS染色 烟草

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大豆异黄酮的品种间差异分析 被引量：7

6

作者 宋冰 李鹏月 +2 位作者 王丕武 付永平 张宇 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期675-678,共4页

直接使用乙醇分离提取大豆异黄酮,并用高效液相色谱技术对8个大豆品种中大豆异黄酮含量进行了品种间差异分析,并对5种异黄酮组分(染料木素、黄豆黄甙、大豆甙、大豆甙元、染料木甙)进行了定量分析。发现品种间的大豆异黄酮和各组分的含... 直接使用乙醇分离提取大豆异黄酮,并用高效液相色谱技术对8个大豆品种中大豆异黄酮含量进行了品种间差异分析,并对5种异黄酮组分(染料木素、黄豆黄甙、大豆甙、大豆甙元、染料木甙)进行了定量分析。发现品种间的大豆异黄酮和各组分的含量差异显著,黄皮豆的异黄酮含量明显高于其他品种,吉农17异黄酮含量最高,其含量可达6.6‰。 展开更多

关键词 大豆异黄酮 乙醇提取 高效液相色谱 含量差异分析 异黄酮组分

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大豆胰蛋白酶抑制剂和脂肪氧化酶基因双价RNAi表达载体的改造及转化 被引量：7

7

作者 王丹 付永平 +1 位作者 王丕武 马建 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2012年第12期85-89,105,共6页

【目的】应用RNA干扰技术同时抑制大豆脂肪氧化酶(Lox)和胰蛋白酶抑制剂(KTi)基因的表达,改良大豆品质,培育缺失Lox和KTi的大豆新材料。【方法】应用RNAi原理,以双价RNAi植物表达载体pCAM-BIA1301-KtiRi-LoxRi为基础,以植物表达载体pCAM... 【目的】应用RNA干扰技术同时抑制大豆脂肪氧化酶(Lox)和胰蛋白酶抑制剂(KTi)基因的表达,改良大豆品质,培育缺失Lox和KTi的大豆新材料。【方法】应用RNAi原理,以双价RNAi植物表达载体pCAM-BIA1301-KtiRi-LoxRi为基础,以植物表达载体pCAMBIA3301的质粒DNA为模板,利用CaMV35S启动子的上游引物和CaMV35S终止子的下游引物,PCR扩增含有除草剂抗性基因bar的整个表达原件,然后将其插入到pCAM-BIA1301-KtiRi-LoxRi中,构建以除草剂为筛选标记的双价RNAi表达载体,并通过花粉管通道法转化至大豆吉农18、吉农28和吉农27 3个品种中,对转基因植株进行PCR、Southern杂交、RT-PCR分子水平检测和除草剂抗性检测。【结果】质粒PCR和酶切鉴定以及测序结果表明,双价RNAi植物表达载体pCAMBIA1301-KtiRi-LoxRi-bar构建成功。将其转入到大豆中,分别获得吉农18、吉农28、吉农27T1代籽粒47,25和86粒,以及T2代转基因植株50株。RT-PCR结果表明,转基因株系中脂肪氧化酶和胰蛋白酶抑制剂mRNA积累受到明显抑制。【结论】获得了转pCAMBIA1301-KtiRi-LoxRi-bar的T2代转基因大豆。 展开更多

关键词 大豆 胰蛋白酶抑制剂 脂肪氧化酶 花粉管通道法 除草剂

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大豆异黄酮提取工艺的优化 被引量：11

8

作者 宋冰 王丕武 +3 位作者 张秀艳 付永平 邓川 李鹏月 《大豆科学》 CSCD 北大核心 2008年第2期343-346,共4页

大豆异黄酮是一种从大豆种子中分离出的具有异黄酮类化合物结构的主要活性成分。广泛应用于食品及医药行业,传统的方法往往采用甲醇做溶剂提取,其具有毒性。试验分别使用食用乙醇和水进行分离提取,通过正交试验优化提取工艺,比较两种提... 大豆异黄酮是一种从大豆种子中分离出的具有异黄酮类化合物结构的主要活性成分。广泛应用于食品及医药行业,传统的方法往往采用甲醇做溶剂提取,其具有毒性。试验分别使用食用乙醇和水进行分离提取,通过正交试验优化提取工艺,比较两种提取方法的效果。食用乙醇提取效果优于水提取的效果,比较适宜的提取条件为:采用80%乙醇,在提取温度为80℃,固液比为1∶15,提取时间为3h,提取2次。提取率可高达0.47%。 展开更多

关键词 大豆异黄酮 提取工艺 优化

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植物RNA干扰的研究进展 被引量：15

9

作者 马建 刘艺苓 王丕武 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期252-259,共8页

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是利用双链RNA(dsRNA)特异性地降解相应序列的mRNA,从而特异性地阻断相应基因的表达。在过去10年中,RNA干扰及相关沉默反应的机制研究取得了重大进展,RNAi也发展成为一种强有力的实验工具,用来控制目的... RNA干扰(RNA interference,RNAi)是利用双链RNA(dsRNA)特异性地降解相应序列的mRNA,从而特异性地阻断相应基因的表达。在过去10年中,RNA干扰及相关沉默反应的机制研究取得了重大进展,RNAi也发展成为一种强有力的实验工具,用来控制目的基因的表达以获取预期的生物表型。详细综述了近年来RNA干扰机制方面的研究进展及RNA干扰在植物中的应用进展。 展开更多

关键词 植物 转录后基因沉默 RNA干扰

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微量法提取高质量小麦DNA供大规模PCR分析 被引量：7

10

作者 张志清 郑有良 +3 位作者 王丕武 魏育明 颜泽洪 刘虹 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期83-86,共4页

介绍了一种在提取小麦DNA实验中常用的CTAB提取方法基础上改良的微量DNA提取方法。通过提取多个材料的DNA并经分光光度计检测,琼脂精电泳结果表明,这种方法提取的DNAOD260/280在2．00- 1．8间波动,较常规大量法提取DNA的质量高,能满足10... 介绍了一种在提取小麦DNA实验中常用的CTAB提取方法基础上改良的微量DNA提取方法。通过提取多个材料的DNA并经分光光度计检测,琼脂精电泳结果表明,这种方法提取的DNAOD260/280在2．00- 1．8间波动,较常规大量法提取DNA的质量高,能满足100-200余次的PCR反应的需要。采用该法对提取的普通小麦DNA以及转抗除草剂基因Bar-的转基因值株DNA分别进行SSR标记检测和PCR扩增,结果表明 SSR标记扩增效果与大量法无明显的差异,抗性植株DNA能扩增出Bar基因的特征带。 展开更多

关键词 小麦 微量提取 DNA PCR分析

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植物RNA干扰表达载体构建方法的研究 被引量：11

11

作者 马建 魏益凡 +1 位作者 厉志 王丕武 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第18期8364-8366,共3页

从传统酶切—连接、同源重组、PCR技术为基础结合酶切—连接等方法,对近年来植物RNA干扰表达载体的最新构建方法进行综述。

关键词 RNA干扰 表达载体 植物

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大豆查尔酮异构酶基因的克隆及粟酒裂殖酵母表达载体的构建 被引量：5

12

作者 张卓 王丕武 +1 位作者 付永平 刘洪禹 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2010年第11期23-26,共4页

利用RT-PCR克隆Ⅱ型大豆查尔酮异构酶基因(CHI1A),然后将目的片段与克隆载体pMD18-T质粒相连接,检测后将目的基因重组于粟酒裂殖酵母表达载体pESP-2的MCS序列之中,使用电击法将重组质粒转化进入粟酒裂殖酵母中,用PCR和双酶切的方法来检... 利用RT-PCR克隆Ⅱ型大豆查尔酮异构酶基因(CHI1A),然后将目的片段与克隆载体pMD18-T质粒相连接,检测后将目的基因重组于粟酒裂殖酵母表达载体pESP-2的MCS序列之中,使用电击法将重组质粒转化进入粟酒裂殖酵母中,用PCR和双酶切的方法来检测试验结果,表明获得了CHI1A完整开放阅读框(670bp),与已报道序列(NO:AY595413)的同源性达到99%。PCR和酶切鉴定表明,CHI1A已导入到酵母表达载体中。查尔酮异构酶基因的克隆、粟酒裂殖酵母表达载体的构建,为该基因的应用提供了依据。有望利用基因工程技术将该基因重组于酵母基因组中并表达目的蛋白,以此来催化合成黄酮和异黄酮类化合物。 展开更多

关键词 大豆 查尔酮异构酶基因 粟酒裂殖酵母 表达载体

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转phyA基因玉米新种质的创制 被引量：3

13

作者 刘强 张丽媛 +4 位作者 马红丹 赵邯郸 袁文娅 刘思言 关淑艳 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期43-48,共6页

【目的】构建植酸酶基因(phyA)根部特异表达的重组植物表达载体,并利用其创制磷高效利用的玉米新种质.【方法】通过PCR方法从携带phyA的表达载体pCAMBIA3301中扩增出phyA表达元件ZmGLU1P-phyA-Nos,并将其插入到带有耐盐基因的中间载体pC... 【目的】构建植酸酶基因(phyA)根部特异表达的重组植物表达载体,并利用其创制磷高效利用的玉米新种质.【方法】通过PCR方法从携带phyA的表达载体pCAMBIA3301中扩增出phyA表达元件ZmGLU1P-phyA-Nos,并将其插入到带有耐盐基因的中间载体pCAMBIA1301-BADH上,获得phyA根特异表达的植物表达载体:pCAMBIA1301-ZmGLU1P-phyA-Nos,通过农杆菌介导法转化玉米胚性愈伤组织,并对再生植株进行分子生物学检测分析.【结果和结论】经PCR检测获得了9株T0代阳性植株;T1代植株的抗盐筛选、PCR检测、Southern杂交检测及RTPCR检测证明了phyA已经整合到玉米基因组中,获得6株T1代阳性植株;T2代植株的RT-PCR及根组织的酶活性测定结果表明,phyA在转基因植株根部大量表达,植酸酶活性平均比对照植株提高了10.9倍,活性最高的达到5.432 U/g.植酸酶基因在转基因植株根部大量特异表达,获得了转phyA的玉米新种质,为创制磷高效利用的玉米新种质、提高玉米的产量奠定了基础. 展开更多

关键词 玉米 植酸酶基因 表达载体构建 新种质

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乳酸乳球菌食品级表达载体的改造 被引量：4

14

作者 马超 王丕武 +2 位作者 付永平 张卓 刘宏禹 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第19期10247-10250,共4页

[目的]改造乳酸乳球菌食品级表达载体,拓宽原系统的应用范围。[方法]以pNZ8149为基础,在pNZ8149的启动子PnisA下游插入乳酸乳球菌MG1363未知分泌蛋白(Usp45)的胞外分泌信号肽基因序列SPusp45,利用特异性引物通过PCR方法删除启动子序列... [目的]改造乳酸乳球菌食品级表达载体,拓宽原系统的应用范围。[方法]以pNZ8149为基础,在pNZ8149的启动子PnisA下游插入乳酸乳球菌MG1363未知分泌蛋白(Usp45)的胞外分泌信号肽基因序列SPusp45,利用特异性引物通过PCR方法删除启动子序列和信号肽基因序列间的酶切位点,确保SD序列和起始密码子间的距离相对最佳,构建分泌表达载体pNZS。将报告基因gus重组到pNZS的多克隆位点中,构建pNZS-gus,电击转化L.lactisNZ3900。以10ng/ml的nisin诱导培养,取培养液进行GUS染色试验。[结果]新构建的L.lactisN3900/pNZS-gus系统可以正确表达有活性的GUS蛋白,并可以将GUS蛋白分泌到细胞外。[结论]该系统的构建成功,为目的蛋白的分泌性表达研究和口服级疫苗的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 乳酸乳球菌 SPusp45 食品级载体 分泌性表达 GUS

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大豆查尔酮异构酶基因的克隆及乳酸菌表达载体的构建 被引量：4

15

作者 刘洪禹 王丕武 +2 位作者 付永平 张卓 马超 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第19期9995-9997,共3页

[目的]将特异存在于豆科植物的II型查尔酮异构酶基因CHI1A构建到目前最有效的食品级乳酸乳球菌NICE诱导表达系统中。[方法]利用RT-PCR技术从大豆总RNA中克隆CHI1A基因,连入pMD18-T克隆载体中并进行测序,然后重组到乳酸乳球菌表达载体PNZ... [目的]将特异存在于豆科植物的II型查尔酮异构酶基因CHI1A构建到目前最有效的食品级乳酸乳球菌NICE诱导表达系统中。[方法]利用RT-PCR技术从大豆总RNA中克隆CHI1A基因,连入pMD18-T克隆载体中并进行测序,然后重组到乳酸乳球菌表达载体PNZ8149-CHI1A,利用电穿孔方法转入乳酸乳球菌NZ3900中。[结果]克隆得到CHI1A完整开放阅读框670bp,与已报导序列(GenBankAY595413)的同源性达到99%;通过PCR和酶切鉴定,成功地将CHI1A导入到NICE表达系统中。[结论]含有CHI1A基因的乳酸乳球菌高效诱导表达载体的构建为利用微生物发酵产生类黄酮奠定基础。 展开更多

关键词 大豆 查尔酮异构酶基因 乳酸乳球菌 NICE系统

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β-伴大豆球蛋白α′-亚基基因ihp-RNAi表达载体的构建 被引量：3

16

作者 李夏 戴佳乐 +4 位作者 陈子奇 付永平 马建 曲静 王丕武 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2012年第10期191-198,共8页

【目的】构建β-伴大豆球蛋白α′-亚基基因具有功能性间隔序列的发夹结构(Intron-hairpin RNAi,ihp-RNA)的RNA干扰(ihp-RNAi)表达载体并转化大豆,为通过RNA干扰技术改良大豆的营养品质奠定基础。【方法】以大豆总RNA反转录获得的cDNA... 【目的】构建β-伴大豆球蛋白α′-亚基基因具有功能性间隔序列的发夹结构(Intron-hairpin RNAi,ihp-RNA)的RNA干扰(ihp-RNAi)表达载体并转化大豆,为通过RNA干扰技术改良大豆的营养品质奠定基础。【方法】以大豆总RNA反转录获得的cDNA为模板,通过PCR扩增克隆了β-伴大豆球蛋白α′-亚基基因的核心保守序列(400bp),并将该片段的反义和正义片段插入到重组植物表达载体p3301-P的种子特异性启动子7αp下游,将功能性间隔序列intron-SSR插入反义片段与正义片段之间,构建α′-亚基基因ihp-RNAi安全型表达载体p3301-PFNZ-α′-BADH,并进行PCR及双酶切鉴定。利用农杆菌介导法将带有p3301-PFNZ-α′-BADH的菌株转化"吉农27"大豆植株,对转基因植株进行PCR、Southern杂交检测,并对转基因植株α′-亚基基因的表达量进行RT-PCR。【结果】成功构建了β-伴大豆球蛋白α′-亚基基因ihp-RNAi表达载体p3301-PFNZ-α′-BADH,利用农杆菌介导法转化大豆得到7株阳性转化植株;Southern杂交结果显示,外源基因以1～2个拷贝整合于大豆基因组中;RT-PCR检测表明,β-伴大豆球蛋白α′-亚基基因的表达被明显抑制。【结论】成功构建了β-伴大豆球蛋白α′-亚基基因ihp-RNAi表达载体,获得了α′-亚基基因被明显抑制的转基因大豆植株,为应用基因工程技术进行大豆品质改良奠定了基础。 展开更多

关键词 α′-亚基基因 ihp-RNAi表达载体 农杆菌介导法 大豆

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HrpZpsta基因植物表达载体的构建及其在大豆中的转化 被引量：2

17

作者 李勃 付永平 +3 位作者 王丕武 王鹏 张云月 马建 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期393-396,共4页

利用PCR技术扩增含有hrpZpsta基因的克隆载体pMD18-T-hrpZpsta,以植物表达载体pBI121为基础,将PCR产物插入到此植物表达载体中。利用农杆菌介导的大豆子叶节转化法将构建好的表达载体导入大豆品种吉农28中,选用筛选条件为100mg·L-... 利用PCR技术扩增含有hrpZpsta基因的克隆载体pMD18-T-hrpZpsta,以植物表达载体pBI121为基础,将PCR产物插入到此植物表达载体中。利用农杆菌介导的大豆子叶节转化法将构建好的表达载体导入大豆品种吉农28中,选用筛选条件为100mg·L-1的卡那霉素选择培养基培养,对获得的转基因植株进行PCR检测,结果从部分抗性植株中扩增出hrpZpsta基因,初步证明hrpZpsta基因成功转入到受体大豆中,获得了转基因阳性植株。 展开更多

关键词 大豆 hrpZpsta基因 表达载体构建 转基因植株

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大豆子叶节及苗期NaCl筛选试验研究 被引量：2

18

作者 张云月 王鹏 +2 位作者 王丕武 付永平 李勃 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期438-441,共4页

以NaCl为筛选剂,对5个大豆品种的子叶节诱导、丛生芽生根及大豆苗期的生长情况进行研究。结果表明:不同基因型大豆对NaCl的敏感性不同,同一基因型的不同部位对NaCl的敏感性也存在差异。最终确定了NaCl对子叶节分化、丛生芽生根以及苗期... 以NaCl为筛选剂,对5个大豆品种的子叶节诱导、丛生芽生根及大豆苗期的生长情况进行研究。结果表明:不同基因型大豆对NaCl的敏感性不同,同一基因型的不同部位对NaCl的敏感性也存在差异。最终确定了NaCl对子叶节分化、丛生芽生根以及苗期生长适宜的筛选浓度。大豆子叶节分化NaCl临界筛选浓度:吉农27和吉农17为225 mmol.L-1;吉林30和DE2259为200 mmol.L-1;吉农28为175 mmol.L-1。丛生芽生根NaCl临界筛选浓度:吉农27和吉农17为100 mmol.L-1;吉林30、DE2259和吉农28为75 mmol.L-1。大豆苗期NaCl临界筛选浓度:吉农27、吉农17、吉林30和DE2259均为250 mmol.L-1;吉农28为200 mmol.L-1。 展开更多

关键词 大豆 基因型 NACL 筛选

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拟南芥抗寒基因ICE1的克隆及功能分析 被引量：5

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作者 刘双 陈沼汀 +3 位作者 董昭旭 孙国旭 李晖 关淑艳 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2017年第5期175-182,共8页

【目的】从野生型拟南芥中克隆抗寒基因ICE1,通过农杆菌介导法将ICE1基因转到烟草中,对其功能进行研究。【方法】以三叶一心期拟南芥幼苗为材料,提取其总RNA,通过RT-PCR扩增得到ICE1基因的完整开放阅读框序列;构建以抗除草剂Bar基因为... 【目的】从野生型拟南芥中克隆抗寒基因ICE1,通过农杆菌介导法将ICE1基因转到烟草中,对其功能进行研究。【方法】以三叶一心期拟南芥幼苗为材料,提取其总RNA,通过RT-PCR扩增得到ICE1基因的完整开放阅读框序列;构建以抗除草剂Bar基因为筛选标记的植物表达载体pCAMBIA3301-ICE1,通过农杆菌介导法转入到烟草中,对阳性植株进行PCR检测和生理生化指标测定,并对ICE1基因在转基因烟草植株中的表达特征进行分析。【结果】成功克隆了拟南芥抗寒基因ICE1,其完整开放阅读框长1 485bp。系统进化树表明,拟南芥ICE1基因与其他物种的ICE1基因差别较大。用农杆菌介导法得到4株阳性烟草植株,Southern blotting检测证明,ICE1基因已经以单拷贝的形式整合到烟草基因组中。实时荧光定量PCR检测表明,ICE1基因在转基因烟草植株的根、茎和叶片中均有表达,且在叶片中的相对表达量最高。4℃低温环境下,与未转化植株相比,转ICE1基因烟草植株叶片的相对电导率降低了12.00%~17.65%,脯氨酸含量增加了13.28%~24.10%,丙二醛含量减少了7.09%~14.52%,过氧化物酶活性提高了9.39%~22.54%。【结论】克隆获得了拟南芥ICE1基因的完整开放阅读框序列,在烟草中转入ICE1基因可提高其耐寒性。 展开更多

关键词 ICE1基因 植物表达载体 耐寒性

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农杆菌介导紫花苜蓿子叶遗传转化的影响因素研究 被引量：2

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作者 曲静 王丕武 杨金慧 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第22期10421-10423,共3页

以5-7d的紫花苜蓿无菌苗为材料进行卡那霉素抗性筛选，用RG-2质粒（合VP7基因和卡那霉素抗性基因）和农杆菌（EHA101、EHA105）构建重组质粒，对无菌苗和重组质粒进行共培养，研究菌株类型、菌液浓度对转化效率的影响。结果表明，菌株EH... 以5-7d的紫花苜蓿无菌苗为材料进行卡那霉素抗性筛选，用RG-2质粒（合VP7基因和卡那霉素抗性基因）和农杆菌（EHA101、EHA105）构建重组质粒，对无菌苗和重组质粒进行共培养，研究菌株类型、菌液浓度对转化效率的影响。结果表明，菌株EHA105对紫花苜蓿的转化率达4％，重悬菌液的0D60。以0．3～0．5为宜，农杆菌侵染时间以10～12min较好；PCR检测结果表明，37株卡那霉素抗性植株中30株为阳性，说明VP7外源基因已整合到受体植物基因组中。 展开更多

关键词 农杆菌 紫花苜蓿 遗传转化

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