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食用菌生物反应器的研究进展 被引量：5
1
作者 李巍 刘秀明 +6 位作者 江莺 杜美丽 朱海林 李洪志 于勤明 李海燕 李校堃 《食用菌学报》 北大核心 2010年第4期74-78,共5页
食用菌生物反应器生产外源蛋白质是近年来新兴的研究热点。本文综述了以食用菌作为生物反应器表达生产外源蛋白的特点及其遗传转化系统的研究现状和存在问题;最后结合本实验室在该领域的研究情况阐述了食用菌遗传转化系统的应用前景。
关键词 食用菌 生物反应器 外源蛋白
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利用植物生物反应器生产药用蛋白的研发现状 被引量：2
2
作者 杨贺 李晓薇 +8 位作者 陈欢 张敏 赵竟男 李晰亮 解长睿 郭晓威 孙丹 刘伟灿 李海燕 《生物产业技术》 2015年第1期32-38,共7页
植物生物反应器具有成本低、安全性高等优点,且植物具有真核细胞表达体系,能进行准确的蛋白修饰,使产品的免疫原性及生物活性较高,因此,植物生物反应器应用日益广泛。文章就现阶段植物生物反应器生产药用蛋白的研发及应用现状进行了综述... 植物生物反应器具有成本低、安全性高等优点,且植物具有真核细胞表达体系,能进行准确的蛋白修饰,使产品的免疫原性及生物活性较高,因此,植物生物反应器应用日益广泛。文章就现阶段植物生物反应器生产药用蛋白的研发及应用现状进行了综述,分析了目前本领域存在的主要技术瓶颈问题,并对利用植物生物反应器生产药用蛋白的发展前景进行了展望。 展开更多
关键词 植物生物反应器 药用蛋白 研发现状 表达体系 免疫原性 发展前景 转基因植物 表达系统 融合蛋白 病毒衣壳蛋白
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利用植物反应器生产碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的研究 被引量：1
3
作者 祝涛 王法微 +2 位作者 王南 董园园 李海燕 《农业开发与装备》 2014年第5期78-78,共1页
综述了植物反应器发展的现状以及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)转化亚麻芥的研究目的意义,一方面可利用植物系统生产外源蛋白,另一方面为我国农业生产路线提供了一条新的思路。
关键词 植物反应器 碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) 亚麻芥
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中药渣发酵液对禽致病性大肠杆菌诱导小鼠炎症防治效果的研究 被引量：1
4
作者 黄博文 杨大韦豪 +6 位作者 吴曙延 吕应磊 梁铎瀚 魏婉儿 李家宁 王一鸣 马红霞 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第4期384-392,401,共10页
为了研究鼠李糖乳杆菌发酵复方中药渣发酵液BY3对禽致病性大肠杆菌(APEC)诱导炎症的防治效果,本实验将1×10^(3)cfu/mL~1×10^(7)cfu/mL的APEC A1菌液分别经腹腔注射小鼠,观察36 h后采用SPSS26.0软件计算A1菌株对小鼠的半数致死... 为了研究鼠李糖乳杆菌发酵复方中药渣发酵液BY3对禽致病性大肠杆菌(APEC)诱导炎症的防治效果,本实验将1×10^(3)cfu/mL~1×10^(7)cfu/mL的APEC A1菌液分别经腹腔注射小鼠,观察36 h后采用SPSS26.0软件计算A1菌株对小鼠的半数致死量(LD50)。结果显示,A1菌株对小鼠的LD50为2.15×10^(5)cfu/mL。将42只小鼠分为7组,即阴性对照组(NC)、A1菌株感染组(IG组)、BY3发酵液高、中、低剂量干预组(各组浓度依次为50 mg/mL、25 mg/mL及12.5 mg/mL)、BY3水提液(AE)干预组和庆大霉素(GM)干预组,其中GM干预组小鼠灌胃庆大霉素(4μg/mL),BY3发酵液组小鼠灌胃对应浓度本实验制备的发酵液。每天灌胃2次,灌胃量0.1 mL/10 g,持续7 d,第8 d时,除NC组小鼠经腹腔注射0.1 mL/10 g无菌PBS外,其他各组小鼠均经腹腔注射0.1 mL/10 g的A1菌株(2.15×10~5cfu/mL),24 h后对各组小鼠采血并剖杀。采用ELISA测定各组小鼠血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)及抗氧化相关的活性氧(ROS)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量;采用荧光定量PCR(qPCR)检测各组小鼠十二指肠中炎性细胞因子的转录水平。结果显示,与IG组相比,BY3发酵液干预组小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8和ROS的含量显著降低(P<0.05),SOD的含量显著升高(P<0.05),十二指肠中TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-6和IL-8 mRNA的转录水平显著降低(P<0.05),其中,高剂量BY3发酵液减轻小鼠炎症反应的能力显著优于庆大霉素组及其他组(P<0.05)。本研究进一步对BY3发酵液成分进行液相色谱-质谱联用(LC-MS)分析,构建炎性细胞因子的蛋白互作网络(PPI),通过网络药理学筛选BY3发酵液中的抗炎关键化合物,并经分子对接评估潜在化合物与炎性细胞因子蛋白结合的稳定性,结果显示筛选到BY3发酵液中40种减轻炎症反应的关键化合物,有7种化合物与炎性细胞因子蛋白的亲和力≤-8 kcol/mol,分别是醉茄素A、西利马林、柴胡皂苷A、葛杜宁、薯蓣皂甙、雷公藤红素、白桦脂醇,上述化合物可能是BY3发酵液减轻炎症反应的关键化合物。综上所述,本研究证实BY3发酵液对APEC诱导小鼠的炎症具有防治效果,并且筛选出其中可能在减轻炎症反应中起主要作用的7种化合物,为中药渣发酵液在防治APEC感染性炎症中的应用提供科学依据。 展开更多
关键词 禽致病性大肠杆菌 中药渣发酵液 炎症 网络药理学
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天蚕素抗菌肽的研究进展 被引量：36
5
作者 杜淑环 刘秀明 +4 位作者 万秋 杨晶 王艳芳 李海燕 李校堃 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期41-47,共7页
天蚕素抗菌肽(cecropins)是一种具有广谱抗微生物活性的新型肽类化合物,是最具潜力的抗生素替代品之一。本文综述了天蚕素抗菌肽的结构、来源、生物作用,重点介绍了天蚕素抗菌肽的应用,并对其存在的问题和未来发展前景进行分析。
关键词 天蚕素 抗菌肽
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磷脂酶C基因家族研究进展 被引量：9
6
作者 王法微 王骐 +4 位作者 邓宇 董金晔 王南 李晓薇 李海燕 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期33-39,共7页
磷脂酶C(Phospholipase C,PLC)基因是磷脂酶基因家族中的一个成员,它能够水解磷脂酰肌醇4,5-二磷酸生成两个重要的信使分子肌醇三磷酸和二酰甘油。在动物中磷脂酶C基因可以通过调节胞内钙离子的释放以及激活蛋白激酶C来起作用,而植物中... 磷脂酶C(Phospholipase C,PLC)基因是磷脂酶基因家族中的一个成员,它能够水解磷脂酰肌醇4,5-二磷酸生成两个重要的信使分子肌醇三磷酸和二酰甘油。在动物中磷脂酶C基因可以通过调节胞内钙离子的释放以及激活蛋白激酶C来起作用,而植物中磷脂酶C可以参与植物对生物及非生物胁迫的调节,但其作用的具体方式仍不清楚。综述了磷脂酶C基因的研究进展,主要包括基因的分类、结构以及其在不同逆境信号转导中的作用方式。 展开更多
关键词 PLC基因 肌醇三磷酸 二酰甘油 结构 信号转导
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红花油体提取条件优化及稳定性研究 被引量：4
7
作者 杨晶 韩高强 +6 位作者 刘忠良 卢振 吴治邦 王清曼 邹德毅 强卫东 陈伟 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期185-190,共6页
油体是储藏脂肪的亚细胞单位,其表面包裹一层磷脂和油体蛋白。这种稳定的结构可以保护油体面对环境的压力,使油体可以应用在食品、化妆品及制药工业中。研究红花油体的提取方法及红花油体乳液的基本性质,旨在为以油体为基质的载体体系... 油体是储藏脂肪的亚细胞单位,其表面包裹一层磷脂和油体蛋白。这种稳定的结构可以保护油体面对环境的压力,使油体可以应用在食品、化妆品及制药工业中。研究红花油体的提取方法及红花油体乳液的基本性质,旨在为以油体为基质的载体体系研究奠定基础。以pBS为介质,采用梯度离心法,比较了不同提取条件对红花油体的提取效率的影响;对其在不同pH值、NaCl浓度条件下红花油体的平均粒径和稳定性进行测定。结果表明,红花油体在pH值≥6条件下,平均粒径为1.75-2.05μm和p H值≤6条件下,平均粒径1.50-1.75μm;NaCl浓度0.2和0.4 mg/m L时,红花油体分散较为均匀,NaCl浓度1.2和2.0 mg/m L时,红花油体出现聚集现象。蔗糖浓度0.1和0.2 mg/m L时,红花油体分散较为均匀,蔗糖浓度为0.4-1.0 mg/m L时,红花油体比较密集,随着蔗糖浓度的增加,红花油体的粒径逐渐开始不均一。红花油体的最佳提取条件是pH7,NaCl浓度0.2 mg/m L,蔗糖浓度0.1 mg/m L,稀释后的红花油体溶液在不加入保护剂或者不经过物理方法处理下,保存起来不稳定。 展开更多
关键词 红花 油体 提取 粒径 稳定性
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重组人成纤维细胞生长因子21降糖作用研究 被引量：3
8
作者 张健 李婷婷 +5 位作者 唐禄 田海山 林灼峰 李海燕 王晓杰 李校堃 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期632-636,共5页
目的利用肝细胞、肌肉细胞,前脂肪细胞及ob/ob小鼠进行rhFGF21体内外降糖作用研究。方法培养人正常肝细胞(HL-7702),大鼠肌肉细胞(L-6),小鼠前脂肪细胞(3T3-L1),用GOD-POD试剂盒测定细胞葡萄糖吸收量;FGF-21按照每天0.6μg·g-1的... 目的利用肝细胞、肌肉细胞,前脂肪细胞及ob/ob小鼠进行rhFGF21体内外降糖作用研究。方法培养人正常肝细胞(HL-7702),大鼠肌肉细胞(L-6),小鼠前脂肪细胞(3T3-L1),用GOD-POD试剂盒测定细胞葡萄糖吸收量;FGF-21按照每天0.6μg·g-1的剂量颈部皮下连续注射7d,分别在d 0、d 3、d 7给药后1 h检测空腹血糖,以生理盐水做对比;rhFGF-21按照每天0.6μg·g-1的剂量颈部皮下连续注射9 d,末次给药后1 h开始口服糖耐量实验,灌胃给予2 mg.g-1的葡萄糖溶液,分别于给予葡萄糖溶液后30、60、120 min检测血糖;rhFGF-21按照每天2.5μg·g-1的剂量颈部皮下注射连续7 d,在d 0、d 3、d 7给药后1 h检测餐后血糖。结果在3.9 mg·L-1～100 mg·L-1间rhFGF21促进HL-7702细胞葡萄糖的吸收且呈现浓度-效应关系,与对照组相比差异有显著性(P<0.01);在0.3 mg·L-1～250 mg·L-1间rhFGF21促进L6肌细胞对葡萄糖的吸收,与对照组相比差异有显著性(P<0.05);在12.6 mg·L-1～100 mg·L-1间rhFGF21促进分化的3T3-L1细胞葡萄糖的吸收且呈现浓度-效应关系,与对照组相比差异有显著性(P<0.05);ob/ob小鼠血糖测试证明,rhFGF-21具有降血糖和改善葡萄糖耐受量的作用。结论 rhFGF21体外可促进肝细胞、肌肉细胞及脂肪细胞葡萄糖的吸收;rhFGF-21可降低ob/ob小鼠空腹血糖及餐后血糖,具有改善其葡萄糖耐受量的作用。 展开更多
关键词 FGF-21 降糖作用 肝细胞 肌肉细胞 前脂肪细胞 OB/OB小鼠
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油菜子叶及下胚轴对潮霉素敏感性研究 被引量：5
9
作者 杜金霞 庞实锋 +8 位作者 徐岩 许延铎 汪洪 刘秀明 薛萍 肖艳双 李营 李洪志 李校堃 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第6期2384-2385,共2页
[目的]为油菜潮霉素抗性基因的遗传转化提供依据。[方法]以油菜品种沪油19号、苏州青、五月慢的子叶和下胚轴为外植体,研究不同浓度潮霉素处理对其褐化率、出愈率的影响。[结果]潮霉素浓度为3 mg/L时,五月慢、沪油和苏州青的褐化率分别... [目的]为油菜潮霉素抗性基因的遗传转化提供依据。[方法]以油菜品种沪油19号、苏州青、五月慢的子叶和下胚轴为外植体,研究不同浓度潮霉素处理对其褐化率、出愈率的影响。[结果]潮霉素浓度为3 mg/L时,五月慢、沪油和苏州青的褐化率分别为87.6%、30.7%、40.1%;褐化的临界浓度均为6 mg/L。苏州青下胚轴对潮霉素的耐受性较强,其褐化的临界浓度高于沪油19号和五月慢。潮霉素浓度为6 mg/L时,沪油19号、苏州青、五月慢子叶的出愈率分别为3.7%、2.3%、0,下胚轴的出愈率分别为5.1%、8.1%、2.2%。[结论]以子叶为外植体时,3个品种适宜的潮霉素筛选浓度为6 mg/L;以下胚轴为外植体时,沪油19号和五月慢适宜的潮霉素筛选浓度为6 mg/L,苏州青为9 mg/L。 展开更多
关键词 油菜 潮霉素 褐化率
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CD20片段抗体在红花悬浮细胞中的表达研究 被引量：2
10
作者 王立勇 刘秀明 +6 位作者 张玲 姚娜 王德仲 历雯清 蔡静波 李海燕 姜潮 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2017年第12期112-120,共9页
【目的】研究用红花愈伤组织建立红花悬浮细胞培养体系的条件,并利用红花悬浮细胞通过农杆菌介导转化法表达CD20复合片段抗体。【方法】以红花子叶为外植体,研究不同种类激素组合对愈伤诱导率的影响,筛选优质愈伤组织进行悬浮培养,探索... 【目的】研究用红花愈伤组织建立红花悬浮细胞培养体系的条件,并利用红花悬浮细胞通过农杆菌介导转化法表达CD20复合片段抗体。【方法】以红花子叶为外植体,研究不同种类激素组合对愈伤诱导率的影响,筛选优质愈伤组织进行悬浮培养,探索不同初始接种量、蔗糖质量分数、水解酪蛋白质量浓度对红花悬浮细胞生长的影响。将CD20复合片段抗体基因两端引入XmaⅠ/EcoRⅠ酶切位点,并将其与pEASY-T1和pBasta载体相连,构建pEASY-T1-CD20克隆载体和pBasta-CD20表达载体,再将构建的pBasta-CD20表达载体转入根瘤农杆菌,利用根瘤农杆菌介导红花悬浮细胞转化法表达CD20复合片段抗体。【结果】红花子叶愈伤诱导最佳条件为MS+NAA 2mg/L+6-BA 0.5mg/L、温度(25±0.1)℃、光照70μmol/(m2·s)连续光照,继代培养条件为MS+NAA 1mg/L+6-BA 0.5mg/L、30μmol/(m2·s)连续光照、温度(25±0.1)℃。悬浮细胞体系培养最佳条件为不加琼脂粉的MS+NAA 1mg/L+6-BA 0.5mg/L、接种量2.5g(50mL培养基)、蔗糖质量分数2%、水解酪蛋白800mg/L。pBastaCD20表达载体构建成功,且目的蛋白在红花悬浮细胞中成功表达。【结论】成功构建了红花悬浮细胞培养体系,并用该体系成功表达了CD20复合片段抗体。 展开更多
关键词 红花愈伤组织 悬浮细胞 农杆菌介导 表达载体 CD20复合片段抗体
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大豆24kDa油体蛋白与人bFGF融合基因转化拟南芥的研究 被引量：3
11
作者 薛萍 庞实锋 +6 位作者 李洪志 李营 柳月英 于勤明 熊丽冬 李海燕 李校堃 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期344-350,共7页
为探索大豆油体蛋白与人bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)蛋白在植物油体中融合表达的可行性,以大豆总DNA为模板,通过PCR扩增得到大豆油体蛋白基因(Ddoil)及启动子(Ddprm),构建Ddprm启动的Ddoil基因与植物偏好密码子改造的bFGF基因融合表... 为探索大豆油体蛋白与人bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)蛋白在植物油体中融合表达的可行性,以大豆总DNA为模板,通过PCR扩增得到大豆油体蛋白基因(Ddoil)及启动子(Ddprm),构建Ddprm启动的Ddoil基因与植物偏好密码子改造的bFGF基因融合表达载体p1390Ddprm-Ddoil-bFGF,花侵染法转化拟南芥,对T2拟南芥抗性植株基因组进行PCR检测,对种子总蛋白进行SDS-PAGE分析、Western blot检测、ELISA检测及细胞活性测定,为bFGF在其他油料作物的油体系统的表达提供参考。 展开更多
关键词 大豆油体蛋白 碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) 拟南芥
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鸡β-防御素3(Gal-3)基因的克隆、表达及抑菌活性研究 被引量：2
12
作者 付连军 刘磊 +3 位作者 张磊 贺元欣 莫索 王会岩 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2013年第2期19-24,29,共7页
【目的】克隆和表达鸡β-防御素3(Gal-3)基因,并对其抑菌活性进行研究,为寻找替代抗生素的抗菌肽提供试验依据。【方法】利用RT-PCR方法,从鸡心脏中分离并克隆了鸡Gal-3基因,将其与分子伴侣基因SUMO相融合,再将该融合基因与原核表达载体... 【目的】克隆和表达鸡β-防御素3(Gal-3)基因,并对其抑菌活性进行研究,为寻找替代抗生素的抗菌肽提供试验依据。【方法】利用RT-PCR方法,从鸡心脏中分离并克隆了鸡Gal-3基因,将其与分子伴侣基因SUMO相融合,再将该融合基因与原核表达载体pET-20b连接后转化至BL21(DE3)宿主细胞中,经IPTG诱导后,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析;最后,对Gal-3融合蛋白进行纯化,并对表达产物进行体外抑菌试验。【结果】通过RT-PCR扩增获得了约240bp的鸡Gal-3基因,经IPTG诱导获得约26ku的蛋白。IPTG在终浓度为0.6mmol/L,33℃诱导4h,诱导时菌体A600为0.6,蛋白表达量最高,且多数以可溶形式存在,33℃上清中的蛋白含量比37℃上清高。纯化的蛋白对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌均有明显的抑菌活性。【结论】成功克隆并表达了鸡Gal-3基因,其原核表达产物对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌具有一定的抑菌活性。 展开更多
关键词 防御素 Gal-3基因 原核表达 抑菌活性
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植物防御素基因家族结构、功能及调控研究进展 被引量：3
13
作者 官丽莉 崔琪 +4 位作者 李声钊 董程 李海龙 彭建豪 李校堃 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期33-39,共7页
防御素(Defensins,DF)是抗菌肽家族中最古老的一员。植物防御素是一类包含45-54个氨基酸残基,含有半胱氨酸(Cys)稳定的αβ模序,与哺乳动物及昆虫抗菌肽的亲缘关系非常密切,大部分植物防御素在体内被合成为具有信号肽序列的前体,并被分... 防御素(Defensins,DF)是抗菌肽家族中最古老的一员。植物防御素是一类包含45-54个氨基酸残基,含有半胱氨酸(Cys)稳定的αβ模序,与哺乳动物及昆虫抗菌肽的亲缘关系非常密切,大部分植物防御素在体内被合成为具有信号肽序列的前体,并被分泌到胞外空间。植物防御素在宿主防御系统中起重要作用,不仅可抑制一系列的植物、动物及人类体内的细菌、真菌,还可杀伤一些肿瘤细胞及病原虫。植物防御素广泛存在于植物的花、茎、叶、果实、根和种子中,具有抗菌、抗肿瘤、抑制酶活、作为离子阻断剂和增加耐受性的功能,可作为新型的杀菌剂或新型的抗生素类药物。随着抗生素导致的耐药菌株的出现,对植物防御素的研究就显得尤为重要,特别是因其有效的抗真菌活性,植物防御素在作物抗病基因工程方面具有巨大的潜力。主要介绍了其发现、结构、类型、逆境调控功能、作用机制以及外源表达植物防御素基因等方面的最新研究进展,有助于将来对植物防御素基因家族进行更深入和全面的研究。 展开更多
关键词 植物防御素 功能 研究进展 调控
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转角质细胞生长因子-2基因红花研究 被引量：1
14
作者 杨晶 王兰 +8 位作者 黄建 陈玉斌 郭咏昕 易善勇 官丽莉 杜林娜 李海燕 李校堃 姜潮 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2015年第2期210-216,共7页
【目的】构建转角质细胞生长因子-2基因(KGF2)红花,为KGF2药用蛋白的生产奠定了基础。【方法】利用融合PCR方法扩增人源KGF2基因与拟南芥油体蛋白Oleosin基因的融合基因,将融合基因克隆至表达载体pOP上,构建了重组质粒pOP-OL-KGF2,采用... 【目的】构建转角质细胞生长因子-2基因(KGF2)红花,为KGF2药用蛋白的生产奠定了基础。【方法】利用融合PCR方法扩增人源KGF2基因与拟南芥油体蛋白Oleosin基因的融合基因,将融合基因克隆至表达载体pOP上,构建了重组质粒pOP-OL-KGF2,采用冻融法将质粒pOP-OL-KGF2转入根癌农杆菌EHA105中,通过农杆菌介导法转化红花,采用PCR检测筛选转基因红花阳性植株,SDS-PAGE检测Oleosin-KGF2融合蛋白的表达情况。【结果】成功构建了植物特异表达载体pOP-OL-KGF2,转染后共获得了12株转基因红花植株,其中2株鉴定为阳性,阳性率为17%,对转化植株进行DNA水平检测和蛋白水平检测,可知KGF2基因已经整合进红花基因组中,且有所表达。【结论】成功获得转KGF2基因的红花株系。 展开更多
关键词 角质细胞生长因子-2 红花 遗传转化
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红花油体表达人透明质酸酶基因的初步研究 被引量：1
15
作者 杨晶 李洪锐 +6 位作者 易善勇 郭咏昕 黄建 卢震 李海燕 李校堃 姜潮 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2015年第9期191-195,共5页
【目的】获得转人源透明质酸酶基因PH20(hPH20)红花,为hPH20药用蛋白的生产奠定基础。【方法】人工合成hPH20基因,并在两端引入NcoⅠ/HindⅢ酶切位点。将合成的hPH20基因与pUC57载体连接,构建克隆载体pUC57-hPH20,对其进行双酶切鉴定。... 【目的】获得转人源透明质酸酶基因PH20(hPH20)红花,为hPH20药用蛋白的生产奠定基础。【方法】人工合成hPH20基因,并在两端引入NcoⅠ/HindⅢ酶切位点。将合成的hPH20基因与pUC57载体连接,构建克隆载体pUC57-hPH20,对其进行双酶切鉴定。用NcoⅠ/HindⅢ酶切pUC57-hPH20获得hPH20基因,将其插入到植物油体高效表达载体pOBT上,构建重组质粒pOBT-hPH20,进行PCR和双酶切鉴定。采用冻融法将重组质粒pOBT-hPH20转入根瘤农杆菌EHA105中,通过农杆菌介导法转化红花,对转hPH20基因红花植株进行PCR检测。【结果】成功构建了hPH20基因的植物油体表达载体pOBT-hPH20,获得了3株PCR检测呈阳性的转hPH20基因红花植株。【结论】建立了完善的红花再生体系,获得了转hPH20基因的红花植株。 展开更多
关键词 红花 透明质酸酶hPH20 油体
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bFGF生物蛋白海绵体外生物学活性检测方法的建立及其稳定性评价 被引量：1
16
作者 焦悦 王晓杰 +6 位作者 张睿 蔡敏倩 李婷婷 高丽昌 王珊珊 李海燕 李校堃 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期171-174,共4页
目的:建立碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)生物蛋白海绵体外生物学活性测定方法,观察bFGF生物蛋白海绵常温放置的稳定性。方法:bFGF生物蛋白海绵供试品融于稀释液中,离心后获得浸提液,以bFGF标准品为对照,与NIH3T3细胞共培养,MTT法检测bFG... 目的:建立碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)生物蛋白海绵体外生物学活性测定方法,观察bFGF生物蛋白海绵常温放置的稳定性。方法:bFGF生物蛋白海绵供试品融于稀释液中,离心后获得浸提液,以bFGF标准品为对照,与NIH3T3细胞共培养,MTT法检测bFGF生物蛋白海绵浸提液对NIH3T3细胞的促增值作用,用bFGF标准品计算bFGF生物蛋白海绵的相对百分效价,对该方法进行验证;以常温储存2、3和4年的bFGF生物蛋白海绵为供试品,以低温储存30d的bFGF生物蛋白海绵为标准对照,以不含bFGF生物蛋白海绵和bFGF的培养液为空白对照,测定各组生物学活性效价,比较不同储存时间bFGF生物蛋白海绵的体外生物学活性效价的稳定性。结果:bFGF生物蛋白海绵供试品浸提液随浓度增加其吸光度(A值)增高,即NIH3T3细胞增殖作用增加,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01),与bFGF标准品比较差异无统计学意义(P>0.05);bFGF标准品和bFGF生物蛋白海绵在该方法中均存在量效关系,且符合四参数方程式:y=(A-D)∕[1+(X/C)B]+D;常温条件下储存2、3和4年生物蛋白海绵体与低温储存30d比较,其生物学活性效价(U.mL-1)下降率分别为0.5%、0.6%和0.8%,均低于15%的国家标准。结论:bFGF生物蛋白海绵在体外能够促进NIH3T3细胞增殖,具有良好生物学活性;应用NIH3T3细胞检测bFGF生物蛋白海绵体外生物学活性可作为常规检测方法;bFGF生物蛋白海绵常温储存2～4年稳定性良好。 展开更多
关键词 碱性成纤维细胞生长因子 生物蛋白海绵 生物学活性
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农杆菌介导的角质细胞生长因子-1转化油菜的研究 被引量：1
17
作者 杜美丽 刘秀明 +4 位作者 江莺 李巍 朱海林 李海燕 李校堃 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期73-76,共4页
构建植物表达载体pCAMBIA139035S-KGF1,并将重组质粒转入到根瘤农杆菌EHA105中.以甘蓝型油菜‘沪油15’为受体材料,用农杆菌介导法转入角质细胞生长因子(KGF)-1.通过PCR、Southern blot杂交和Western blot检测,表明KGF-1已经在油菜中成... 构建植物表达载体pCAMBIA139035S-KGF1,并将重组质粒转入到根瘤农杆菌EHA105中.以甘蓝型油菜‘沪油15’为受体材料,用农杆菌介导法转入角质细胞生长因子(KGF)-1.通过PCR、Southern blot杂交和Western blot检测,表明KGF-1已经在油菜中成功表达,相对分子质量为19 000. 展开更多
关键词 油菜 角质细胞生长因子 转化
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辅酶Q10应用的研究进展 被引量：11
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作者 王文慧 王沥浩 +1 位作者 郭咏昕 杨晶 《黑龙江农业科学》 2014年第3期147-149,共3页
辅酶Q10是一种脂溶性醌类化合物,在人体呼吸链中参与电子传递,具有促进细胞新陈代谢的功能。基于辅酶Q10的特点和作用,为进一步开发辅酶Q10,并对其进行有效的利用,以发挥其重要的价值,综述了辅酶Q10在医药卫生和美容护肤等领域中的应用... 辅酶Q10是一种脂溶性醌类化合物,在人体呼吸链中参与电子传递,具有促进细胞新陈代谢的功能。基于辅酶Q10的特点和作用,为进一步开发辅酶Q10,并对其进行有效的利用,以发挥其重要的价值,综述了辅酶Q10在医药卫生和美容护肤等领域中的应用及研究状况,并分析了辅酶Q10与其它药物之间的互作关系,并对其开发前景进行了展望。 展开更多
关键词 辅酶Q10 医药 化妆品 药物互作
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沙门菌毒力岛1及Ⅲ型分泌系统研究进展 被引量：1
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作者 王雪 周航 +2 位作者 胡人阁 孔令聪 马红霞 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2022年第1期94-98,共5页
沙门菌属(Salmonella)包含多达6个亚种和2600多个血清型,其中的致病性沙门菌不仅与动物疾病密切相关,而且可以感染人类引起人兽共患病[1]。据欧盟最新报告显示,9061例人类食源性病例中有1067例与沙门菌病有关,甚至导致128人死亡(占所有... 沙门菌属(Salmonella)包含多达6个亚种和2600多个血清型,其中的致病性沙门菌不仅与动物疾病密切相关,而且可以感染人类引起人兽共患病[1]。据欧盟最新报告显示,9061例人类食源性病例中有1067例与沙门菌病有关,甚至导致128人死亡(占所有食源性病例的0.25%)[2]。同时,伤寒沙门菌引发的肠炎仅在东南亚地区每年便造成多达60万人死亡[3]。总之,沙门菌感染所引起的疾病给公共卫生安全带来了极大的威胁,深入研究沙门菌致病机制对控制该病至关重要。 展开更多
关键词 人兽共患病 Ⅲ型分泌系统 动物疾病 沙门菌 公共卫生安全 血清型 东南亚地区 致病性
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红花花瓣总RNA提取方法的比较研究 被引量：5
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作者 张雪 官丽莉 +3 位作者 韩怡来 杨晶 杜林娜 李校堃 《黑龙江农业科学》 2015年第2期14-18,共5页
红花花瓣富含多糖、多酚和花色素苷等次生代谢产物,严重影响花瓣总RNA的提取。为探索适合红花花瓣总RNA的提取方法,以4种红花不同时期的花瓣为材料,通过对4种RNA提取方法,即RNA提取试剂盒、RNAiso Plus试剂法、改良的CTAB法和SDS法进行... 红花花瓣富含多糖、多酚和花色素苷等次生代谢产物,严重影响花瓣总RNA的提取。为探索适合红花花瓣总RNA的提取方法,以4种红花不同时期的花瓣为材料,通过对4种RNA提取方法,即RNA提取试剂盒、RNAiso Plus试剂法、改良的CTAB法和SDS法进行比较研究。结果表明:RNAiso Plus试剂法效果最好,提取的总RNA完整性好,纯度高、浓度高。通过RT-PCR验证,所提取的RNA达到基因克隆和实时定量PCR等分子生物学实验要求。 展开更多
关键词 红花 总RNA提取 RNAiso Plus试剂法
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