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小叶女贞果实花青素组分鉴定及色谱纯化技术 被引量:8
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作者 王二雷 陈晶晶 +1 位作者 赵叶辉 刘静波 《农业工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第4期302-308,共7页
为提高小叶女贞果实的食用、药用价值,该文系统研究了果实中花青素种类构成及提取物的制备技术。试验采用紫外可见光谱法、高效液相色谱-质谱串联法、酸水解制备苷元等技术对小叶女贞果实花青素含量、单体种类进行了测定,并借助提取、... 为提高小叶女贞果实的食用、药用价值,该文系统研究了果实中花青素种类构成及提取物的制备技术。试验采用紫外可见光谱法、高效液相色谱-质谱串联法、酸水解制备苷元等技术对小叶女贞果实花青素含量、单体种类进行了测定,并借助提取、萃取、柱层析等技术研究了花青素提取物的分离纯化过程。研究结果如下:测得每100 g小叶女贞果实中含花青素总量为(499±18.42)mg,从中鉴定出2种花青素单体,分别为矢车菊素-3-O-葡萄糖苷和牵牛花色素-3-O-葡萄糖苷,并以后者为主要存在形式;获得了纯天然、简单易行的花青素提取物制备技术,主要包括酸化乙醇提取、乙酸乙脂萃取、Amberlite XAD-7HP大孔树脂层析分离步骤,最终制得的花青素提取物纯度为35%、得率为0.6%。该研究为后期制备高纯度牵牛花素-3-O-葡萄糖苷单体提供了良好原料基础,为深入研究小叶女贞果实花青素功能活性及其在食品、药品领域潜在应用提供了参考。 展开更多
关键词 提取 萃取 柱层析 小叶女贞 花青素
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饮料中天冬酰苯丙氨酸甲酯及其代谢物含量的测定方法
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作者 李皓 宋阳成 +3 位作者 滕红刚 陈宇飞 周全 陈长武 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第18期249-251,共3页
目的:建立快速测定饮料中天冬酰苯丙氨酸甲酯及其代谢物(L-苯丙氨酸)含量的系统分析方法。方法:采用高效液相色谱法,使用ZORBAX SB-C18色谱柱,以0.1%三氟乙酸-乙腈流动相(85:15,V/V)作为分离条件,在DAD检测器210nm波长处进行检测。结果... 目的:建立快速测定饮料中天冬酰苯丙氨酸甲酯及其代谢物(L-苯丙氨酸)含量的系统分析方法。方法:采用高效液相色谱法,使用ZORBAX SB-C18色谱柱,以0.1%三氟乙酸-乙腈流动相(85:15,V/V)作为分离条件,在DAD检测器210nm波长处进行检测。结果:该方法的最低检出量分别为L-苯丙氨酸0.8ng,天冬酰苯丙氨酸甲酯2.4ng,标准曲线线性良好,相关系数分别为0.9998和0.9994,回收率在96.3%~98.5%之间,相对标准偏差小于2%。结论:该法简捷、快速且灵敏度高。 展开更多
关键词 饮料 天冬酰苯丙氨酸甲酯 苯丙氨酸 高效液相色谱法
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UT-B基因敲除小鼠睾丸间质细胞睾酮分泌水平变化及其对性成熟的影响
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作者 赵丽晶 路明 +5 位作者 韩雪 张睿 李若文 赵雪俭 杨宝学 郭丽荣 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期448-452,F0002,共6页
目的:利用尿素通道蛋白B(UT-B)基因敲除小鼠模型探讨UT-B基因对雄性小鼠睾丸间质Leydig细胞分泌睾酮能力的影响。方法:饲养、繁殖并鉴定UT-B基因敲除(UT-B-/-)小鼠;选取4周龄遗传背景相同的野生型(UT-B+/+)雄性小鼠和UT-B-/-雄性小鼠各5... 目的:利用尿素通道蛋白B(UT-B)基因敲除小鼠模型探讨UT-B基因对雄性小鼠睾丸间质Leydig细胞分泌睾酮能力的影响。方法:饲养、繁殖并鉴定UT-B基因敲除(UT-B-/-)小鼠;选取4周龄遗传背景相同的野生型(UT-B+/+)雄性小鼠和UT-B-/-雄性小鼠各5只,采用放射免疫法检测2种小鼠血清睾酮和黄体生成素(LH)水平;分离培养并鉴定Leydig细胞,测定培养液上清中睾酮的水平。结果:成功获得UT-B-/-雄性小鼠和UT-B+/+雄性小鼠;成功分离培养原代Leydig细胞并经3β-HSD染色方法鉴定纯度达80%以上;4周龄UTB-/-雄性小鼠血清睾酮水平[(7.29±1.27)×10-2μg.L-1]明显高于UT-B+/+雄性小鼠[(5.53±1.58)×10-2μg.L-1](P<0.05),2种小鼠血清LH水平比较差异无统计学意义(P>0.05);UTB-/-雄性小鼠Leydig细胞培养上清中睾酮水平[(17.300±1.179)nmol.L-1]明显高于UT-B+/+雄性小鼠[(12.300±0.916)nmol.L-1](P<0.01)。结论:4周龄UT-B-/-雄性小鼠Leydig细胞分泌睾酮的能力明显高于UT-B+/+小鼠,这可能是UT-B-/-雄性小鼠比UT-B+/+小鼠生殖育龄提前的原因之一。 展开更多
关键词 尿素通道蛋白B 睾丸间质细胞 睾酮 基因敲除
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抗CEACAM5纳米抗体在大肠杆菌中的高效周质表达
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作者 王准 陈玉娟 +10 位作者 谢英林 陈泉 宋水燕 朱晓宇 敬媛媛 周宇杭 李飞 咸漠 冯东晓 年锐 宋海鹏 《科学技术与工程》 北大核心 2019年第1期71-77,共7页
纳米抗体具有相对分子质量小、稳定性高、特异性强以及能够穿过血脑屏障等众多优势,而且其能够通过大肠杆菌、酵母等简单微生物大量表达。大肠杆菌周质表达纳米抗体是目前纳米抗体制备主要的方法之一,但是纳米抗体的表达水平还相对较低... 纳米抗体具有相对分子质量小、稳定性高、特异性强以及能够穿过血脑屏障等众多优势,而且其能够通过大肠杆菌、酵母等简单微生物大量表达。大肠杆菌周质表达纳米抗体是目前纳米抗体制备主要的方法之一,但是纳米抗体的表达水平还相对较低。以pET22b和pMES4为载体构建了两种重组表达质粒,并且比较了他们在不同宿主菌中表达纳米抗体的情况。结果表明,以pMES4为载体的大肠杆菌能够在周质中可溶性表达纳米抗体,而以pET22b为载体的大肠杆菌表达的纳米抗体无法分泌到周质空间中。随后,通过IPTG浓度优化及5 L发酵罐过程,控制实现了纳米抗体在大肠杆菌周质中的表达量达到308. 32 mg/L。研究提供了一种高效表达纳米抗体的方法,为纳米抗体的规模化制备奠定了技术基础。 展开更多
关键词 癌胚抗原 纳米抗体 大肠杆菌 周质表达
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抗癌胚抗原纳米抗体展示文库的构建与筛选
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作者 刘亚文 张晓 +6 位作者 郭万美 谢英林 宋水燕 朱晓宇 敬媛媛 于建立 宋海鹏 《科学技术与工程》 北大核心 2018年第28期189-194,共6页
利用噬菌体展示技术进行纳米抗体库的构建和筛选,获得抗癌胚抗原(CEACAM5)的高亲和力、强特异性纳米抗体,为相关癌症诊断及靶向治疗的应用奠定基础。使用重组CEACAM5抗原免疫羊驼,分离免疫后羊驼的外周血淋巴细胞,提取总RNA后通过RT-PC... 利用噬菌体展示技术进行纳米抗体库的构建和筛选,获得抗癌胚抗原(CEACAM5)的高亲和力、强特异性纳米抗体,为相关癌症诊断及靶向治疗的应用奠定基础。使用重组CEACAM5抗原免疫羊驼,分离免疫后羊驼的外周血淋巴细胞,提取总RNA后通过RT-PCR技术扩增羊驼重链抗体可变区(VHH)片段,构建纳米抗体文库。采用噬菌体展示技术和固相淘选方法,筛选得到强阳性克隆,经大肠杆菌表达和镍离子亲和层析获得纳米抗体,最终利用Biacore分析其亲和力和特异性。通过3轮的淘选,获得一株纳米抗体亲和力达到2.6×10-10mol·L-1,对同源性蛋白CEACAM-1、-3、-6、-8及肿瘤蛋白AFP均无交叉反应性。利用噬菌体展示技术成功获得了抗癌胚抗原(CEACAM5)的高亲和力、强特异性纳米抗体,可用于后续相关癌症诊断和靶向治疗。 展开更多
关键词 癌胚抗原 纳米抗体 噬菌体展示 亲和力 特异性
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