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采用不同疏水相互作用色谱柱从包涵体中快速制备重组人干细胞因子(英文)
被引量：
2
1
作者
王骊丽
王超展
耿信笃
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期36-41,共6页
为了提高重组人干细胞因子(rhSCF)的复性效率,改进了高效疏水相互作用色谱(HPHIC)纯化和复性rhSCF的方法。首先将目标蛋白溶解于8.0mol/L脲中,然后将rhSCF包涵体的提取液直接进样到不同规格的HPHIC柱进行纯化和复性。优化了固定相配基...
为了提高重组人干细胞因子(rhSCF)的复性效率,改进了高效疏水相互作用色谱(HPHIC)纯化和复性rhSCF的方法。首先将目标蛋白溶解于8.0mol/L脲中,然后将rhSCF包涵体的提取液直接进样到不同规格的HPHIC柱进行纯化和复性。优化了固定相配基结构和流动相组成等实验条件,结果表明,本方法可以快速地获得高质量回收率和高生物活性的rhSCF,rhSCF在40min内即可完成复性与纯化,目标蛋白的纯度在95.5%以上,质量回收率高于49.6%。通过体积排阻色谱和基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)的分析,确认rh-SCF以单体存在。结果进一步证明HPHIC法是同时复性和纯化重组蛋白的有效工具。
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关键词
高效疏水相互作用色谱
重组人干细胞因子
包涵体
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职称材料
高效疏水相互作用色谱法复性与同时纯化重组人Flt3配体的包涵体蛋白质
被引量：
2
2
作者
贾佳
王骊丽
+1 位作者
高栋
耿信笃
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第6期535-540,共6页
Flt3配体(FL)是一类具有促进早期造血功能的细胞因子,在促进造血细胞生长发育及造血动员方面具有重要的临床应用价值。为了用基因工程方法获得大量用于临床和研究的重组人FL(rhFL)蛋白质,本文对在大肠杆菌(E.coli)中表达得到的Flt3配体...
Flt3配体(FL)是一类具有促进早期造血功能的细胞因子,在促进造血细胞生长发育及造血动员方面具有重要的临床应用价值。为了用基因工程方法获得大量用于临床和研究的重组人FL(rhFL)蛋白质,本文对在大肠杆菌(E.coli)中表达得到的Flt3配体的包涵体进行回收、洗涤,溶解于8mol/L脲后在高效疏水相互作用色谱(HPHIC)柱上进行rhFL包涵体的复性与同时纯化,并对其保留特征和复性规律进行了研究。结果表明,在连续进样、变性蛋白质质量浓度为8.51g/L、固定相选用端基为PEG800、流动相添加4mol/L脲、1.8mmol/L还原型谷胱甘肽(GSH)和0.3mmol/L氧化型谷胱甘肽(GSSH)、pH7.0的优化条件下,复性与同时纯化rhFL包涵体的质量回收率为36.9%,纯度达94.5%以上。本文仅用一步HPHIC法成功地复性与同时纯化了rhFL蛋白质,为获得高活性的rhFL产品奠定了一定的工作基础。
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关键词
高效疏水相互作用色谱法
复性
纯化
重组人Flt3配体
包涵体
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职称材料
题名
采用不同疏水相互作用色谱柱从包涵体中快速制备重组人干细胞因子(英文)
被引量：
2
1
作者
王骊丽
王超展
耿信笃
机构
合成及天然功能性分子化学教育部重点实验室
出处
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期36-41,共6页
基金
supported by the National Natural Science Foundation(No.20705028)
the Scientific and Technological Foundation of Shaanxi Province(No.2010K12-01-05)
文摘
为了提高重组人干细胞因子(rhSCF)的复性效率,改进了高效疏水相互作用色谱(HPHIC)纯化和复性rhSCF的方法。首先将目标蛋白溶解于8.0mol/L脲中,然后将rhSCF包涵体的提取液直接进样到不同规格的HPHIC柱进行纯化和复性。优化了固定相配基结构和流动相组成等实验条件,结果表明,本方法可以快速地获得高质量回收率和高生物活性的rhSCF,rhSCF在40min内即可完成复性与纯化,目标蛋白的纯度在95.5%以上,质量回收率高于49.6%。通过体积排阻色谱和基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)的分析,确认rh-SCF以单体存在。结果进一步证明HPHIC法是同时复性和纯化重组蛋白的有效工具。
关键词
高效疏水相互作用色谱
重组人干细胞因子
包涵体
Keywords
high performance hydrophobic interaction chromatography（HPHIC）
recombinant human stem cell factor
inclusion bodies
分类号
O658 [理学—分析化学]
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职称材料
题名
高效疏水相互作用色谱法复性与同时纯化重组人Flt3配体的包涵体蛋白质
被引量：
2
2
作者
贾佳
王骊丽
高栋
耿信笃
机构
合成及天然功能性分子化学教育部重点实验室
出处
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第6期535-540,共6页
基金
国家自然科学基金项目(No.20705028)
陕西省重点实验室项目(05JS60)
文摘
Flt3配体(FL)是一类具有促进早期造血功能的细胞因子,在促进造血细胞生长发育及造血动员方面具有重要的临床应用价值。为了用基因工程方法获得大量用于临床和研究的重组人FL(rhFL)蛋白质,本文对在大肠杆菌(E.coli)中表达得到的Flt3配体的包涵体进行回收、洗涤,溶解于8mol/L脲后在高效疏水相互作用色谱(HPHIC)柱上进行rhFL包涵体的复性与同时纯化,并对其保留特征和复性规律进行了研究。结果表明,在连续进样、变性蛋白质质量浓度为8.51g/L、固定相选用端基为PEG800、流动相添加4mol/L脲、1.8mmol/L还原型谷胱甘肽(GSH)和0.3mmol/L氧化型谷胱甘肽(GSSH)、pH7.0的优化条件下,复性与同时纯化rhFL包涵体的质量回收率为36.9%,纯度达94.5%以上。本文仅用一步HPHIC法成功地复性与同时纯化了rhFL蛋白质,为获得高活性的rhFL产品奠定了一定的工作基础。
关键词
高效疏水相互作用色谱法
复性
纯化
重组人Flt3配体
包涵体
Keywords
high performance hydrophobic interaction chromatography（HPHIC）
renaturation
purification
recombinant human Fms-like tyrosine kinase ligand 3（rhFL）
inclusion bodies
分类号
O658 [理学—分析化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
采用不同疏水相互作用色谱柱从包涵体中快速制备重组人干细胞因子(英文)
王骊丽
王超展
耿信笃
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2011
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
高效疏水相互作用色谱法复性与同时纯化重组人Flt3配体的包涵体蛋白质
贾佳
王骊丽
高栋
耿信笃
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2010
2
在线阅读
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职称材料
已选择
0
条
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引证文献
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