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美仁牦牛MYL 9基因克隆、生物信息学分析及组织表达研究
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作者 马荣 喇永福 +6 位作者 包鹏甲 郭宪 路建卫 扎老 赵雪 梁春年 成述儒 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1410-1419,共10页
【目的】克隆美仁牦牛肌球蛋白轻链9(myosin light chain 9,MYL9)基因CDS区并对其进行生物信息学分析,检测MYL 9基因的组织表达特征,为探究该基因功能提供一定理论依据。【方法】以美仁牦牛肌肉组织cDNA为模板,利用PCR扩增并克隆美仁牦... 【目的】克隆美仁牦牛肌球蛋白轻链9(myosin light chain 9,MYL9)基因CDS区并对其进行生物信息学分析,检测MYL 9基因的组织表达特征,为探究该基因功能提供一定理论依据。【方法】以美仁牦牛肌肉组织cDNA为模板,利用PCR扩增并克隆美仁牦牛CDS区序列,与其他物种进行相似性比对及系统进化树构建;通过在线软件对MYL9蛋白进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR检测MYL 9基因在美仁牦牛心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、脂肪和睾丸组织中表达情况。【结果】美仁牦牛MYL 9基因CDS区长516 bp,共编码171个氨基酸。系统进化树结果显示,美仁牦牛与野牦牛、普通牛亲缘关系最近,与高山倭蛙亲缘关系最远。MYL9蛋白分子式为C 858 H 1324 N 234 O 274 S 12,原子数为2702,理论等电点为4.85,不稳定系数和总平均亲水性分别为37.22和―0.772,属于稳定亲水性蛋白。MYL9蛋白无信号肽和跨膜螺旋结构,属于非分泌性蛋白;主要定位于线粒体、细胞核、细胞质中,具有17个特异性磷酸化位点。MYL9蛋白二级结构主要由α-螺旋、无规则卷曲、β-折叠和延伸链构成,三级结构预测结果与二级结构一致。实时荧光定量PCR结果显示,MYL 9基因在美仁牦牛心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、脂肪和睾丸组织中均表达,且肝脏和肌肉组织中表达量显著高于其他组织(P<0.05)。【结论】本研究成功克隆美仁牦牛MYL 9基因CDS区,探究了MYL 9基因的生物学功能及组织表达特征,研究结果为进一步探究牦牛MYL 9基因功能特征提供了参考。 展开更多
关键词 美仁牦牛 MYL 9基因 克隆 生物信息学 组织表达
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美仁牦牛FABP7基因克隆、生物信息学及表达分析
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作者 张娟香 张梦帆 +5 位作者 路建卫 扎老 唐月琴 张艳丽 赵雪 梁春年 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期18-27,共10页
【目的】为探究牦牛脂肪酸结合蛋白7基因(Fatty Acid Binding Protein 7,FABP7)的结构与功能。【方法】以美仁牦牛为试验对象,克隆FABP7基因的编码区(Coding sequence CDS)以及检测该基因在不同组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、睾... 【目的】为探究牦牛脂肪酸结合蛋白7基因(Fatty Acid Binding Protein 7,FABP7)的结构与功能。【方法】以美仁牦牛为试验对象,克隆FABP7基因的编码区(Coding sequence CDS)以及检测该基因在不同组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、睾丸、肌肉、脂肪)中的表达差异。以美仁牦牛心脏组织cDNA为模板,利用RT-PCR技术克隆牦牛FABP7基因的CDS区序列,并使用多种软件和在线工具进行生物信息学分析,利用qPCR技术检测FABP7基因在美仁牦牛8个组织中的表达情况。【结果】美仁牦牛FABP7基因编码区全长为399 bp,编码132个氨基酸,已上传至美国国家生物技术信息中心(NCBI)GenBank数据库中,获得基因序列号为OQ730164;分析牦牛FABP7蛋白显示,不稳定指数为26.27、理论等电点为5.38,脂肪系数73.71、总平均亲水指数-0.387,属于稳定的亲水性蛋白质,FABP7蛋白中存在1个N-糖基化潜在位点和14个潜在的磷酸化位点,该蛋白没有信号肽区域,不存在跨膜结构;在氨基酸组分中缬氨酸含量最高(11.4%),通过亚细胞定位发现,美仁牦牛FABP7基因分布在细胞质、细胞核、线粒体中;通过预测蛋白二、三级结构可知,蛋白质的高级结构主要由无规则卷曲和延伸链构成。同源性比对发现,美仁牦牛和牦牛、牛的亲缘关系最近(100%),与蜥蜴的最远(91.67%),FABP7基因与FABP2、FABP4、FABP5、FABP6以及APOA4等相关蛋白相互作用,对机体的脂质代谢具有重要的调控作用;qPCR结果显示,美仁牦牛的8个组织中FABP7基因的表达量存在明显的差异性,在心脏组织中的表达量最高,显著高于其他组织(P<0.05),在脾脏组织中低度表达。【结论】本试验成功克隆了美仁牦牛FABP7基因的编码区,且该基因在美仁牦牛心脏组织中表达最高,可为FABP7基因在牦牛后续的研究中提供理论依据。 展开更多
关键词 美仁牦牛 FABP7基因 克隆 生物学分析 表达
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蛋白组学技术在牦牛、犏牛生产领域的研究进展 被引量:3
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作者 李歆怡 扎老 +3 位作者 路建卫 唐月琴 阎萍 梁春年 《中国草食动物科学》 CAS 2022年第6期50-54,共5页
生物体中,基因决定蛋白质的水平,但是几乎所有蛋白质发挥活性功能都需经过复杂的修饰过程,故而仅仅研究基因的表达水平并不能了解生物体蛋白的功能水平。蛋白质组学某种程度上是对基因组研究的一种补充,通过研究蛋白质的活性功能及蛋白... 生物体中,基因决定蛋白质的水平,但是几乎所有蛋白质发挥活性功能都需经过复杂的修饰过程,故而仅仅研究基因的表达水平并不能了解生物体蛋白的功能水平。蛋白质组学某种程度上是对基因组研究的一种补充,通过研究蛋白质的活性功能及蛋白质之间的相互作用等以全面揭示基因组表达,更好地揭示生命活动的现象与规律。文章简述了蛋白质组学的基本分类与核心技术,并重点阐述了蛋白质组学在牦牛及犏牛育种、繁殖、食品3个方面的研究应用,并对牦牛和犏牛蛋白质组学的应用发展进行了展望。 展开更多
关键词 蛋白质组学 牦牛 犏牛 研究技术 生产应用
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美仁牦牛乳品质特性分析 被引量:7
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作者 杨国武 张娟香 +3 位作者 路建卫 赵雪 扎老 梁春年 《中国草食动物科学》 CAS 2023年第2期28-32,共5页
为深入开发利用美仁牦牛乳产品,2022年5月份采集了10头美仁牦牛的乳样,采用乳成分测定仪、全自动氨基酸分析仪、气相色谱仪和风味分析仪等对其常规营养成分、氨基酸、脂肪酸和挥发性风味物质含量进行检测。结果表明,美仁牦牛乳的主要营... 为深入开发利用美仁牦牛乳产品,2022年5月份采集了10头美仁牦牛的乳样,采用乳成分测定仪、全自动氨基酸分析仪、气相色谱仪和风味分析仪等对其常规营养成分、氨基酸、脂肪酸和挥发性风味物质含量进行检测。结果表明,美仁牦牛乳的主要营养成分含量为脂肪6.43%,蛋白质5.45%,乳糖5.06%,酪蛋白3.97%,非脂乳固体9.57%,总固形物13.97%;氨基酸总量(TAA)为4.78 g/100 g,其中谷氨酸含量最高,为1.03 g/100 g,甘氨酸含量最低,为0.08 g/100 g,必需氨基酸(EAA)为1.81 g/100 g,非必需氨基酸(NEAA)为2.97 g/100 g,EAA/TAA为37.9%,EAA/NEAA为60.9%;脂肪酸主要以不饱和脂肪酸为主,其中主要是单不饱和脂肪酸,占70.58%;多不饱和脂肪酸主要以γ-亚油酸为主,占1.32%;美仁牦牛乳中共检测出34种挥发性风味物质,包括醛类8种,脂类6种,酮类6种,醇类5种,酸类3种以及其他类6种,主要有2,3-丁二酮、乙酸乙酯、异戊醛、2-庚酮、2-丁酮等挥发性物质。 展开更多
关键词 美仁牦牛 营养成分 氨基酸 风味物质
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牦牛IGF2基因克隆及生物信息学分析
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作者 马荣 路建卫 +4 位作者 赵雪 牟亮 扎老 成述儒 梁春年 《中国草食动物科学》 CAS 2023年第5期23-28,共6页
为探究牦牛IGF2基因生物学的特征及结构,利用RT-PCR方法克隆了IGF2基因CDS区,并进行了生物信息学分析。结果表明,IGF2基因共有5个开放阅读框,编码区长540 bp,共编码179个氨基酸。该基因编码的蛋白分子式为C864H1377N251O257S9,分子量为1... 为探究牦牛IGF2基因生物学的特征及结构,利用RT-PCR方法克隆了IGF2基因CDS区,并进行了生物信息学分析。结果表明,IGF2基因共有5个开放阅读框,编码区长540 bp,共编码179个氨基酸。该基因编码的蛋白分子式为C864H1377N251O257S9,分子量为19681.51 Da,原子总数2758个,理论等电点9.11,不稳定系数为59.56,总平均亲水性为-0.184,属于亲水性蛋白。IGF2编码蛋白具有73个磷酸化位点且仅存在于细胞质中。通过系统进化树的构建,发现美仁牦牛在进化过程中相对保守。 展开更多
关键词 美仁牦牛 IGF2基因 克隆 生物信息学分析
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牦牛GOLT1B基因克隆及生物信息学分析
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作者 申金伟 路建卫 +5 位作者 杨文艳 马莉莉 牟亮 扎老 成述儒 梁春年 《中国草食动物科学》 CAS 2023年第5期1-8,共8页
为研究牦牛GOLT1B基因的结构及功能,以美仁牦牛脂肪组织cDNA为模板,克隆牦牛GOLT1B基因的编码区序列(Codingsequence,CDS),并且利用该基因序列进行生物信息学分析、结构域预测及蛋白理化性质预测。结果表明,美仁牦牛GOLT1B基因的CDS区全... 为研究牦牛GOLT1B基因的结构及功能,以美仁牦牛脂肪组织cDNA为模板,克隆牦牛GOLT1B基因的编码区序列(Codingsequence,CDS),并且利用该基因序列进行生物信息学分析、结构域预测及蛋白理化性质预测。结果表明,美仁牦牛GOLT1B基因的CDS区全长417 bp,共编码138个氨基酸;牦牛GOLT1B结构域预测显示,在GOLT1B氨基酸序列的第11~114位有1个Pfam结构域的Got1家族;GOLT1B蛋白预测结果表明,跨膜结构域有3处,分别位于氨基酸序列的第13~30位、第34~56位以及第69~91位,无信号肽区域,其氨基酸分子质量15425.69 Da,原子总数2232个,等电点10.36,不稳定系数25.43,为稳定的蛋白质,脂肪系数117.10,总平均亲水系数1.087,为疏水蛋白,共有10个磷酸化位点;同时,亚细胞定位结果表明,美仁牦牛GOLT1B基因主要分布于细胞外基质和细胞壁中;系统进化树表明:美仁牦牛与野牦牛和欧洲牛的亲缘关系最近。 展开更多
关键词 美仁牦牛 GOLT1B基因 生物信息学分析 系统进化
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